正常对照组小鼠肺泡结构基本正常,肺组织结构完整,肺泡腔清晰,肺泡间隔无增厚。LPS组肉眼可见肺脏表面淤血、出血点和水肿明显,光镜下肺泡结构破坏严重,肺泡萎陷、肺泡间隔增厚,炎细胞浸润。LPS+PCA组组织损伤程度比LPS组显著减轻,且与PCA给药浓度有关,尤以PCA高浓度组较为明显肺间质和肺泡腔内渗出物及炎细胞浸润较LPS组明显减少;LPS+SB203580、LPS+Dex、LPS+PCA+SB203580组也可见组织损伤较LPS组减轻,大部分肺泡结构清晰,肺泡间隔略增厚。2.PCA可使小鼠BALF及血清中TNF-α含量与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,BALF及血清中含量明显低于模型组(P<0.05)。3.PCA可使小鼠BALF及血清中IL-1β含量与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组(P<0.05)、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,BALF及血清中含量明显低于模型组(P<0.01)。4.PCA可使小鼠BALF中蛋白浓度与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组(P<0.05)、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,血清中含量明显低于模型组(P<0.01)。6.LPS模型组各组肺组织中p-ATF2蛋白的表达强度较对照组显著增高(P<0.01)；PCA治疗组中p-ATF2蛋白表达量较LPS模型组相比显著降低(P<0.01),并随浓度的增高而降低。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,肺组织中p-ATF2含量明显低于模型组(P<0.01)7.LPS模型组各组肺组织中TLR4蛋白的表达强度较对照组显著增高(P<0.01)；PCA治疗组中TLR4蛋白表达量较LPS模型组相比显著降低(P<0.01),并随浓度的增高而降低。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,肺组织中TLR4含量明显低于模型组(P<0.01)。结论1.PCA对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠有一定的保护作用。2.PCA对脂多糖所致急性肺损伤的保护作用与PCA浓度成正相关。3.PCA可通过减少炎症介质的产生而对受损小鼠发挥保护作用。4.PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与抑制P38MAPK信号通路有关。5.PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与抑制TLR4信号通路有关。6.当同时应用PCA及SB203580后PCA对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用减弱,进一步证明PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与其抑制P38MAPK信号通路有关。
[目的]研究高糖状态下,体外培养的小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)的细胞增殖、分化、细胞外矿物质沉积的情况以及葡萄糖浓度对P38MAPK信号通路的影响,进一步探讨P38MAPK特异性抑制剂SB203580对高糖所导致的成骨细胞活性改变的影响,以阐明P38MAPK信号通路在高糖状态下成骨细胞活性中的作用。[方法]将培养的小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)分为8组：1)正常对照组5.5mM葡萄糖；2)高糖组A：15.5mM葡萄糖；3)高糖组B：25.5mM葡萄糖；4)高糖组C：35.5mM葡萄糖；5)SB203580组A：5.5mM葡萄糖+10gM
什么 Ki16425订单 SB203580；6)SB203580组B：15.5mM葡萄糖+10μMSB203580;7)SB203580组C：25.5mM葡萄糖+10μMSB203580；8)SB203580组D：35.5mM葡萄糖+10μM 因为 SB203580。细胞接种后,待细胞生长至80%密度后,同步化24小时后,分别用以下各因素处理细胞并继续培养。1、甲基噻唑基四唑(MTT)法检测3、7、14d
MC3T3-El细胞增殖情况；2、碱性磷酸酶(ATP)试剂盒检测3d、7d细胞裂解液中ALP活性；3、茜素红染色观察细胞细胞矿化结节的大小和形态；4、荧光实时定量PCR检测核心结合因子1(core binding factor-1, Cbfal)和骨钙蛋白基因(osteocalcin, OCN)分别在培养3d、7d的表达。收集细胞,提取总RNA,逆转录cDNA,采用实时荧光定量PCR法检测各组成骨细胞中成骨相关基因的表达。5、Western blot检测P38MAPK和磷酸化P38MAPK在3d、7d的表达情况。[结果]1、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mM)可抑制MC3T3-E1细胞的增殖。且经过SB203580干预后,细胞增殖水平继续下降,差异具有统计学意义。(P<0.05)。2、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mM)可抑制MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、细胞矿化和成骨相关基因的表达。SB203580干预后,ALP活性、细胞矿化及成骨相关基因(Cbfal和OCN)表达水平较未干预组升高。3、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mmM)对P38MAPK,总蛋白分泌无明显的作用,但能够促进P-P38MAPK的表达且成剂量相关关系,经过SB203580干预后,可明显抑制P38MAPK磷酸化。(P<0.