7细胞中P38MAPK表达的影响,从中探讨当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物抗动脉粥样硬化作用的信号转导调控机制。 实验方法: 1.制备当归补血汤煎液及当归黄芪提取部位,并将提取部位相互配比排列组合分组后制备成含药血清。 2.制备氧化低密度脂蛋白。 3.细胞常规培养;台盼蓝染色法检测细胞活力;用MTT法测细胞生长曲线及检测不同浓度对照血清、含药血清对RAW264.7细胞的存活率的影响。 4.免疫印记法检测当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物对氧化低密度脂蛋白激活RAW264.7细胞中P38MAPK表达的影响。 http://www.selleck.cn/p38-MAPK.html 实验结果: 1.运用血清药理学方法将当归补血汤煎液及当归黄芪提取部位组合物制备成含药血清。 2.将冻存的细胞株复苏后,细胞常规培养。台盼蓝染色法检测细胞活力＞95%,可用于实验。用MTT法测细胞生长曲线,选取传代后细胞培养至第四天待细胞生长稳定进行后续实验,每组均选取同样生长条件的细胞从而减少细胞本身的组间差异。兔血清本身对于细胞细胞有一定的营养作用能促进细胞生长,实验中应该尽量减少血清本身对细胞的影响,高浓度的兔血清对细胞生长不利,故选取10%兔血清浓度进行后续实验。
3.免疫印记检测结果显示: P38MAPK蛋白免疫印记检测结果显示:Ox-LDL组蛋白条带光密度比值为5.3167±0.16169,与空白对照组比较差异有意义(P＜0.05),说明Ox-LDL刺激RAW264.7细胞能够明显激活P38MAPK信号转导通路,增强P38MAPK的蛋白活性;抑制剂组与空白对照组比较差异有意义,说明抑制剂SB203580对P38MAPK蛋白活性有抑制作用。当归补血汤和当归黄芪提取部位组合物A组、B组与空白对照组比较差异有意义,说明当归补血汤和当归黄芪提取部位组合物有抑制P38MAPK蛋白活性作用:与Ox-LDL组比较有差异,说明当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物A组、B组能下调P38MAPK蛋白活性;与抑制剂比较有差异,说明抑制剂较当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物组下调P38MAPK蛋白活性作用强。当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物A组、B组比较无统计学意义(P＞0.05),说明当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物在P38MAPK蛋白的表达中无差异。 不 磷酸化P38MAPK蛋白免疫印记检测结果显示:Ox-LDL组蛋白条带光密度比值为5.3767±0.36638,与空白对照组比较差异有显著性意义,说明Ox-LDL刺激RAW264.7细胞能够明显激活P38MAPK信号转导通路,增强磷酸化P38MAPK的蛋白活性;抑制剂SB203580组(1.7233±0.11015)与空白对照组比较差异显著,说明SB203580对磷酸化P38MAPK的蛋白活性有明显的抑制作用。当归补血汤和当归黄芪提取部位组合物A组、B组与空白对照组比较差异有意义,说明当归补血汤和当归黄芪提取部位组合物有抑制磷酸化P38MAPK蛋白活性作用;当归补血汤组(2.8567±0.34559)和当归黄芪提取部位组合物A组、B组与Ox-LDL组比较有差异(P＜0.05),说明当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物能下调磷酸化P38MAPK蛋白活性:与抑制剂比较有差异,说明抑制剂较当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物组下调磷酸化P38MAPK蛋白活性作用强。当归补血汤组与当归黄芪提取部位组合物A组、B组比较有差异(P＜0.05),说明当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物各组均能下调磷酸化P38MAPK的蛋白活性,当归补血汤的作用较当归黄芪提取部位组合物A组、B组明显。当归黄芪提取部位组合物A组与B组之间比较差异无意义(P＞0.05),说明当归黄芪提取部位组合物下调磷酸化P38MAPK的蛋白活性无差别。
实验结论: 100μg/ml的Ox-LDL刺激RAW264.7细胞15min后,可明显激活RAW264.7细胞内的P38MAPK信号转导通路,增强P38MAPK总蛋白和磷酸化P38MAPK的蛋白活性;P38MAPK抑制剂SB203580对P38MAPK的活化有明显的抑制作用;当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物能够抑制P38MAPK蛋白的表达,对磷酸化P38MAPK的活化有一定程度的抑制作用;其中当归补血汤的抑制作用较当归黄芪提取部位组合物明显。本实验证实了当归补血汤可以通过下调P38MAPK的活性从而阻断该通路的级联作用来减轻动脉粥样硬化炎症反应。所以,当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物可能通过下调P38MAPK信号转导通路以调控相关致炎因子的表达进而影响动脉粥样硬化的发生发展,阻断P38MAPK信号转导通路可能是当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物抗动脉粥样硬化损伤的机制之一。
目的:探讨P38
Pifithrinα MAPK在顺铂化疗和热疗诱导肝癌细胞凋亡的机制,以及对正常肝细胞的影响,为临床应用提供实验依据。 方法:通过体外培养正常肝细胞HL-7702、癌旁肝硬化肝细胞QSG-7701和肝癌细胞QGY-7703,应用免疫组织细胞化学、MTT、激光扫描共聚焦显微镜、Western Blot、流式细胞仪和TUNEL法等方法观察顺铂和热诱导对其凋亡的影响,然后加入P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580,再观察顺铂和热诱导对细胞凋亡情况的变化。 结果:P38 MAPK表达从正常肝细胞、癌旁肝硬化肝细胞到肝癌细胞逐渐增高。P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580可以使细胞的凋亡率降低。3株培养细胞加顺铂后凋亡率均明显增加,存活率明显下降,加用P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580后,可使细胞凋亡率下降。3株培养细胞对于顺铂的反应性不同,肝癌细胞最敏感,凋亡率和坏死率最高。热诱导可以使3株培养细胞发生凋亡,其中肝癌细胞最敏感,引起凋亡和坏死的细胞最多。 结论1顺铂诱导细胞凋亡有P38 MAPK通路的参与。 2热诱导可以引起细胞凋亡,这过程中有P38 MAPK通路的参与。 3癌旁肝硬化肝细胞的生物学特性与正常肝细胞和肝癌细胞都不同,属于正处在转化过程中的癌前期细胞,值得进一步研究。
目的探讨甲羟戊酸(Mev)对人系膜细胞(HMC)增殖及丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响及其机制。 方法本研究采用常规体外培养HMC:①随机分为两组,对照组,Mev组。Mev组设1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、1mmol/L 7个浓度段。对促增生最明显的Mev组,分别于12、24、48h检测Mev对HMC的增殖程度。通过MTT法测定Mev对10%胎牛血清刺激的HMC增殖的影响。②随机分为四组,对照组、Mev组、Mev+SB203580组和SB203580组。以酶联免疫吸附法(ELISA)检测Mev刺激后MAPK通路下游TGF-β的表达。以Westernblot法检测Bax和Bcl-2及p38的表达。 结果①Mev对HMC增殖有促进作用,且作用呈一定的浓度依赖性和时间依赖性。②Mev组与对照组相比,TGF-β的表达增高(P＜0.