采用Western blot检测Pim-1和C-myc蛋白表达情况。 结果:初诊MM患者的Pim-1mRNA及蛋白水平在初诊骨髓瘤患者表达强度显著高于对照组。初诊MM患者的C-myc mRNA及蛋白水平在初诊骨髓瘤患者表达强度显著高于对照组。 结论:Pim-1及C-myc在MM中高表达，与对照组相比差异有显著性，与多项临床指标及分期有关，可能通过多种途径促进骨髓瘤细胞的生长而抑制其凋亡，且二者在多发性骨髓瘤的发生发展中可能具有协同作用。
0-GlcNAc修饰是一种广泛存在于细胞核和细胞质中的翻译后修饰过程,参与多种生理代谢进程。至今,人们对O-GlcNAc修饰位点附近底物蛋白特征还不甚了解。为了解决这个问题,本课题采取生物信息学分析和实验生物学相结合的研究方法,对修饰位点附近蛋白结构,氨基酸序列特征进行了较为深入的分析。首先,我们对38个O-GlcNAc修饰位点处蛋白结构进行分析,发现糖基化修饰主要发生在无规则卷曲和铰链区,这表明一级序列在O-GlcNAc修饰中占有至关重要的地位。另外,我们对317条来自人、大鼠和小鼠的O-GlcNAc修饰肽序列做了频度分析,发现一特征序列：PPVS/TSATT.以此序列为基准,我们设计许多肽序列来揭示修饰位点附近氨基酸的偏好性：在-2、-1和+2位不带电荷的小侧链氨基酸表现比较高的反应活性。最后,我们在O-GlcNAc修饰蛋白a-crya上通过定点突变和Western 所以 Blot验证了这一规律。 综合这些研究结果,我们发现在-2位是脯氨酸或者丙氨酸,在-1位是缬氨酸、丙氨酸、苏氨酸或丝氨酸,在+2位是丙氨酸、丝氨酸、脯氨酸、苏氨酸或甘氨酸时底物蛋白(多肽)表现出比较高的反应活性。这些研究结果将有助于更好的预测蛋白质的糖基化位点以及开展更深入的功能研究。

另外,我们还开展了受体广泛性研究,借助噬菌体展示和ELISA技术,从30个噬菌体克隆中筛选出4条可能会发生O-GlcNAc修饰的肽序列,但这还需要进一步实验验证。
胃癌(GC)是严重危害人类健康的常见肿瘤之一,在全球癌症死亡率仅次于肺癌居第二位,胃癌发病率存在明显的地域差异,在部分亚洲国家、欧洲中部、美国中部和南非发病率较高,尤其是日本、韩国和中国东亚三国为高发地区,其发病总数约占全球总数的2/3。在中国胃癌发病率和死亡率均居恶性肿瘤的首位。在我国每年有近30万人死于胃癌,另有约40万新发病例。传统治疗例如手术治疗、放疗、化疗在胃癌的早期阶段发挥重要作用,晚期胃癌病人主要采用联合治疗的方式,但是晚期胃癌病人总的生存期仍不尽如人意。更好了解胃癌发生机制,采用新的治疗手段对晚期胃癌来说是非常必要的。 Fludarabine 目前研究表明,胃癌组织和细胞很多基因发生了突变,例如：HER-2过表达、EGFR过表达、PIK3CA突变和PTEN缺失。HER-2在10%-38%胃癌样本中高表达；EGFR在27%-44%胃癌样本中高表达。这两个受体被激活以后形成同源或异源二聚体,然后激活PI3K-Akt-mTOR信号通路和Ras-Raf-MEK-ERK信号通路。PI3K-Akt-mTOR信号通路在胃癌中经常被激活,PIK3CA在4%-36%的胃癌病例中发生了激活突变,PTEN在20%-36%胃癌病例中发生了缺失。由于上游受体的过表达、PIK3CA激活突变和PTEN缺失,导致29%-86%胃癌病人持续激活p-Akt和47%-64%胃癌病人持续激活p-mTOR。Ras-Raf-MEK-ERK信号通路是HER家族下游的一条重要的信号通路。在胃癌中K-RAS在2%-20%胃癌病例中发生了突变,B-RAF在0%-2.7%胃癌病例中发生了突变。这两个信号通路在细胞的增殖和存活中发挥重要作用。关于晚期胃癌的靶向治疗也主要集中在HER信号通路、PI3K-Akt-mTOR信号通路和Ras-Raf-MEK-ERK信号通路。曲妥珠单抗己被批准用于HER-2+晚期胃癌的一线治疗。西妥昔单抗、帕尼单抗、拉帕替尼和依维莫司处于临床Ⅲ期阶段。

