5μmol/L、1μmol/L和2μmol/L亚砷酸钠处理12小时和24小时后MDM2、p53和丝氨酸15位磷酸化的p53蛋白的表达水平,并且与5-Fu和紫外线处理作比较。采用细胞免疫荧光染色法研究砷剂处理前后p53蛋白的亚细胞定位及细霉素B和Nutlin-3预处理对其影响。 结果:低浓度砷剂上调了角质形成细胞中MDM2蛋白的表达,但对p53蛋白表达无明显影响。随着低浓度砷剂剂量的逐渐增加,MDM2蛋白的表达水平亦逐渐增加;随着砷剂作用时间的逐渐增加,MDM2蛋白的表达水平也逐渐增强。低浓度砷剂处理后角质形成细胞p53蛋白主要分布在胞浆。细霉素B和Nutlin-3预处理可以阻断砷剂诱导的p53胞浆分布。先用低浓度砷剂处理角质形成细胞后再加5-Fu刺激,此时5-Fu激活p53功能受到明显的抑制。 结论:低浓度砷剂呈剂量和时间依赖性上调角质形成细胞中MDM2蛋白的表达;低浓度砷剂可经由上调MDM2蛋白表达介导p53的胞浆分布;低浓度砷剂诱导的p53胞浆分布导致p53功能性失活。 第二章低浓度砷剂上调MDM2的机制探讨 目的:探讨低浓度砷剂上调MDM2表达的作用机制。

方法:构建pGL3-MDM2基因启动子报告基因表达载体,采用荧光素酶报告基因分析方法观察亚砷酸钠对MDM2基因P1、P2启动子转录活性的影响。应用1μmol/L和2μmol/L亚砷酸钠处理皮肤角质形成细胞24h后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MDM2 LEE011浓度 什么 mRNA的表达水平。应用PD98059、SB203580和LY294002等特异性信号转导通路抑制剂预处理后再观察砷剂对角质形成细胞MDM2表达的影响。

结果:低浓度砷剂可显著诱导MDM2基因P1启动子的荧光素酶活性(P＜0.05)。随着低浓度砷剂的剂量逐渐增加,MDM2 mRNA的表达水平逐渐增高。PD98059预处理可完全阻断砷剂上调角质形成细胞中MDM2的表达,而SB203580和LY294002预处理对砷剂诱导的MDM2表达上调无明显影响。 结论:通过MAPK/ERK信号转导通路,低浓度砷剂激活MDM2基因P1启动子的转录活性,从而诱导MDM2的表达。 第三章低浓度砷剂通过功能性失活p53发挥辅助致癌作用 目的:探讨低浓度砷剂对紫外线引起角质形成细胞凋亡的影响及其与砷性皮肤癌作用机制的关系。 方法:应用0.5μmol/L和1μmol/L亚砷酸钠处理角质形成细胞24h后,再用40mJ/cm~2紫外线照射。采用流式细胞术和Hoechst33258胞核染色检测砷剂和UV引起的细胞凋亡。 结果:0.5μmol/L和1μmol/L砷剂处理角质形成细胞后凋亡率分别为1.2%和1.5%,与正常对照组1.5%无显著性差异(P＞0.05)。而先经过0.5μmol/L和1μmol/L砷剂预处理后的角质形成细胞再照射紫外线,此时凋亡率分别为48.8%和39.9%,与未经砷剂预处理直接照射UV组凋亡率64.7%相比有显著性差异(P＜0.05)。表明砷剂预处理可导致角质形成细胞对UV的凋亡抗性。Hoechst33258核染色结果与之相一致。

结论:低浓度砷剂暴露可损害皮肤角质形成细胞对紫外线引起的凋亡反应;低浓度砷剂可通过功能性失活p53从而发挥其辅助致癌作用。
一、前言 胃癌是一种常见的恶性肿瘤,在我国是死亡率最高的恶性肿瘤之一。目前胃癌的治疗一般采用手术、化疗、放疗、免疫治疗等综合措施,其中化疗具有手术和放疗不能替代的地位。但肿瘤细胞的耐药性,尤其是肿瘤的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)常导致化疗失败。据统计,晚期胃癌患者化疗有效率约为20%～40%,生存率平均6～12个月。肿瘤多药耐药是指肿瘤细胞接触一种化疗药物并对其产生耐药后,同时对其它化学结构和作用机制不同的化疗药物亦产生耐药。 转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGFβ)超家族是一类结构相似但功能不同的肽类物质,在肿瘤的发展过程中,其作用机制较为复杂。我们的早期研究发现TGFβ1除了明显促进胃癌细胞的浸润及转移外,还可显著增加SGC-7901细胞中谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的表达,且胃癌组织中TGFβ1与GST-π的表达水平呈正相关。有研究表明,GST-π表达水平的改变与化疗耐药有关,由此提示TGFβ1可能参与了胃癌细胞的耐药过程,但迄今为止尚未见TGFβ1与胃癌耐药相关的报道。 也许 二、目的 本课题以TGFβ1处理SGC-7901细胞,观察其对化疗药物敏感性的变化,然后利用siRNA、蛋白质组学,Western blotting等技术分析可能参与此过程的信号分子,以探讨TGFβ1促胃癌耐药的分子机制,为临床克服耐药现象提供新的干预靶点。 三、方法与结果 1、利用MTT法检测经TGFβ1预处理过的SGC-7901和未经TGFβ1预处理过的SGC-7901对丝裂霉素的敏感性,结果发现:丝裂霉素对SGC-7901细胞的抑制率为89.5±10.6%;经10ng/ml TGFβ1预处理后,丝裂霉素对SGC-7901细胞的抑制率降为35.0±4.1%,二者间有显著性差异(反应细胞增殖情况OD490值的比较,均P＜0.