体外培养支气管上皮细胞(16HBE),分别用无菌的MEM、不同浓度的NiS (1.0-8.0μmol/L)、NiS (2.0μmol/L)+扶正解毒(FJD)含药血清(低、中、高剂量组、空白血清组)处理细胞24h,用台盼蓝法检测支气管上皮细胞的存活率。取对数生长期的16HBE细胞接种于24孔培养板内,6×106个／孔,每个剂量设5个复孔,按实验分组分别加入受试物,继续培养24h,各组细胞弃去上清液,每孔加入500μl细胞裂解液,冰上放置30min,将裂解液作用后的各组细胞转移至Eppendorf管,离心20min,取上清液进行谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)活性检测。将受试物处理后的各组细胞以PBS反复洗涤细胞,直至显微镜下大部分细胞已超声破碎,进行超氧化歧化酶(SOD)活性的检测。用考马斯亮兰蛋白测定法,用分光光度计测定波长595nm处吸光度OD值,计算蛋白含量,结合蛋白浓度计算16HBE细胞(细胞处理方法同前)内丙二醛(MDA)含量。2.将16HBE细胞接种于25ml培养瓶中,每孔接种的细胞数为6×106,培养24h后,用NiS

(1-5.0μmol/L)染毒,并用无菌的MEM、NiS (2.0μmol/L)+不同剂量FJD含药血清、空白血清、以及三种抑制剂,磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、磷酸化氨基未端蛋白激酶(P-JNK)处理细胞24h,无菌PBS洗涤细胞2次,胰酶消化后制成细胞悬液,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹杂交(Western Epigenetics合成 Library制造商 blot)法观察各组细胞中磷酸化ERK、P38和JNK的表达。3.将16HBE细胞用无菌的MEM、不同浓度的NiS (1.0-4.0μmol/L)、NiS (2.0μmol/L)+FJD含药血清(低、中、高剂量组)处理细胞24h后,用免疫组化法检测各组细胞中核转录因子(NF-κB)κB的活性,并进行半定量分析,用RT-PCR法测定支气管上皮细胞中NF-κB P65的表达。本次实验采用SPSS13.0统计软件进行相关分析,多组间比较采用方差分析,两组之间的比较采用T检验,P0.05)。NiS能明显激活细胞P-JNK的表达(P0.05),阴性对照组细胞中P-ERK1表达值为0.210,NiS浓度分别为1、2、4.0μmol/L,染镍组细胞中P-ERK1表达值分别为0.216、0.219、0.226,FJD低、中、高剂量含药血清组和P-ERK1抑制剂对磷酸化P-ERK1的表达无明显影响(P>0.05)。4.NiS能明显激活NF-κB和NF-κB

GDC973 P65的表达(P
第一部分 P38 MAPK在变应性鼻炎大鼠鼻腔粘膜中的表达 目的：探讨p38 MAPK蛋白及mRNA在变应性鼻炎大鼠和正常对照大鼠鼻腔粘膜中的表达情况。 方法：建立SD大鼠变应性鼻炎动物模型,采用免疫组织化学染色法检测p38MAPK蛋白在变应性鼻炎组大鼠和正常对照组大鼠鼻腔黏膜中的表达差异,采用实时荧光定量RT-PCR检测两组大鼠鼻腔黏膜p38 BMS-907351订单 MAPK mRNA表达水平。 结果：免疫组化染色结果显示p38 MAPK在变应性鼻炎组大鼠鼻腔黏膜中的表达较正常对照组大鼠明显增高(P＜0.05)。实时定量RT-PCR检测结果显示p38 MAPK mRNA在变应性鼻炎组大鼠鼻腔黏膜中表达较正常对照组明显增高(P＜0.05)。 结论：p38 MAPK在变应性鼻炎大鼠鼻腔黏膜中表达水平增高,提示p38 MAPK可能参与了变应性鼻炎的发病过程。 第二部分 P38 MAPK在变应性鼻炎大鼠PBMCs中的表达及对Th2类细胞因子的调控作用 目的：探讨变应性鼻炎大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中p38 MAPK蛋白及mRNA的表达情况,同时探讨p38 MAPK特异性抑制剂SB 239063对外周血单个核细胞Th2类细胞因子IL-4,IL-5表达的影响。 方法：建立变应性鼻炎大鼠模型,通过心脏穿刺获取外周血,采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMCs,实时荧光定量RT-PCR检测大鼠外周血单个核细胞p38MAPK

mRNA的表达。Western blot检测外周血单个核细胞p38 MAPK蛋白的表达水平及活性情况。PBMCs在不同浓度p38 MAPK特异性抑制剂SB 239063作用下培养后,ELISA检测细胞上清液中IL-4, IL-5蛋白表达水平。 结果：结果显示变应性鼻炎组大鼠p38 MAPK mRNA的表达量及蛋白总表达量明显高于对照组(P＜0.05),AR组大鼠磷酸化p38 MAPK(代表p38 MAPK的活性)表达量较对照组升高,磷酸化p38 MAPK与总p38 MAPK的比值也较对照组明显增高(P
目的1.研究正常妊娠、子痫前期胎盘组织中神经激肽B(neurokinin B, NKB)及其受体(neurokinin B receptor, NKR)在蛋白和mRNA水平的表达,以及正常妊娠、子痫前期孕妇血浆中神经激肽B的含量,籍此探讨神经激肽B和子痫前期的关系； 2.研究活化状态的p38MAPK蛋白在正常与子痫前期胎盘中的表达,探讨NKB与p-p38MAPK表达的相关性。 方法选择正常妊娠、轻度子痫前期、重度子痫前期患者各20例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测孕妇血浆中NKB含量；采用伊红—苏木素(HE)染色,光镜观察正常妊娠和子痫前期胎盘结构的病理学改变；用免疫组织化学检测胎盘组织中NKB/NKR、p38MAPK蛋白的定位及定量表达；用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerasechain reaction, RT-PCR)检测胎盘组织中NKB/NKR mRNA的表达。 结果1.轻度及重度子痫前期孕妇血浆中NKB水平明显高于正常孕妇； 2.