主要方法 1.实验动物和细胞培养 6周龄裸鼠在实验动物中心饲养，所有动物实验均通过伦理委员会批准后执行。肝癌细胞Hep3B细胞培养Hep3B细胞培养基选用含10%FCS的DMEM低糖培养基，在温度为37°C、湿度95%，含5%CO2的细胞培养箱中培养。 2.重组腺病毒载体pAd-siRNA/FAT10的构建与鉴定 EPZ-6438溶解度从GenBank中获得FAT10的互补DNA序列，在Ambion公司的网站设计工具在线设计并合成针对FAT10的siRNA序列，然后亚克隆穿梭质粒pDC315并测序，酶切线性化后，与腺病毒骨架质粒pBHG1oXE1,3Cre及DOTAP脂质体共培养进行同源重组，转染HEK293细胞,包装得selleck到粗提腺病毒pAdsiRNA/FAT10。经过多轮氯化铯密度梯度纯化。标准空斑试验测定病毒液的滴度和感染效率，然后，FAT10的表达在mRNA和蛋白质水平通过RT-PCR和免疫印迹测定法(western blot)进行检测。 3.SiRNA沉默FAT10基因对Hep3B肝癌细胞的增殖、克隆时间形成、细胞周期及凋亡的影响 (1)采用MTT比色测定法分别检测Hep3B细胞增殖情况。Hep3B细胞以5×103/孔接种于96孔板中，过夜培养。分别用Ad-siRNA/FAT10(1×109PFU)或对照组处理24小时，加MTT溶液(5mg/ml)培养48h，然后在A490处测定光密度(OD)值。细胞增殖抑制率(％)=1-(实验样品OD值/对照组OD值)×100％。