2.酶切富集AS-PCR方法的建立。设计一对野生型和突变型abl基因序列的通用引物，分别以野生型和突变型重组质粒作为模板，经PCR扩增出目的片段，将扩增出的片段进行酶切。另设计一对仅针对T315I突变的特异性引物，以酶切产物为模板，进行AS-PCR检测，对反应体系及反应条件进行优化。分析该方法的灵敏度及特异性。 结果： 1.通过体外定点突变PCR法成功构建了野生型pSG5M-Icotinibflag-abl(wild)和突变型pSG5M-flag-abl(T315I)的重组质粒标准品，且经酶切及测序鉴定与预期结果一致。 2.成功运用了酶切富集AS-PCR法检测bcr/abl基因T315I点突变，该方法的灵敏度为0.18%，实验至此并未出现假阳性，该方法特异性好。 结论： 1.成功构建了野生型pSG5M-flag-abl(wild)和突变BIBF 1120小鼠型pSG5M-flag-abl(T315I)重组质粒。 2.建立了检测abl基因T315I突变的酶切富集AS-PCR方法，为临床检测该基因突变提供了一种灵敏度高、特异性好的方法。
研究背景： 肿瘤细胞放化疗抵抗常可导致肿瘤预后不良。Aurora-A激酶(Aurora-A)是一种丝／苏氨酸蛋白激酶,与有丝分裂的纺锤体分离,中心体复制相关,且在多种肿瘤EPZ-6438订单中均高表达,是一种重要的癌基因。近期研究表明Aurora-A可促进肿瘤放化疗抵抗,由于Aurora-A与p53, BRCA1, BRCA2等多种DNA损伤应答蛋白有着相互作用,因此我们推测Aurora-A很可能通过调节DNA损伤应答促进肿瘤放化疗抵抗。 研究目的： 研究Aurora-A与DNA损伤应答的关系,揭示Aurora-A促进肿瘤放化疗抵抗的机理,探寻Aurora-A相关肿瘤的新型靶向药物分子,以期达到肿瘤治疗的最佳效果。