05)；但患者空腹血糖、甘油三酯和低密度脂蛋白水平明显高于对照组(均P＜0.05。糖尿病患者收缩压(P=0.086)与舒张压(P=0.116)水平较对照组差异无统计学意义。 2．T2DM患者血浆CF6水平(262.1±49.9)pg／ml比对照组高23.9％(P＜0.01)，患者血浆6-keto-PGF1a水平(13.7±3.9)pg／ml比对照组降低16.5％(P＜0.05)。患者血浆6-keto-PGF1a水平与CF6水平呈显著负相关关系(r=-0.52，P＜0.01)。 3．分析临床危险因素发现，吸烟患者血浆CF6水平显著高于不吸烟患者(293.1±56.2pg／ml对255.6±46.4 pg／ml，P＜0.05)。但本组患者血浆CF6水平在有无高血压病分组间的差异无统计学意义。血浆CF6水平在不同性别间差别无统计学意义(男259.7±46.6pg／ml对女264.6±53.9pg／ml，P=0.687)。应用胰岛素治疗患者的血浆CF6水平显著低于非胰岛素治疗者(249.13±65.9pg／ml对281.75±55.4pg／ml，P＜0.05)。
4．单变量简单相关分析显示，患者血浆CF6水平与空腹血糖(r=0.535，P＜0.01)、GHbA_(1c)、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白及载脂蛋白B水平均显著相关；以CF6水平为因变量，选择年龄、性别、血糖、血脂及血压等指标为自变量进行多元回归分析显示：两步选入的变量分别为GHBA_(1c)和LDL，无变量从方程中剔除。回归分析第一步接受变量为GHBA_(1c)(r=0.553，R~2=0.306，P＜0.01)，第二步接受GHBA_(1c)和LDL(r=0.638，R~2=0.406，P＜0.01)；对方程检验有统计学意义(F=21.575，P＜0.01)；回归方程为CF6=105.95+12.24×GHBA_(1c)+16.44×LDL。即，GHBA_(1c)和LDL是影响T2DM患者血浆CF6水平的独立因子。 不 血浆6-keto-PGF1a水平与空腹血糖、GHbA_(1c)及CF6水平均显著相关。以血浆6-keto-PGF1a水平为因变量，多元逐步回归分析显示血浆CF6水平是影响T2DM患者6-keto-PGF1a水平变化的独立因子(r=-0.521，R~2=0.27，P＜0.01)。
5．离体实验发现，排除渗透压影响后，高浓度葡萄糖孵育内皮细胞，CF6基因表达和蛋白释放水平均呈时间和浓度依赖性增加。分别给予10mmol／L，20mmol／L和30mmol／L浓度葡萄糖孵育24h后，培养基中CF6浓度比对照组(123.8±14.7pg／ml)分别增高28.5％(P＜0.05)，116.2％(P＜0.01)和125.5％(P＜0.01)。以含30mmol／L葡萄糖培养基孵育细胞后，时间依赖性增加CF6分泌水平(6h 163.5±20.4 pg／ml；12h 201.0±35.0pg／ml；24h 272.3±33.0 pg／ml和48h 266.5±13.2 pg／ml)，24h达到稳态水平，较对照组培养基中CF6浓度高2.2倍(P＜0.01)。CF6基因的表达有相似改变。 6．用30mmol／L葡萄糖孵育HUVECs显著促进p38 MAPK的磷酸化水平，而甘露醇对照组未发现该作用。并且，PKC抑制剂和p38 MAPK抑制剂能够抑制高糖诱导的p38 MAPK磷酸化。同时发现，高糖诱导的CF6分泌能够被PKC阻滞剂和P38 selleck screening library MAPK阻滞剂显著抑制，其抑制率分别为-45％(P＜0.01)和-23％(P＜0.018)；同样，上述阻滞剂也抑制高糖诱导的CF6mRNA表达(均P＜0.01)。 7．胰岛素抑制高糖刺激的CF6分泌，胰岛素(10~(-7)mol／L)与高糖共孵育HUVECs 24h后，培养基中CF6浓度较单纯高糖孵育组降低56.6％(P＜0.01)。同样，与单纯高糖组比较，加入胰岛素共孵育内皮细胞能够显著抑制高糖诱导的CF6mRNA表达增加(P＜0.01)。
结论及意义 1．T2DM患者血浆CF6水平升高，并与其PGI_2水平降低独立相关。提示T2DM患者CF6升高可能通过抑制PGI_2等途径参与糖尿病及其心血管并发症的发生，为体液因素参与糖尿病发病提供了新认识。 很少 2．T2DM患者血糖水平与循环CF6升高显著正相关；体外高糖刺激HUVECs也能促进CF6表达与分泌。表明高糖可能是新发现的促进内源性CF6分泌的刺激因子。 3．PKC及P38MAPK等细胞内信号通路分子活化参与高糖诱导的内皮细胞CF6释放。提示探讨糖尿病CF6异常与PKC、MAPKs、PGI_2等相关因子的关系，可能具有重要理论和临床价值。 4．体内外实验均提示胰岛素抑制高糖诱导的CF6分泌，提示胰岛素治疗可能有助于降低糖尿病患者循环CF6水平异常。
目的:研究热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)磷酸化在血管紧张素II(angiotensinⅡ,AngII)与血小板源性生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移中的作用及其作用机制。 方法:采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞;用特异性的单克隆Phospho-HSP27抗体的蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSP27的活性;用FITC-鬼笔环肽标记F-actin并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的形态变化;采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验。 结果: 第一部分:AngII和PDGF-BB呈浓度依赖性诱导VSMCs的HSP27磷酸化,使VSMCs内F-actin数量明显增加,纵向平行排列,形成应力纤维丝,并促进细胞迁移。AngII(10-7mol/L)和PDGF-BB(30ng/ml)诱导后VSMCs的HSP27磷酸化水平在30分钟达高峰。AngII和PDGF-BB均能诱导VSMCs的HSP27磷酸化,作用峰值浓度分别为10-5mol/L和100 ng/ml,分别较对照组增高338.9%和159.1%(P<0.01)。HSP选择性阻断剂槲皮素以浓度依赖性方式抑制AngII和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化,最大抑制率分别为71.7%和66.7%(P<0.01),对PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化的最大抑制率分别为85.0%、55.3%和41.0%(P<0.01),对PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为55.3%、55.6%和38.