323,P=0 000)。为进一步证明CD24在蛋白水平的表达,对SW480细胞、转染空载体的细胞、克隆1和4细胞进行了流式细胞术

323,P=0.000)。为进一步证明CD24在蛋白水平的表达,对SW480细胞、转染空载体的细胞、克隆1和4细胞进行了流式细胞术的分析。转染pcDNA3.1(+)空载体的细胞被命名为SW480~(vec),克隆1和4分别被命名为SW480~(CD24+1)和SW480~(CD24+4)。结果提示,CD24在SW480~(CD24+1)和SW480~(CD24+4)的表达量分别是35.00±1.31和51.93±2.71,比SW480和SW480~(vec)细胞具有显著性增加(F=532.400,P=0.000)。 4、CD24过表达引起大肠癌细胞的增殖率显著性增加 SW480、SW480~(vec)和SW480~(CD24+1)细胞接种于96孔板中,分别于接种后24、48、72、96h测定细胞增殖情况。结果提示,与SW480~(vec)和SW480细胞相比,SW480~(CD24+1)细胞的增殖具有显著性增加(F=34.540,P=0.000)。这说明CD24的过表达诱导大肠癌细胞的增殖。 5、CD24的过表达激活ERK1/2、p38 MAPK和Raf-1,而对JNK1/2的活性没有影响 为了阐明CD24促进增殖的机制,我们检测了MAPK家族中关键分子的蛋白水平和磷酸化水平的变化。结果提示,在SW480~(CD24+1)和SW480~(CD24+4)细胞中,ERK1/2和p38

而且 MAPK的磷酸化水平比在SW480和SW480~(vec)细胞中的具有显著性增加(分别是F=24.117,P=0.000和F=41.267,P=0.000),而JNK1/2激酶的活性无显著性差异。研究提示,Raf-1是调节ERK1/2激酶的上游分子。为了明确CD24对ERK1/2激酶的上游分子的影响,我们检测了Raf-1蛋白水平和磷酸化水平的变化。结果提示,Raf-1蛋白表达量和活性均具有显著性增加(F=101.988,P=0.000;F=37.580,P=0.002)。这些结果说明CD24对Raf-ERK通路和p38 Cilengitide购买 MAPK激酶起重要的调节作用。 6、抑制ERK1/2和p-p38 MAPK的活性可抑制CD24诱导的大肠癌细胞增殖 在SW480~(CD24+1)细胞中分别加入不同浓度(0μM、5μM、10μM、20μM)的MEK1/2抑制剂U0126或p38抑制剂SB203580,分别于处理后24h和72h进行检测观察细胞的活性。首先通过Western

bloting验证,ERK1/2和p38 MAPK的激活均被抑制剂所抑制。在抑制剂处理后24h,SW480~(CD24+1)细胞增殖无显著性降低(U0126和SB203580处理组分别为F=1.293,P=0.201和F=2.969,P=0.057);在72h时,细胞增殖均具有显著性降低(U0126和SB203580处理组分别为F=23.59,P=0.000和F=8.428,P=0.001)。为了进一步明确U0126和SB203580对细胞增殖的抑制作用是否具有协同效应,我们用U0126和SB203580同时处理SW480~(CD24+1)细胞,结果提示,二者的抑制作用没有协同作用。这些结果提示抑制ERK1/2和p-p38

MAPK的活性可抑制CD24诱导的癌细胞增殖。 7、CD24在大肠癌组织中高表达,表达强度与大肠癌的分期和分级呈正相关关系 CD24在大肠癌组织中表现为膜表达和浆表达,而在癌旁正常黏膜中几乎没有表达,极少数病例中可见轻度膜表达。CD24膜表达的阳性率为34.9%,表达强度与肿瘤的分级呈负相关(r=13.741,P=0.038),而与肿瘤的进展程度关系不密切。CD24浆表达的阳性率为89.6%,表达强度与肿瘤的进展程度(Duke’s分期)(r=0.269,P=0.005)和肿瘤的分级(r=0.235,P=0.015)呈正相关,而与患者的性别、年龄及肿瘤的部位关系不密切。这说明CD24在大肠癌的发生发展中起重要的作用 并且 8、p-ERK1/2和p-p38在大肠癌组织中高表达,表达强度与大肠癌Duke’s分期及分化程度关系不密切 p-ERK1/2在大肠癌组织中表现为细胞浆表达,而在癌旁正常黏膜组织中没有表达。p-ERK1/2浆表达阳性率为84.0%,表达强度在男性患者高于女性患者(z=-2.454,P=0.014),与肿瘤的进展程度(Duke’s分期)(r=0.125,P=0.203)和肿瘤的分级(r=0.016,P=0.874)无相关关系,与患者的年龄和肿瘤的发生部位关系也不密切。 p-p38 MAPK在大肠癌组织中表现为浆表达和核表达,而在癌旁正常黏膜中没有表达。p-p38 MAPK核表达的阳性率为24.5%,浆表达的阳性率为78.3%,表达强度与肿瘤的进展程度(Duke’s分期)(r=0.150,P=0.125)和分级(r=0.071,P=0.472)无相关关系,与患者的年龄、性别、肿瘤的部位关系也不密切。这提示p-ERK1/2和p38 MAPK激酶在大肠癌中处于激活状态,可能参与了大肠癌的生物学功能。 9、在大肠癌组织中,ERK1/2和p38 MAPK的激活与CD24的浆表达呈正相关关系 为了明确CD24和p-ERK1/2、p-p38 MAPK在组织中的关系,我们对106例大肠癌组织标本进行连续切片,同时对三个分子进行染色分析。结果提示,p-ERK1/2的表达和CD24浆表达呈正相关关系(r=0.571,P=0.000),p-p38 MAPK的浆表达和CD24浆表达也呈正正相关关系(r=0.528,P=0.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *

*

You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>