84±0.11μmol.mg~(-1).min~(-1)上升到1.68±0.07μmol.mg~(-1).min~(-1)(p＜0.01)，而K_m则由23.54±0.12mmol／L减小到20.86±0.13mmol／L(p＞0.05)。激酶抑制剂阻断表明Na~+，K~+-ATPase的磷酸化是ALR提高其转化效率的关键因素，其中以丝氨酸／苏氨酸残基磷酸化为主。抗ALR单克隆抗体能有效阻断ALR提高HepG2细胞Na~+，K~+-ATPase的酶活。

哪里 荧光探针分析表明：ALR能提高线粒体膜电位，增加细胞内游离[Ca~(2+)]浓度，清除细胞内活性氧。ALR能减缓因Na~+，K~+-ATPase活性下降而造成的对细胞线粒体膜电位的抑制和细胞内游离[Ca~(2+)]浓度的下调，有助于细胞内活性氧的清除。 在分子水平上，在50μg／L～200μg／L范围内，ALR能够浓度—时间效应激活MAPK通路，最大激活时间是10min。以浓度效应方式上调细胞周期蛋白CyclinD1表达水平，降低p21表达，提高pRb磷酸化水平。即：ALR通过调控MAPK途径和细胞周期蛋白的作用促进HepG2细胞增殖。用奎巴因抑制Na~+，K~+-ATPase活性，能下调ALR引起的ERK磷酸化水平，上调p38的磷酸化；同时导致Cyclin D1蛋白下调，升高p21表达，pRb蛋白活性下降，表明其抑制了
背景与目的 还有 肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一；国内外研究结果显示导致HCC的主要危险因素包括了乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、黄曲霉毒素、家族遗传因素等，这些致肿瘤的内外因素可能通过引发机体原癌基因的激活或抑癌基因的失活、细胞周期的紊乱、细胞分化发乱异常、细胞凋亡障碍、信号转导路异常等等起作用；对HCC的信号转导通路的研究显示多种信转导通路的异常参与了HCC的发生与发展；MAPK作为信号从细胞表面到细胞核内部的一条重要的传递途径。有研究显示MAPK通路的异常可能参与了HCC的发生与发展。本研究拟对大鼠及人HCC的肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织及大鼠HCC形成前的活检肝组织的MAPK通路的ERK1/2、JNK和p38基因mRNA的表达情况及蛋白质活性进行检测，以了解MAPK通路在HCC发生发展过程中的作用，为进一步防治HCC提供理论基础。 材料与方法 1) 实验材料： 实验大鼠80只，随机分为2组，实验组(AFB1组)为66只，对照组为14只。AFB1实验组大鼠24例发生HCC；对24例HCC大鼠的肝癌组织、癌旁组织及癌前定期活检肝组织；选取未出癌大鼠6例及对照组大鼠11例的同期活检肝组织；另外，收集52例人HCC患者的肝癌组织及癌旁肝组织、18例正常人肝脏组织作为实验材料。

2) 实验方法： 采用逆转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹试验(Western Blotting)及免疫
扇贝多肽(PCF)是从海洋生物栉孔扇贝(Chlamys farreri)中得到的水溶性多肽。本文首先通过复制小鼠的地塞米松免疫抑制模型,采用免疫组织化学、MTT法和流式细胞仪的方法,探讨扇贝多肽在体内对胸腺细胞和外周血淋巴细胞增殖和分化的作用。在此基础上,通过正交设计实验方案,筛选出适宜的紫外线辐照参数,建立了紫外线对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的病理模型。实验设计分组为:对照组,紫外线照射模型组,紫外线+0.125%PCF组,紫外线+0.25%PCF组,紫外线+0.5%PCF组和紫外线+0.1%VitC组。通过采用MTT法检测淋巴细胞活性;透射电镜观察细胞超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳观察DNA条带特征性变化;酶生化法测定细胞胞浆内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及细胞抗超氧阴离子能力(A-SAC)和总抗氧化能力(T-AOC);流式细胞仪测定细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光染色测定细胞内游离[Ca2+]I的变化;Rhodamine

许多 123荧光染色测定线粒体膜电位(ΔψМ)的改变;免疫细胞化学检测细胞p53、Bcl-2、Bax基因蛋白的表达;PT-PCR检测c-fos mRNA和c-jun mRNA的表达;原位杂交检测细胞P21WAF1 mRNA、P38 mRNA的基因表达;琼脂糖凝胶电泳观察各组不加入或分别加入ERK抑制剂、JNK抑制剂和P38抑制剂后的DNA ladder的变化;western-blot检测磷酸化ERK、磷酸化JNK、和磷酸化P38的活性等方法,探讨在紫外线照射下,扇贝多肽(PCF)对小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及机制。 实验结果表明,PCF腹腔注射能够明显增强小鼠胸腺淋巴细胞转化能力,并促进DEX处理小鼠外周成熟的淋巴细胞增殖;在紫外线强度为6.16mJ/cm2,照射时间为10秒的照射条件下,建立了紫外线对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的病理模型;0.125-0.