05)。同时,在DN-Smad2质粒转染后,无外源性TGF-β1刺激的MC中基础状态和加TGF-β1诱导的P-ERK、P-JNK表达均下调(P0.05)。 小结Smad信号通路本身参与了TGF-β1诱导的Ⅳ型胶原表达过程的调控。同时,Smad2表达下调也能影响P-ERK、P-JNK的表达,推测Smad2还可能通过影响MAPK通路间接影响Ⅳ型胶原的表达。 第三部分饰胶蛋白聚糖对TGF-β1诱导的Ⅳ型胶原表达及MAPK和Smad2通路的影响 目的初步探讨饰胶蛋白聚糖(DCN)在Ⅳ型胶原表达过程中的作用及其对TGF-β1活化的MAPKs和Smad2信号通路的影响。 方法培养MC,瞬时转染pcDNA3.1-DCN至MC内或用RNA干扰技术干扰MC内DCN基因表达,再用或不用外源性TGF-β1刺激,观察MC内Ⅳ型胶原表达以及MAPKs和Smad2通路的变化情况。 结果DCN转染后,与正常对照相比,MC内DCN蛋白和mRNA水平升高(P<0.05)；同时,MC内Ⅳ型胶原蛋白和mRNA水平降低(P<0.05)。相反,DCN干扰后,与正常对照组相比,MC中DCN蛋白和mRNA水平下降(P<0.05)；而Ⅳ型胶原表达高于对照组(P
在前人有关锰促进肉鸡心肌细胞MnSOD表达研究的基础上,本研究采用体外原代培养肉仔鸡心肌细胞为研究手段,进一步研究不同锰源对心肌细胞中MnSOD基因表达的调节及其可能机制。为此开展了如下3个实验。
实验一不同锰源对体外原代培养肉仔鸡心肌细胞中MnSOD基因表达影响的差异。在本课题前期研究的基础上试验采用5×2的二因子完全随机设计。即5种锰源和2个时间,5种锰源分别为MnCl2和3种络合强度分别为弱(Availa-Mn)、中(MnAAB)、强(Bioplex 寻找更多 Mn)的有机锰以及不加锰的0对照,采用0.5
mM的锰添加水平,2个时间为加锰处理12h和48h,共组成10个处理组,每组6个重复。实验结果显示,锰和处理时间对细胞MnSOD mRNA有极显著地互作效益(p
研究背景 骨质疏松症是中老年人群的常见病,以全身骨量减少,骨组织的微细结构破坏,骨强度降低和骨折危险性增高为特征。骨质疏松症最大的危害是骨质疏松性骨折,其中以髋部骨折危害最大,不仅髋部活动功能损伤明显,而且死亡率高。随着老龄化社会的到来,骨质疏松症防治的临床与基础研究已成为医学界研究的热点。运动是预防和治疗骨质疏松的重要因素。近年来,具有无创、副反应小、依从性好等特点的物理因子疗法防治骨质疏松症逐渐受到重视。全身振动运动是振动疗法中的一种,是指借助于振动仪器,使振动刺激通过下肢或躯干作用于全身,使机体整体振动,以达到防治疾病目的的方法。对去卵巢模型动物、低骨量人群及绝经后女性的研究显示,低于引起组织损伤的机械振动信号—低强度高频率振动(Low-magnitude, SCH772984数据表 high-frequency vibration, LMHFV),且有较好的增加骨形成和抑制骨吸收作用。作为一种治疗骨质疏松症的新方法,LMHFV具有无创、副反应小、高依从性的特点,能降低骨质疏松性骨折的发生率,在骨质疏松症的预防和治疗领域越来越受到重视。但是,LMHFV增加骨形成、抑制骨吸收的具体机制仍不清楚。 研究证明,振动应力可以影响成骨细胞的生物学特性,但振动应力影响成骨细胞生物学特性的具体机制尚不清楚。因此,研究振动应力影响成骨细胞生物学特性的分子机制,以其作为切入点进一步阐明LMHFV预防和治疗骨质疏松的机制,将为全身振动运动预防和治疗骨质疏松提供科学依据。 本研究通过自行研制的细胞振动仪,对体外培养的成骨前体MC3T3-E1细胞施加低强度(0.3g)、不同高频率(0、30、45、60、90Hz)振动(LMHFV),结合分子生物学检测技术,观察LMHFV对成骨前体MC3T3-E1细胞生物学特性的影响及其机制的初步研究。研究内容如下：
目的 1.研究低强度高频率振动(LMHFV)对成骨细胞生物学特性的影响。 2.研究环氧合酶-2(COX-2)在LMHFV影响成骨细胞生物学特性中的作甩。 3。研究LMHFV诱导成骨细胞COX-2蛋白表达的信号转导机制。 方法 I。低强度、高频率振动(LMHFV)影响成骨细胞生物学特性的作用 获悉更多 1. LMHFV影响成骨细胞OPG/RANKL比率的作用 (1)LMHFV对成骨细胞OPG/RANKL比率的影响 对MC3T3-E1细胞施加频率0、30、45、60、90Hz,强度0.3g,时间30min的振动,分别于振动后0、0.5、1.5、3、6h收集细胞培养上清液。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LMHFV加载后不同时间MC3T3-E1细胞分泌可溶性OPG、RANKL的情况。通过计算OPG/RANKL比率,将增加OPG/RANKL比率最高的振动频率做为本实验继续研究的频率。 (2)LMHFV加载成骨细胞条件培养基(Conditioned medium, CM)对破骨细胞分化成熟的影响 LMHFV (30Hz)加载MC3T3-E1细胞后含OPG/RANKL比率最高的条件培养基(Conditioned medium, CM30HZ)及LMHFV (OHz)加载后的条件培养基(Conditioned medium, CM0Hz),分别与含40ng/ml sRANKL、20ng/ml M-CSF的1640培养基按体积比1：1混合形成混合培养基。将破骨细胞前体RAW264.7细胞随机分为Control组(CM0Hz)、实验组(CM30Hz),混合培养基分别诱导破骨细胞前体RAW264.7细胞分化5、7天。①实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR, qPCR)分别检测第5、7天各组抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP) mRNA的表达水平；②TRAP检测试剂盒检测第5、7天各组TRAP活性；③TRAP染色计算第7天各组多核破骨细胞形成数目。 2. LMHFV影响成骨细胞分化的作用 (1) LMHFV对成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN) mRNA表达的影响： MC3T3-E1细胞随机分为Control组(0Hz)、LMHFV组(30Hz), Control组不予振动刺激,LMHFV组给予振动刺激(0.3g,30Hz,30min/day),分别加载4、8天后,收集细胞,提取细胞总RNA。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR, qPCR)检测ALP mRNA、OCN mRNA表达,以GAPDH(?)内对照,分析ALP mRNA、OCN mRNA相对表达的变化。 (2) LMHFV对成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OCN)表达的影响： MC3T3-E1细胞随机分为Control组(0Hz)、LMHFV组(30Hz), Control组不予振动刺激,LMHFV组给予振动刺激(0.