以金柑基因组DNA为模板,采用正交优化试验设计方案,对dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA用量、Mg~(2+)浓度、Taq DNA聚合酶浓度设计5因素4水平试验,采用极差分析法、方差分析法和Duncan多重比较法对试验结果进行分析。结果表明 利用供试的5个金柑品种验证试验效果,21条CDDP通用引物均可扩增出多态性条带。最佳反应体BAY 11-7082系为 dNTPs浓度为0.15 mmol·L~(-1),引物浓度为1.0μmol·L~(-1),模板DNA用量为120 ng,Mg~(2+)浓度为1.5 mmol·L~(-1),Taq DNA聚合酶浓度为0.25 U,剩余体积用ddH_2O补足至20μL。各因素对反应体系影响从大到小依次是dNTPs>引物Tozasertib临床试验>模板DNA>Mg~(2+)>Taq DNA聚合酶。
胚发育直接影响花生的产量与品质，钙对花生生长发育极其重要，土壤中钙不足可导致花生不饱满或空壳。为了获得花生胚发育的关键基因，从而进一步了解钙调控花生胚发育的分子机制，本研究采用低钙与高钙条件下花生果针入土后15 d、20 d和30 d的胚为材selleck料，用SMART (switching mechanism at 5’ end of the RNA transcript)与均一化技术构建了低钙与高钙条件下混合的花生胚全长cDNA文库。鉴定结果表明，文库库容量达到1.5×10~(6 )cfu/mL，插入片段主要分布在500～2 000 bp之间，重组率为98%，冗余度为0，文库质量较好，为后续筛选调控花生胚发育的关键基因提供了基础。