采用Western blot检测Pim-1和C-myc蛋白表达情况。 结果:初诊MM患者的Pim-1mRNA及蛋白水平在初诊骨髓瘤患者表达强度显著高于对照组。初诊MM患者的C-myc mRNA及蛋白水平在初诊骨髓瘤患者表达强度显著高于对照组。 结论:Pim-1及C-myc在MM中高表达，与对照组相比差异有显著性，与多项临床指标及分期有关，可能通过多种途径促进骨髓瘤细胞的生长而抑制其凋亡，且二者在多发性骨髓瘤的发生发展中可能具有协同作用。
0-GlcNAc修饰是一种广泛存在于细胞核和细胞质中的翻译后修饰过程,参与多种生理代谢进程。至今,人们对O-GlcNAc修饰位点附近底物蛋白特征还不甚了解。为了解决这个问题,本课题采取生物信息学分析和实验生物学相结合的研究方法,对修饰位点附近蛋白结构,氨基酸序列特征进行了较为深入的分析。首先,我们对38个O-GlcNAc修饰位点处蛋白结构进行分析,发现糖基化修饰主要发生在无规则卷曲和铰链区,这表明一级序列在O-GlcNAc修饰中占有至关重要的地位。另外,我们对317条来自人、大鼠和小鼠的O-GlcNAc修饰肽序列做了频度分析,发现一特征序列：PPVS/TSATT.以此序列为基准,我们设计许多肽序列来揭示修饰位点附近氨基酸的偏好性：在-2、-1和+2位不带电荷的小侧链氨基酸表现比较高的反应活性。最后,我们在O-GlcNAc修饰蛋白a-crya上通过定点突变和Western 所以 Blot验证了这一规律。 综合这些研究结果,我们发现在-2位是脯氨酸或者丙氨酸,在-1位是缬氨酸、丙氨酸、苏氨酸或丝氨酸,在+2位是丙氨酸、丝氨酸、脯氨酸、苏氨酸或甘氨酸时底物蛋白(多肽)表现出比较高的反应活性。这些研究结果将有助于更好的预测蛋白质的糖基化位点以及开展更深入的功能研究。

另外,我们还开展了受体广泛性研究,借助噬菌体展示和ELISA技术,从30个噬菌体克隆中筛选出4条可能会发生O-GlcNAc修饰的肽序列,但这还需要进一步实验验证。
胃癌(GC)是严重危害人类健康的常见肿瘤之一,在全球癌症死亡率仅次于肺癌居第二位,胃癌发病率存在明显的地域差异,在部分亚洲国家、欧洲中部、美国中部和南非发病率较高,尤其是日本、韩国和中国东亚三国为高发地区,其发病总数约占全球总数的2/3。在中国胃癌发病率和死亡率均居恶性肿瘤的首位。在我国每年有近30万人死于胃癌,另有约40万新发病例。传统治疗例如手术治疗、放疗、化疗在胃癌的早期阶段发挥重要作用,晚期胃癌病人主要采用联合治疗的方式,但是晚期胃癌病人总的生存期仍不尽如人意。更好了解胃癌发生机制,采用新的治疗手段对晚期胃癌来说是非常必要的。 Fludarabine 目前研究表明,胃癌组织和细胞很多基因发生了突变,例如：HER-2过表达、EGFR过表达、PIK3CA突变和PTEN缺失。HER-2在10%-38%胃癌样本中高表达；EGFR在27%-44%胃癌样本中高表达。这两个受体被激活以后形成同源或异源二聚体,然后激活PI3K-Akt-mTOR信号通路和Ras-Raf-MEK-ERK信号通路。PI3K-Akt-mTOR信号通路在胃癌中经常被激活,PIK3CA在4%-36%的胃癌病例中发生了激活突变,PTEN在20%-36%胃癌病例中发生了缺失。由于上游受体的过表达、PIK3CA激活突变和PTEN缺失,导致29%-86%胃癌病人持续激活p-Akt和47%-64%胃癌病人持续激活p-mTOR。Ras-Raf-MEK-ERK信号通路是HER家族下游的一条重要的信号通路。在胃癌中K-RAS在2%-20%胃癌病例中发生了突变,B-RAF在0%-2.7%胃癌病例中发生了突变。这两个信号通路在细胞的增殖和存活中发挥重要作用。关于晚期胃癌的靶向治疗也主要集中在HER信号通路、PI3K-Akt-mTOR信号通路和Ras-Raf-MEK-ERK信号通路。曲妥珠单抗己被批准用于HER-2+晚期胃癌的一线治疗。西妥昔单抗、帕尼单抗、拉帕替尼和依维莫司处于临床Ⅲ期阶段。

