077μM;2-75,IC50：0.025μM)和各种哌嗪喹喔啉类化合物显示了良好的PI3Ka抑制活性,以上结果和药效团Hypol预测的活性基本一致,验证了Hypol的可靠性。Akt蛋白磷酸化抑制实验表明,化合物2-75显示了明显的Akt蛋白磷酸化抑制作用,再次证明了该化合物是通过作用于PI3K信号通路而发挥其抗肿瘤活性的。以上结果表明化合物2-75是有潜力的P13Kα中制剂。 此外,本文根据文献报道的2-苯基-4-吗啉基喹唑啉类PI3K抑制剂,利用拼合原理,通过在吗啉喹唑啉母核的6位引入芳亚甲胺侧链、芳磺酰胺基侧链、吡咯烷二酮氨基侧链和马来酰亚胺基侧链共设计合成了五类49个结构新颖的吗啉喹唑啉类衍生物。体外抗肿瘤活性测试结果表明,喹唑啉2位苯基的存在有利于抗肿瘤活性的提高；芳磺酰胺基侧链取代的化合物活性好于芳亚甲胺侧链取代的化合物;吡咯烷二酮氨基侧链取代的化合物活性中等；具有马来酰亚胺基侧链的化合物显示了良好的细胞增殖抑制活性(如化合物3-68和3-69)。该研究为喹唑啉类抗肿瘤药物的开发提供了新的思路。
目的： 1.研究无血清培养法和免疫磁珠分选法用于人骨肉瘤类肿瘤干细胞的分离培养,探讨两者作为分选方法的可行性。

2.研究Nanog在人骨肉瘤及其类肿瘤干细胞的中的表达及意义。 3.研究LY294002对人骨肉瘤类肿瘤干细胞增殖和细胞周期的影响,并初步探讨其抑制增殖作用可能的机制。 4.研究LY294002对人骨肉瘤类肿瘤干细胞凋亡的影响,并初步探讨其诱导凋亡作用可能的机制。 方法： 1.无血清培养法分离人骨肉瘤类肿瘤干细胞；免疫磁珠分选CD133+CD44+人骨肉瘤细胞；免疫组织化学法鉴定人骨肉瘤类肿瘤干细胞CD44和CD133的表达情况；蛋白印迹法检测骨肉瘤及其类肿瘤干细胞Nanog的表达并进行半定量分析。 A-1210477半抑制浓度 2.实验分组：LY294002在培养基中的浓度分别为0μmol/L(对照组)、5μmol/L、15μmol/L和45μmol/L。 3.CCK-8法检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下的增殖情况；碘化丙啶PI染色流式细胞术检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下细胞周期的变化；蛋白印迹法法检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下总AKT、磷酸化AKT和β-肌动蛋白的表达情况。 4. Annexin V/PI双染法流式细胞术检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下的凋亡情况；蛋白印迹法检测半胱天冬酶-3、活化型半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-9、活化型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶和β-肌动蛋白的表达情况。 结果：

1.采用无血清培养法可以从人骨肉瘤MG63细胞中分离出成“细胞球”生长的人骨肉瘤类肿瘤干细胞；采用免疫磁珠法可以从人骨肉瘤MG63细胞中分离出CD133+CD44+人骨肉瘤细胞,该细胞亦可在含表皮生长因子和成纤维生长因子的无血清培养基中形成“细胞球”；将上述骨肉瘤类肿瘤干细胞球传代于无血清培养基仍可形成相似的人骨肉瘤类肿瘤干细胞球；人骨肉瘤类肿瘤干细胞CD44和CD133均呈阳性表达；人骨肉瘤类肿瘤干细胞Nanog表达水平强于人骨肉瘤MG63细胞(P<0.01),增殖指数明显减低(P
在含氮天然产物和生物活性分子的结构改造中,将三氟甲基或含氟基团不对称地引入到亚甲胺基的α位已经成为研发新药的一个重要手段,改造后生物活性分子结构与活性关系的研究表明手性α-三氟甲基胺结构与药效有着直接的关系。因此手性三氟甲基胺类化合物的合成已成为众多有机化学家和药物化学家的研究热点。本文通过发展四类α-三氟甲基胺化合物的不对称合成方法,并利用这些方法设计与合成了4-三氟甲基取代的胆固醇吸收抑制剂Ezetimibe类似物等含氟化合物。本论文由如下三个部分构成： 没有 LY2109761临床试验 第一部分：含氟基团取代的手性p-氨基酮类化合物广泛的存在于生物活性分子中,同时是一类重要的合成砌块。利用叔丁基亚磺酰胺作为手性辅基,发展了一种用于制备光学纯的p-三氟甲基-p-芳基-p-氨基芳酮的高效方法。手性三氟甲基取代的叔丁基亚磺酰酮亚胺与烯醇锂盐发生Mannich型1,2-加成反应可以以优良的产率和良好的非对映选择性得到p-三氟甲基-p-芳基-p-氨基芳酮类化合物。然后,在酸性条件下脱去叔丁基亚磺酰基得到光学纯的p-三氟甲基-p-芳基-p-氨基芳酮,此类化合物可以进一步转化为三氟甲基取代的氮杂环丙烷类化合物。

第二部分：发展了一种路易斯酸催化区域可调控的α-氟烷基胺类化合物的不对称合成方法。在四氟化硼酸银的催化下,α-氟烷基取代的叔丁基亚磺酰醛亚胺能与共轭二烯醇硅醚酯的α位发生反应,以优良的产率和优异的非对映选择性得到具有两个新手性中心的加成产物；当用TMSOTf做催化剂,得到丫位加成产物。加成产物的手性辅基可在温和的酸性条件下脱除,且新手性中心的构型保持不变。位加成产物可以便利地转化为α-三氟甲基内酰胺类化合物。 第三部分：为发现活性更好的胆固醇吸收抑制剂,设计并合成了四个4-三氟甲基取代的Ezetimibe的类似物。合成的关键步骤包括利用分子内氢键和Evans辅基诱导对烯胺进行不对称氢化；在已构建三氟甲基的手性构型诱导下进行不对称亲核取代反应。采用Caco-2细胞为模型对4-三氟甲基取代Ezetimibe的类似物进行生物活性测试,结果表明,在得到的四个4-三氟甲基取代的Ezetimibe类似物的作用下,Caco-2细胞都能对胆固醇的吸收进行有效的抑制,其中化合物侧链有手性中心的N-4-氟苯基取代类似物活性与阳性药物Ezetimibe的活性接近。
背景：宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，是威胁女性生命的第二大恶性疾病，近年来有逐渐年轻化的趋势，已经成为重大的社会问题。全世界每年约45～50万新发病例，死亡20万例，其中约80％集中在发展中国家。我国是宫颈癌的高发病率国家之一，每年新增宫颈癌病例约13.