方法 对细胞进行培养与转染,药物处理细胞24 h、48 h、72 h后,CCK-8法检测细胞存活率,确定药物对细胞的 半抑制浓度(

方法 对细胞进行培养与转染,药物处理细胞24 h、48 h、72 h后,CCK-8法检测细胞存活率,确定药物对细胞的 半抑制浓度(IC50)。野生型细胞分为对照组、给药组。转染细胞分为si – NC组、si – NC + TPL组、si – HIF + TPL组。流式细胞术检测细胞调亡率,氟代脱氧葡萄糖(18F -www.selleck.cn/products/Imatinib-Mesylate.htmlFDG)摄取实验检测TPL对肝癌细胞糖代谢水平的影响。 实时荧光定量PCR检测细胞糖酵解途径关键酶乏氧诱导因子_ lα ( HIF-lα)、己糖激酶2( HK2)、葡萄糖转运蛋 白1 (GLUT1)、丙酮酸激酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的mRNA水平。蛋白免疫印迹法检测HIF-Selleck Autophagy Compound Library lα、HK2、 PKM2、LDHA蛋白的表达水平。结果 (1 )当TPL浓度达到40 nmol/L以上时,细胞的存活率显著降低(P < 0.05) 。 (2)与对照组相比,给药组(40 nmol/L)细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。(3)给药组(40 nmol/L)细胞 对18F - FDG的相对摄取率,与对照组比较,明显降低(P < 0. 05 )。(4)相较于对照组,给药组HIF – 1 α、HK2、 GLUT1、PKM2、LDHA等糖酵解途径关键基因mRNA表达水平降低(P< 0. 01 )。(5)TPL干预细胞后,HIF-lα, HK2、PKM2、LDHA等蛋白表达水平降低(P<0.05)。敲减HIF – lα基因后,影响其下游蛋白的表达。

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