WYK431是新型喹唑啉衍生物,前期研究表明,其对多种肿瘤细胞株均有较好的生长抑制作用。其中对人胃癌BGC823细胞最敏感,48h

Alisertib分子重量 IC50为2.16μM,但机制不明。本研究,我们评价了WYK431对人胃癌BGC823细胞体内抗肿瘤活性,并对其作用机制进一步研究。皮下异体移植胃癌BGC823细胞的BALB/c裸鼠分别给予5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg WYK431治疗。结果显示5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg WYK431治疗组与对照组相比抑瘤率分别为28.4%、41.9%和63.6%(p
目的 观察胃泌素、曲妥珠单抗对胃癌细胞的协同增殖抑制作用,并研究胃泌素受体(Cholecystokinin B receptor, CCKBR)及其下游分子信号通路在协同抗肿瘤作用中的分子生物学机制。 方法： 1.在NCI-N87、SGC7901两种胃癌细胞株中,通过细胞计数及克隆形成实验观察胃泌素、曲妥珠单抗对HER2阳性及HER2阴性胃癌细胞株的协同抗肿瘤作用,并通过流式细胞术观察二者对细胞周期的调控作用。 2.在SGC7901细胞株中,予以胃泌素、曲妥珠单抗单药及联合用药处理后提取蛋白Western-blot检测CCKBR、AE1、AE2、P16、CyclinD1、β-catenin等相关蛋白表达水平改变,并通过核浆分离实验观察p16蛋白在细胞浆、细胞核中的定位改变,研究CCKBR,及其下游分子信号通路在协同抑制胃癌细胞增殖中所起的作用。 3. Western-blot检测胃泌素、曲妥珠单抗对SGC7901、NCI-N87细胞中CCKBR蛋白表达的影响:通过Realtime-PCR了解二者对CCKBR蛋白表达调控的机制,并通过CHX、MG132实验验证二者对CCKBR蛋自稳定性及泛素化水平的影响并阐明其协同上调CCKBR的分子生物学机制。在SGC7901中转染pEGFP-CCKBR带GFP标签的XKBR过表达载体,进一步观察二者对CCKBR的膜定位的影响。 4.通过建立裸鼠成瘤在体模型观察胃泌素、曲妥珠单抗的协同抗肿瘤作用,绘制肿瘤生长曲线；并取裸鼠荷瘤组织开展免疫组织化学染色分析,观察CCKBR的表达及膜定位的影响,提取蛋白后Western-blot检测AE1、AE2、P16、CyclisD1等蛋白表达改变,在体研究胃泌素、曲妥珠单抗通过上调CCKBR抑制胃癌细胞增殖的分子生物学机制。 结果： 1.7种胃癌细胞株及永生化的正常的人类胃粘膜上皮细胞株GES-1中只有NCI-N87表达HER2蛋白,而CCKBR在大部分胃癌细胞株中均表达阳性。 2.曲妥珠单抗对HER2阳性的NCI-N87细胞有明显增殖抑制作用,对HER2阴性的SGC7901细胞无效。胃泌素对SGC7901、NCI-N87细胞均有增殖抑制作甩,细胞计数及克隆形成实验证实在NC1-N87、SGC7901细胞中,胃泌素、曲妥珠单抗联合用药与单药组相比有明显协同肿瘤增殖抑制作用。流式细胞术提示胃泌素、曲妥珠单抗可协同阻滞SGC7901细胞于G0/G1期。 3.