5mM D-葡萄糖;(2)高糖组(H组),含30mM Rho 抑制剂半抑制浓度 D-葡萄糖;(3)甘露醇对照组(M组),含24.5mM D-甘露醇+5.5mM D-葡萄糖。分别于0h,24h,48h,72h收集各组细胞,提取细胞总蛋白。采用WesternBlotting方法检测细胞中E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、MMP-9、ILK的表达。 结果 1.N组和M组各时间点HK-2细胞E-Cadherin表达均较强,α-SMA表达均较弱,两组间比较无差别(P＞0.05)。 2.高糖环境下HK-2细胞(H组)与N组比较,E-cadherin表达呈时间依赖性减少(P＜0.05),α-SMA表达呈时间依赖性增加(P＜0.05),ILK表达呈时间依赖性增加(P＜0.05),MMP-9表达呈时间依赖性增加(P＜0.05)。 3.H组ILK蛋白表达量与MMP-9的蛋白表达量成正相关(r=0.982,P＜0.01);与α-SMA蛋白表达量成正相关(r=0.950,P＜0.01);与E-cadherin的蛋白表达量成负相关(r=-0.846,P＜0.01)。 结论 1.体外高糖因素能诱导人肾小管上皮细胞转分化。 2.ILK参与了高糖诱导的TEMT过程,并可能在其中起正向调节作用。
3.高糖诱导下TEMT中MMP-9表达增加,此变化可能受ILK的正向调控。
第一部分:鞘内注射SB203580对骨癌痛大鼠机械痛敏的影响 目的观察骨癌痛大鼠鞘内注射p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580后的患测后肢机械缩足反射阈值和双后肢负重差值变化。 方法雌性SD大鼠,体重150～170g,32只大鼠,随机分为4组(n=8):Sham组、模型组、DMSO组和SB203580组。sham组胫骨髓腔注射生理盐水5μl,其它三组胫骨髓腔注射walker256细胞(2×107/ml)5μl;建模后1d所有大鼠皆鞘内置管;建模后10d,DMSO组鞘内注射二甲基亚砜(5%)10μl ,SB203580组鞘内注射SB203580(1‰)10μl ,其余两组不进行鞘内注射;在建模前、建模后1d、3d、5d、7d、10d和给药后1h、3h、6h、12h、24h用von Frey丝测定大鼠患侧后肢机械缩足反射阈值(MWT),用负重仪测大鼠双后肢负重差值。
ARN-509体外 结果建模后7天大鼠开始出现机械痛敏并且随时间逐渐增强,鞘内注射SB203580后1h、3h、6h、12h大鼠患测后肢MWT升高,大鼠双后肢负重差值减小,鞘内注射后3～6 h是SB203580作用的高峰期,但即使在药物作用高峰期大鼠患测后肢MWT和双下肢负重差值也不能恢复到基础值。 结论鞘内注射SB203580能减轻但不能完全抑制大鼠胫骨癌痛引起的机械痛敏。 第二部分:鞘内注射SB203580对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白表达的影响 目的观察骨癌痛大鼠鞘内注射p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580后脊髓部位pCREB表达的变化。探讨鞘内注射SB203580对骨癌痛大鼠的抗伤害效应的可能机制。 方法雌性SD大鼠,体重150～170g,24只大鼠,随机分为4组(n=6): Sham组、模型组、DMSO组和SB203580组。sham组胫骨髓腔注射生理盐水5μl,其它三组胫骨髓腔注射walker256细胞(2×107/ml)5μl;建模后1d所有大鼠皆鞘内置管;建模后10d,DMSO组鞘内注射二甲基亚砜(5%)10μl
,SB203580组鞘内注射SB203580(1‰)10μl ,其余两组不进行鞘内注射;鞘内给药后6h灌注大鼠、取L4、5脊髓、冰冻切片、用免疫组织化学方法检测脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)的表达。 有 结果建模后脊髓背角pCREB阳性细胞数(NUM)增多,积分光密度值(IOD)增大;鞘内注射SB203580后骨癌痛大鼠脊髓背角pCREB阳性细胞数(NUM)减少,积分光密度值(IOD)减小。 结论鞘内注射SB203580能在一定程度上抑制脊髓背角CREB的磷酸化。p38MAPK/CREB信号转导通路可能在骨癌痛中起重要作用。
背景与目的 雌激素参与调节大量的生物学过程,传统的雌激素效应是作为转录因子通过ERα, ERβ和雌激素受体相关蛋白γ发挥作用。不同于传统的雌激素核受体,新的雌激素膜受体GPR30则通过细胞内第二信使途径发挥效应,同时与抗雌激素表现出明显的亲和力。研究表明GPR30参与了细胞增殖、周期以及凋亡的调节。作为激素敏感组织之一,雌激素不仅促进乳腺的发育,而且刺激乳腺癌的生长。那么这一新的雌激素受体在乳腺癌中发挥什么作用呢?为此,本研究以乳腺癌细胞SKBR3为研究对象,以干扰GPR30的表达为手段,分析GPR30表达与肿瘤细胞生长的相关性。 方法 运用siRNA干扰SKBR3细胞中GPR30的表达,给予17β-E2、EGF、SB202190干扰细胞生长,运用半定量RT-PCR检测各处理组GPR30 mRNA的表达水平,以MTT法检测干扰GPR30表达后细胞生长的变化。 结果 1.成功构建了2个重组质粒pshRNAGPR301和pshRNAGPR302,并应用GenEscortTMⅠ成功转染至乳腺癌细胞株SKBR3,RT-PCR结果显示GPR30基因在mRNA水平被显著抑制,其表达率分别为正常细胞的64.25 %和54.24 %。 2.