2mV且持续30分钟为手术成功标准。Sham组手术过程同AMI组,但缝线穿过冠状动脉不结扎。各组大鼠于实验终点采取静脉血5毫升,行血流动力学检查后取出心脏行病理学检查并分离非梗死区心肌低温保存。结果显示:(1)AMI组肉眼直视下观察结扎线以下阻断部位心肌颜色由鲜红变为暗紫色,搏动减弱;(2)I、avL导联心电图ST段抬高大于0.2mV,持续30分钟。(3)左室重量指数3天即有增加并持续增加至4周。(4)AMI组术后4小时病理学检查即可见到梗死区心肌水肿明显,细胞界限不清,心肌细胞出现颗粒变性、空泡变性胞浆疏松透明,部分细胞出现坏死,核消失,心肌纤维成波浪状改变。心肌间质水肿出血,有较多中性粒细胞和红细胞浸润。(5)血流动力学测定显示AMI组4小时后LVEDP即持续升高至4周,LVSP、±dp/dt
max 4周内持续下降。Sham组以上指标均无明显变化。 二、AMI后MMP-9mRNA表达与心室重构关系的研究 取大鼠AMI后非梗死区心肌行RT-PCR,观察MMP-9mRNA变化规律,研究MMP-9与心功能及左室重量指数之间的的关系。结果显示:(1)AMI组MMP-9mRNA表达4小时与Sham组无显著性差异,12小时即有明显升高,1周达高峰并在此水平持续至4周。(2)AMI组MMP-9mRNA与LVEDP成正相关(r=0.831,P
背景动脉粥样硬化性疾病的一、二级预防已经使缺血性心脏病事件的发生率显著下降。但是缺血性心脏病依然是大多数发达国家最主要的死亡病因之一。为了进一步减少急性缺血性心脏病事件的发生率,人们仍在寻找各种更为有效的治疗方案。促红细胞生成素(erythropoietin, selleck screening library Epo)是由165个氨基酸组成并折叠成4个α螺旋的糖蛋白。属于I型细胞因子超家族,分子量约为30.4kDa。Epo最早运用于慢性肾功能衰竭相关性贫血治疗。此后Bernaudin等发现其在脑缺血及神经组织的机械性损伤中也发挥着保护作用,多项实验表明,脑组织局部及全身运用Epo可防治缺血诱发的神经元损伤。相似的,通过动物模型人们逐渐认识到Epo的心肌保护作用。近年来有部分小规模临床实验提示了Epo的心肌保护效应,但是其具体分子生物学机制尚未阐明。
购买BMN 673 目的为了深入探讨Epo在缺血性心脏病中的生理保护作用及其临床意义。明确:1、Epo治疗是否能影响心肌细胞凋亡;2、促进血管新生、改善心肌梗塞术后心功能;3、明确EPO在缺血再灌注损伤中的保护机制,我们设计了该课题。 方法 1、通过RT-PCR及Western Blot验证体外培养的心肌细胞是否表达Epo的受体。采用H_2O_2诱导体外培养心肌细胞凋亡,运用Tunel染色探讨Epo对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡的影响。结合细胞信号传导通路阻滞剂明确Epo抑制心肌细胞凋亡的信号传导通路。分别收集不同时间点的心肌细胞培养上清液,观测Epo对心肌细胞VEGF表达的影响。 2、采用Langendroff离体心脏缺血再灌注模型,运用不同剂量Epo观测Epo对缺血再灌注离体心脏的血流动力学影响;OCT染色观测Epo对梗塞面积的调节。结合信号传导通路阻滞剂,探讨Epo对细胞外基质代谢的调节作用及其机制。酶谱法(Zymography Assay)及大鼠缺血再灌注模型验证EPO对缺血再灌注损伤后MMPs活性的调节。 结果证实心肌细胞表达Epo受体;Epo可抑制H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡、下调心肌细胞促凋亡相关蛋白的表达,上调抗凋亡蛋白表达。Epo通过Erk及PI3K-Akt途径抑制细胞凋亡。Epo可促进心肌细胞VEGF的表达及内皮细胞增殖;通过促进心肌细胞分泌VEGF,EPO可间接对内皮细胞的增殖发生调控。利用Langendroff离体心脏缺血再灌注模型,运用不同剂量Epo证实Epo可改善缺血再灌注离体心脏的血流动力学指标;减少缺血再灌注损伤后梗塞面积。Epo激活了Jak2-Erk信号传导通路,促进了CollagenI/III的表达,抑制了MMP2及MMP9的表达。MEK拮抗剂可抑制Epo的这一保护作用。在1周的随访期中EPO显著抑制了心肌缺血再灌注损伤后MMPs的活性。 结论 1、心肌细胞可表达EPO的受体,EPO经由Erk及Akt途径抑制心肌细胞凋亡; 2、EPO促进心肌细胞VEGF的合成分泌,促进内皮细胞增殖; 3、EPO治疗可显著提高心肌梗塞术后小鼠的生存率、改善心功能、抑制心脏组织凋亡、促进血管新生。 4、EPO可通过Erk途径调节心脏组织细胞外基质代谢。
目的
1.研究雷公藤内酯醇(TL)对人纤维肉瘤HT-1080细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响; 2.研究TL调控MMP-9表达的意义; 3.探讨TL调控MMP-9表达的机制。 方法 1.选择人纤维肉瘤细胞系HT-1080为研究对象,常规培养、传代,药物的3个工作浓度分别为6nM、12nM和18nM,处理时间均为72小时; PI3K activation 2.采用MMT法检测TL对HT-1080细胞增殖能力的影响; 3.用流式细胞仪检测TL致HT-1080细胞凋亡情况; 4.运用RT-PCR检测TL对9个基因mRNA表达的影响,这些基因是:MMP-9和-2,基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1、-2、-3和-4,DNA甲基转移酶(DNMT)-1、-3A和-3B; 5.用明胶酶谱实验检测TL对HT-1080细胞MMP-9和-2活性的影响; 6.用Transwell侵袭实验检测TL对HT-1080细胞体外侵袭能力的影响; 7.用甲基化特异性PCR(MSP)检测TL对MMP-9基因甲基化水平的影响; 8.用Western blotting检测TL对DNMT-1、-3A和-3B蛋白表达的影响。 结果 1.TL作用72小时,随药物浓度的增加,HT-1080细胞的增殖逐渐受到抑制;其中,半数抑制浓度约为25nM; 2.浓度分别为6 nM、12 nM和18 nM的TL处理72小时后,HT-1080细胞的凋亡率分别为16.0%、17.3%和18.8%,对照组凋亡率为17.7%; 3.18 nM TL处理HT-1080细胞72小时后,MMP-9 mRNA的表达明显下调(P＜0.05),但MMP-2、TIMP-1/-2/-3/-4 mRNA的表达无明显变化(P均＞0.05);6 nM和12 nM TL处理组上述基因的mRNA表达均无明显变化(P均＞0.05); 4.12 nM TL处理HT-1080细胞72小时后,在细胞无血清培养基上清中检测到的MMP-9的活性明显下调(P＜0.05),18 nM TL处理组无血清培养基上清中则基本检测不到MMP-9(P＜0.01);3个药物处理组MMP-2的活性均无明显变化(P均＞0.05); 5.Transwell侵袭实验发现,18nM TL处理72小时后,穿过人工基底膜的细胞数明显减少,约相当于对照组的65%(P＜0.