1 mmol/L、20 mmol/L的葡萄糖中培养24h后,高糖组(11.1mmol/L和20mmol/L)与低糖组(3mmol/L和7mmol/L)相比,前者完全磷酸化形式的MafA(p-MafA)和insulin 2 mRNA表达均降低(P﹤0.05),而insulin 1 mRNA表达无显著差异(P﹥0.05)。(2)大鼠INS-1细胞在0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的GSK3抑制剂中培养24h后,50μmol/L和100μmol/L的GSK3抑制剂组与对照组(0μmol/L)相比, MafA蛋白完全磷酸化形式降低(P﹤0.05),低磷酸化形式显著增加(P﹤0.05);同时insulin 2 mRNA表达均显著降低(P﹤0.01),分别下降了31.45%和46.77%,insulin 1 mRNA表达差异无显著性(P﹥0.05)。 结论(1)转录因子MafA调节大鼠insulin 2基因而非insulin
1基因的转录。(2)MafA在葡萄糖调节胰岛素基因表达中发挥重要作用,葡萄糖毒性可能通过抑制转录因子MafA而降低insulin 2基因表达。(3)大鼠INS-1细胞中,GSK3可能通过磷酸化MafA蛋白,进而促进insulin 2基因表达。(4)大鼠INS-1细胞中,转录因子MafA可促进胰岛素基因的转录。
目的:低甲状腺腺素被认为与病人重症监护期的短期死亡率和心脏疾病的长期死亡率密切相关。本实验探讨对离体培养乳鼠心肌细胞在缺氧复氧前短期给予三碘甲状腺原氨酸(T3)是否能减少未成熟心肌的细胞凋亡,而这种减少是否受缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白的表达和Cx43蛋白构成通道功能变化的影响。方法:通过高密度培养原代心肌细胞形成可见的细胞紧密连接,于缺氧复氧前短期加入不同浓度的T3(50ng/ml,1ng/ml,0.02ng/ml)及Cx43蛋白构成通道失耦联剂庚醇后通过流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,并用Western
为什么 LY294002订单 blotting检测T3对Cx43的蛋白表达的调控,最后用划痕示踪法检测心肌细胞间缝隙连接功能变化的影响。 结果:短期的各浓度T3干预均可减少心肌细胞的凋亡,而缝隙连接失耦联剂庚醇可减弱这种保护效应,T3可以上调Cx43的蛋白表达。短期给予各浓度T3对缝隙连接通信功能的无明显影响,而庚醇可以减弱缝隙连接的通信功能。 结论:三碘甲状腺原氨酸对培养未成熟心肌细胞遭遇缺氧复氧凋亡具有保护作用,而其作用的机制不局限于细胞间的缝隙连接,而可能在与心肌细胞的线粒体Cx43蛋白构成通道变化有密切关系。
目的：观察七氟烷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤是否具有保护作用,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases, p38 MAPK)信号传导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤中的意义。 方法：取出生1-3天的Sprague-Dawley (SD)大鼠心脏,利用酶消化法分离心肌细胞。通过倒置相差显微镜观察培养细胞的生长状态,并采用a-actin免疫细胞化学法鉴定培养细胞类型及心肌细胞特征。制作心肌细胞缺氧／复氧模型和七氟烷后处理模型,并将培养乳鼠心肌细胞随机分为7组：(1)正常对照组(Control组)细胞于C02培养箱中持续培养3h。(2)缺氧／复氧组(A／R组)细胞缺氧2h,复氧1h。(3)七氟烷后处理组(S-post组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min。(4)七氟烷后处理+SB203580组(S-post+SB组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min,并在七氟烷后处理同时给予p38 MAPK抑制剂SB203580(终浓度为5μmol/L;溶解于终浓度为0.1%的DMSO),持续20min。(5)七氟烷后处理+二甲亚砜组(S-post+DMSO组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min,并在七氟烷后处理同时给予SB203580溶剂DMSO(终浓度为0.1%),持续20min。(6)SB203580组(SB组)细胞缺氧2h,复氧1h,并在复氧同时给予SB203580(终浓度为5μmol／L；溶解于终浓度为0.1%的DMSO),持续20min。(7)二甲亚砜组(DMSO组)细胞缺氧2h,复氧1h,并在复氧同时给予DMSO(终浓度为0.1%),持续20min。实验结束时各组分别用比色法检测乳酸脱氢酶(lactate
而且 dehydrogenase, LDH)活性、肌酸激酶(creatine kinase, CK)活性,台盼蓝排斥实验检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并提取细胞蛋白,应用Western blot检测]p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)蛋白水平。 结果：成功培养出大鼠心肌细胞并经免疫组化鉴定证实,细胞数量达到实验要求。与Control组相比,A／R组LDH和CK活性升高、细胞存活率降低、流式细胞仪检测细胞凋亡率升高(P<0.05)。与A／R组相比,S-post组LDH和CK活性降低、细胞存活率提高、流式细胞术检测细胞凋亡率降低(P<0.05)。与S-post组相比,S-post+SB组LDH和CK活性升高、细胞存活率降低、流式细胞仪检测细胞凋亡率升高(P0.05)。各组间p38 MAPK水平差别无统计学意义(P>0.05),与A／R组相比,S-post组p-p38 MAPK蛋白水平升高(P<0.05)。SB组p-p38水平低于A／R组(P0.