通过测定已知PARP抑制剂DPQ和菲啶酮PHE对昆虫表达hPARP1的IC_(50),验证此方法可以用来进行新型PARP抑制剂的筛

通过测定已知PARP抑制剂DPQ和菲啶酮PHE对昆虫表达hPARP1的IC_(50),验证此方法可以用来进行新型PARP抑制剂的筛选。通过克隆形成实验和CCK8细胞增殖-毒性检测实验,筛选对PARP抑制剂PHE敏感的细胞,用于筛选PARP抑制剂的细胞模型。 实验结果表明,本论文成功构建了pFast-hPARP1质粒,通过Bac-to-Bac杆状病毒http://www.selleckchem.cn/products/abt-199.html表达系统,实现了hPARP1酶在Sf9昆虫细胞中的表达,产物经3-氨基苯甲酰胺柱亲和层析成功得到纯化,得率为80.8%,纯化倍数为38.72倍,比活达到1.988U/μg。SDS-PAGE和Western blotting结果显示纯化产物在116kDa处有特异性目标条带。PARP抑制剂体外筛选结果显示,在72种化合物中筛选出41个具有生物活性的PARP抑制剂,其中有7个化合物的IC_(50)低于500nmol/L,显示出良好的PARP抑制作用。细胞模型筛选结果显示,中国人源胰腺癌细胞JF305对PARP抑制剂菲啶酮具有一定的敏感性。CCK8结果显示,筛选获得的PARP抑制剂HC-232(A)具有明显抑制JF305细胞的生长作用。 本课题通过Compound C供应商分子构建、表达、纯化等步骤获得了hPARP1。利用hPARP1,成功筛选出具有一定生物活性的PARP抑制剂。获得了对PARP抑制剂菲啶酮敏感的中国人源胰腺癌细胞JF305,这为筛选出具有自主知识产权的PARP抑制剂奠定了基础,并对后续研究提供了理论依据。
颅内肿瘤大致分为原发性肿瘤和转移瘤。胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤。胶质母细胞瘤(Glioblastoma, GBM)是发病率和恶性程度最高的胶质瘤。

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