白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩，伸出长突起，类似神经元。免疫荧光显示MSCs及对照组细胞表达神经元NSE蛋白，诱导后细胞NSE、MAP-2蛋白阳性，但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。免疫印迹显示MSCs及对照组细胞轻度表达nestin、NSE蛋白，随着诱导时间延长，nestin的表达渐减弱，NSE和MAP-2的表达渐增强，但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。 Necrostatin-1订单 2.正常培养的MSCs不表达初级纤毛。经过预诱导或饥饿处理24h后，MSCs表达初级纤毛、蛋白Ptc1、Smo和Gli1，其中Smo和Gli1位于胞浆，Ptc1位于初级纤毛。白藜芦醇诱导后，Smo从细胞浆进入初级纤毛，Gli1从细胞浆进入细胞核，同时，Smo、Gli1蛋白的表达增加。在正常培养时，白藜芦醇不能促使Smo移位以及MSCs向神经元样细胞分化。当MSCs表达初级纤毛时，白藜芦醇以及Smo激动剂SAG可使Smo从胞浆进入初级纤毛，同时伴随MSCs向神经元样细胞的分化和蛋白Smo、Gli1的表达增强；加入抑制剂环杷明后，Smo仍主要表达于胞浆，蛋白Smo、Gli1的表达降低，MSCs向神经元样细胞的分化受抑制。
结论：1.白藜芦醇在体外可诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞。 2. MSCs表达初级纤毛并存在Shh信号，初级纤毛介导Shh信号调控MSCs的神经元样细胞分化。
目的胃癌在我国的发病率呈持续上升趋势,严重影响人类健康。目前研究证实, Hedgehog(Hh)信号通路可通过调控细胞周期，粘附侵袭，血管形成，凋亡等细胞事件参与多种肿瘤的的发生进展,胶质瘤相关癌基因1（Glioma-associated oncogene homolog，Gli1）作为该通路的效应因子,成为评价该通路活化程度的关键因子。血小板源性生长因子-D（Platelet-derived growth factor D，PDGF-D）作为强烈的促肿瘤血管形成因子，已被证实在多种肿瘤中异常高表达。但是Hh信号通路是否可以通过调控PDGF-D的表达来影响肿瘤血管形成尚不明确。本研究拟通过使用Hh信号通路特异阻断剂环巴明（Cyclopamine）处理胃癌SGC-7901细胞，观察处理前后Gli1和PDGF-D的mRNA和蛋白水平的变化及癌细胞体外形成血管管腔样结构的能力，来探讨Hedgehog信号通路调控肿瘤血管形成的可能机制。 方法常规培养人胃癌SGC-7901细胞和人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell，HUVEC），将SGC-7901细胞分为对照组A（未给药）、实验组B（环靶明终浓度5μmol/L）及实验组C（环靶明终浓度10μmol/L），培养48h后，免疫荧光检测各组Gli1和PDGF-D在SGC-7901细胞中的表达；通过小管形成试验和血管拟态试验检测细胞处理前后血管形成能力的变化； 确认细节 RT-PCR和Western-Blot检测细胞处理前后Gli1、PDGF-D的mRNA和蛋白表达变化，并对二者mRNA和蛋白表达水平进行相关性分析。
结果Gli1和PDGF-D在各组SGC-7901细胞中均有表达；实验组SGC-7901细胞的体外血管形成能力较对照组下降，且呈剂量依赖性，差异具有统计学意义（P<0.05）；实验组Gli1和PDGF-D的mRNA和蛋白表达较对照组均受到显著抑制，差异具有统计学意义（P
研究背景： 目前食管癌（Esophageal cancer）是全世界最常见的恶性肿瘤之一，在我国尤为突出，是发病率最高的国家。食管癌恶性程度高，且大部分患者得到临床确诊后已属晚期，预后极差，对于早期患者手术尽管是目前治疗的首先方式，但手术后容易复发及转移。癌细胞早期容易侵袭转移是其主要原因，另外，术后缺乏敏感的抑制肿瘤细胞的药物，常用的化疗药物靶向效应不强，副反应较重等也是食管癌患者生存率较低的重要原因之一。Hedgehog（Hh）信号通路由Hh-Ptch-Smo-Gli级联构成，当Hh蛋白配体与膜受体Ptch结合时，可以消除膜受体Ptch对Smo的抑制效应， LDN193189 Smo的激活又可进一步激活核转录因子Gli，从而诱导下游目标基因的表达。近年研究显示Hh信号通路与人类乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌等多种肿瘤的发病及转移密切相关，食管癌的Hh通路高度激活也已得到证实，但Hh通路与食管癌细胞转移能力的关系却缺乏深入的研究。已证实血管内皮细胞生长因子（VEGF）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与食管癌的发生、发展、转移密切相关，也有研究表明二者与Hh通路有密切联系，但具体作用机制的研究仍处于初级阶段。
目的： 本实验以食管癌EC109细胞系为研究对象，利用Hh信号通路特异性阻滞剂环巴胺（Cyclopamine）处理EC109细胞，然后观察细胞转移能力的变化及转移相关因子MMP-9、 VEGF蛋白表达水平的影响，并分析其可能的机制，为临床食管癌靶向药物的研究提供理论与实验依据。 方法： 1.培养EC109细胞为实验对象，用Hh信号通路特异性阻滞剂环巴胺（Cyclopamine）作用EC109细胞后，MTT法观察环巴胺对EC109细胞的抑制作用，并计算出相应的半数抑制率（IC50）。 2. Transwell小室法观察经环巴胺处理后EC109细胞的迁移、侵袭能力的变化。 3.体外血管生成实验观察环巴胺对EC109细胞在体外血管形成能力的影响。 4. RT-PCR方法检测食管癌细胞经环巴胺处理后的Gli-1mRNA表达变化。 5.Western blot方法检测食管癌细胞经环巴胺处理后Gli-1、MMP-9、VEGF蛋白的表达变化。 结果： 1.环巴胺处理EC109细胞后可以抑制其增殖及生长，细胞由饱满的梭形贴壁生长状态转变为轮廓不清的圆钝半贴壁状态，在一定浓度下抑制率随浓度增高而增大且具有相关性，且干预的时间越长，其抑制率也随之加大，在相当的范围内具有药物作用时间和作用浓度依赖性。作用2天后的IC50为12μmol/L。 2.在Transwell小室实验中我们发现，环巴胺阻断Hh信号通路后，与对照组相比，食管癌细胞的体外迁移、侵袭及血管形成能力显著下降，迁移出小室微孔膜的细胞数明显减少（32.80±6.77）vs（98.40±10.08），侵袭穿膜细胞数也明显减少（26.20±4.58）vs（83.40±8.65）；血管形成数减少（8.60±2.70）vs（19.40±4.