整体试验：构建小鼠哮喘模型。Balb/c小鼠在第0天与第14天用10μg/只小鼠的卵白蛋白(OVA)与2mg氢氧化铝混溶后皮下注射于小鼠的脚掌、颈部、背部与腹股沟致敏。在第22-28天,将小鼠放置于有机塑料盒内,用雾化吸入器气道雾化吸入30分钟的OVA抗原(10mg/mL).第29天治疗组气道滴入给药3h后,用整体体积描记系统测定气道反应性,分别用3.125、6.25、12.5、25、50mg/mL的乙酰甲胆碱雾化吸入激发,测定相应浓度下气道呼气间歇(Penh)值。之后取肺泡灌洗液进行细胞计数,取左上肺提取mRNA。 Ki16425化学结构 2.离体试验：MTT法检测环索奈德代谢物与福莫特罗对RBL-2H3细胞活性的影响。用抗原抗体复合物诱导RBL-2H3细胞构建肥大细胞炎症模型。用实时RT-PCR和ELISA检测IL-4,
IL-13mRNA和蛋白的表达。用Western Blot检测JNK信号通路。 结果： 1.整体实验结果： 1)在OVA诱导的小鼠哮喘模型中,环索奈德和福莫特罗可分别呈剂量依赖性的抑制乙酰甲胆碱(3.125-50mg/mL)诱导的Penh值的增加。2)环索奈德(0.3mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28μg/kg)联用对乙酰甲胆碱(6.25-50mg/mL)引起的Penh值升高,与单剂量相比具有协同抑制作用；环索奈德(1mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28ug/kg)联用对乙酰胆碱(3.125-50mg/mL)引起的Penh值升高,与单剂量相比无明显的协同抑制作用。3)环索奈德和福莫特罗可分别呈剂量依赖性的抑制哮喘小鼠肺部炎症细胞的增多。4)环索奈德(0.3,1mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28μg/kg)联用,与单剂量相比对哮喘小鼠肺部炎症的增多有明显的协同抑制作用。5)福莫特罗对哮喘小鼠肺组织中IL-4mRNA表达的升高呈计量依赖性抑制；环索奈德在浓度0.3mg/kg时对IL-4mRNA表达的升高有显著抑制作用；环索奈德(1mg/kg)分别与福莫特罗(14,28ug/kg)联用对IL-4mRNA表达的升高有协同抑制作用。
因为 2.离体实验结果：1)高浓度环索奈德代谢物(10-8-10-4M)可引起细胞毒性反应降低RBL-2H3细胞活性,而福莫特罗(10-12-10-4M)对细胞活性无明显影响。2)DNP-BSA (100ng/mL)刺激表面结合IgE (200ng/mL)的RBL-2H3细胞可显著诱导炎症因子IL-4和IL-13表达的增多。3)环索奈德代谢物(0.1-10nM)与福莫特罗(0.1-10μM)均可呈剂量依赖性的抑制DNP-BSA诱导的IL-4和IL-13表达的增多。4)环索奈德代谢物(0.2nM)与福莫特罗(1州)联用与单剂量相比,对DNP-BSA诱导的IL-4的产生有显著协同抑制作用；对IL-13和组胺的产生无显著协同抑制作用。5) 点击此处 MAPK通路中JNK通路抑制剂SP600125(10μm)可显著抑制DNP-BSA诱导的IL-4表达和分泌,而P38和ERK通路抑制剂对IL-4产生无明显抑制作用。6) IgE-BSA复合物可诱导JNK磷酸化,在刺激20min时磷酸化最多。7)环索奈德代谢物(0.1-10nM)与福莫特罗(0.1-10μM)均可呈剂量依赖性的抑制DNP-BSA诱导的JNK磷酸化。8)环索奈德代谢物(0.2nM)与福莫特罗(1μM)联用与单剂量相比,对DNP-BSA诱导的JNK磷酸化有显著协同抑制作用。
结论： 1)在小鼠的哮喘模型中,环索奈德与福莫特罗的联用对于乙酰甲胆碱诱导的气道高反应性和炎症的产生,具有协同抑制作用。 2)在抗原抗体复合物介导的RBL-2H3炎症细胞模型中,环索奈德代谢物与福莫特罗联用对炎症因子IL-4的产生有协同抑制作用；抑制MAPK的JNK通路可能是其机制之一。
目的： 支气管哮喘(bronchial asthma,简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的以可逆性气流受限为特征的气道慢性炎症性疾病。主要表现为气道炎症、气道重塑以及气道高反应性(AHR)。AHR是哮喘的重要特征之一,主要是由气道平滑肌(ASM)的异常过度收缩引起,是引发咳嗽、胸闷、呼吸困难和喘息等症状的主要原因。一般认为,存在于哮喘患者气道的炎症介质可使气道高反应性增高,导致气道平滑肌(ASM)的异常收缩,诱发哮喘急性发作或者重度哮喘发作。p2受体激动剂作为控制哮喘发作症状的首选药物,主要通过与ASM上肾上腺素能受体结合而活化一系列信号通路,引起ASM的舒张。然而,部分患者在使用β2受体激动剂后并不能取得理想的疗效,其中机制众说纷纭,有研究者认为是炎症因子促进了ASM的收缩而影响了p2受体激动剂的疗效,也有研究者认为炎症因子直接作用于ASM引起p2受体激动剂对ASM舒张作用减弱或通过下调ASM表面p2受体的表达量而削弱了其舒张作用。近年来发现,许多炎症细胞因子与AHR有关,其中包括IL-17。IL-17是Th17细胞分泌的细胞因子,与许多炎症反应和自身免疫性疾病的发生和发展有关。早期研究发现,哮喘患者血清、痰液以及支气管肺泡灌洗液(BALF) IL-17中的浓度较正常人明显升高,而且其表达水平与病情以及气道反应性相平行。最近,M.