3压力加载下对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的观察将2D和3D培养的肝癌细胞分别以不同的压力值(0mmHg,5mmHg,15mmHg,30mmHg,60mmHg)加载一定时间(0h,12h,24h,48h)。用CCK-8(Cell Counting Kit-8)实验,细胞划痕实验和Transwell实验分别观察2D培养肝癌细胞在不同压力加载条件下的增殖、迁移和侵袭能OmipalisibDMSO溶解度力;用流式细胞周期技术和RT-qPCR检测观察3D培养肝癌细胞压力下的增殖和转移能力。4压力应答miRNA的筛选及其靶基因的验证mRNA表达谱芯片和miRNA表达谱芯片检测将最适压力加载条件下3D培养的HepG2细胞与未加压的3D培养对照组进行比较,找出差异表达的miRNAs和mRNAs,并通过RT-qPCR在2D和3D培养的HepG2细不胞和Huh-7细胞中对芯片结果分别进行验证。通过miRDB、miRTarBase、TargetScan三个数据库预测压力应答miRNA的靶基因列表。通过Gene ontology(GO)和KEGG数据库对靶基因的功能进行富集分析。并利用TargetScan数据库预测筛选出的压力应答miRNA与预测靶基因结合位点,通过荧光素酶报告基因验证两FK866分子量者的靶向关系。5压力及压力应答miRNA在肝癌细胞增殖、迁移和侵袭中的分子机理的研究利用CCK-8、Transwell和细胞流式技术观察过表达压力应答miRNA后肝癌细胞的功能(增殖、迁移和侵袭)改变。应用蛋白抑制剂将通路中相关蛋白抑制后,通过Western-blotting实验对通路进行验证;将miRNA过表达慢病毒和低表达慢病毒感染的肝癌细胞通过Western-blotting实验验证miRNA在通路中发挥的作用。