WYK431是新型喹唑啉衍生物,前期研究表明,其对多种肿瘤细胞株均有较好的生长抑制作用。其中对人胃癌BGC823细胞最敏感,48h

Alisertib分子重量 IC50为2.16μM,但机制不明。本研究,我们评价了WYK431对人胃癌BGC823细胞体内抗肿瘤活性,并对其作用机制进一步研究。皮下异体移植胃癌BGC823细胞的BALB/c裸鼠分别给予5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg WYK431治疗。结果显示5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg WYK431治疗组与对照组相比抑瘤率分别为28.4%、41.9%和63.6%(p
目的 观察胃泌素、曲妥珠单抗对胃癌细胞的协同增殖抑制作用,并研究胃泌素受体(Cholecystokinin B receptor, CCKBR)及其下游分子信号通路在协同抗肿瘤作用中的分子生物学机制。 方法： 1.在NCI-N87、SGC7901两种胃癌细胞株中,通过细胞计数及克隆形成实验观察胃泌素、曲妥珠单抗对HER2阳性及HER2阴性胃癌细胞株的协同抗肿瘤作用,并通过流式细胞术观察二者对细胞周期的调控作用。 2.在SGC7901细胞株中,予以胃泌素、曲妥珠单抗单药及联合用药处理后提取蛋白Western-blot检测CCKBR、AE1、AE2、P16、CyclinD1、β-catenin等相关蛋白表达水平改变,并通过核浆分离实验观察p16蛋白在细胞浆、细胞核中的定位改变,研究CCKBR,及其下游分子信号通路在协同抑制胃癌细胞增殖中所起的作用。 3. Western-blot检测胃泌素、曲妥珠单抗对SGC7901、NCI-N87细胞中CCKBR蛋白表达的影响:通过Realtime-PCR了解二者对CCKBR蛋白表达调控的机制,并通过CHX、MG132实验验证二者对CCKBR蛋自稳定性及泛素化水平的影响并阐明其协同上调CCKBR的分子生物学机制。在SGC7901中转染pEGFP-CCKBR带GFP标签的XKBR过表达载体,进一步观察二者对CCKBR的膜定位的影响。 4.通过建立裸鼠成瘤在体模型观察胃泌素、曲妥珠单抗的协同抗肿瘤作用,绘制肿瘤生长曲线；并取裸鼠荷瘤组织开展免疫组织化学染色分析,观察CCKBR的表达及膜定位的影响,提取蛋白后Western-blot检测AE1、AE2、P16、CyclisD1等蛋白表达改变,在体研究胃泌素、曲妥珠单抗通过上调CCKBR抑制胃癌细胞增殖的分子生物学机制。 结果： 1.7种胃癌细胞株及永生化的正常的人类胃粘膜上皮细胞株GES-1中只有NCI-N87表达HER2蛋白,而CCKBR在大部分胃癌细胞株中均表达阳性。 2.曲妥珠单抗对HER2阳性的NCI-N87细胞有明显增殖抑制作用,对HER2阴性的SGC7901细胞无效。胃泌素对SGC7901、NCI-N87细胞均有增殖抑制作甩,细胞计数及克隆形成实验证实在NC1-N87、SGC7901细胞中,胃泌素、曲妥珠单抗联合用药与单药组相比有明显协同肿瘤增殖抑制作用。流式细胞术提示胃泌素、曲妥珠单抗可协同阻滞SGC7901细胞于G0/G1期。 3.

05);抑制组p38MAPK活性在各时相点的变化无显著性差异(P>0.05),除离体前及再灌注120 min两组肝脏的p38MAPK活性无显著性差异外,其余各时相点p38MAPK活性均显著性低于对照组(P0.05);至再灌注60 min及120 min,对照组ICAM1 所以 mRNA的表达水平显著性高于组内其它时相点(P<0.01),而抑制组虽然也显著高于组内其它时相点(P<0.05),但却显著性低于同时相点对照组的表达水平(P
To investigate the effects of mechanical factors on matrix metalloproteinase9(MMP-9) expressions in rat bone marrow-derived

mesenchymal stem cells(MSCs) and possible mechanism signal.Rat bone marrow MSCs were isolated and cultured,then,exposed to laminar shear stress at
目的:研究p38蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路抑制剂SB202190对体外培养的K562/多柔比星(Dox)耐药细胞表达P-糖蛋白(PGP)的影响。方法:建立PGP高表达的K562/Dox耐药细胞株为对照组。在K562/Dox细胞中加入SB202190为实验组。采用免疫组化学、Western blot和RT-PCR技术检测两组细胞PGP的表达情况;采用四甲基偶氮唑盐法比较两组对苯妥英纳的耐药性。结果:相对于K562/Dox细胞组,给予SB202190后K562/Dox细胞表达PGP水平降低(P
AIM:To

investigate the molecular mechanism and functional consequences of heme oxygenase-1(HO-1) activation by lansoprazole in endothelial cells and macrophages. METHODS:Expression of HO-1 mRNA was analyzed by Northern blotting.Western blotting was used to determine the HO-1 and ferritin protein levels. NADPH-dependent reactive oxygen species(ROS) formation was measured with lucigenin-enhanced chemiluminescence.HO-1 promoter activity in mouse fibroblasts,stably transfected with a 15-kb HO-1 gene that drives expression of the reporter gene luciferase, was assessed 还有 using in vivo bioluminescence imaging. RESULTS:Lansoprazole 许多 increased HO-1 mRNA levels in endothelial cells and HO-1 protein levelsin macrophages.In addition,lansoprazole-induced ferritin protein levels in both cell

systems.Moreover, induction of the antioxidant proteins HO-1 and ferritin by lansoprazole was followed by a decrease in NADPH- mediated ROS formation.The radical scavenging properties of lansoprazole were diminished in the presence of the HO inhibitor,chromium mesoporphyrin IX.Induction of HO-1 gene expression by lansoprazole was not related to oxidative stress or to the activation of the mitogen-activated protein kinase pathway. However,the phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor LY294002 showed a concentration-dependent inhibition of HO-1 mRNA and promoter activity. CONCLUSION:Activation of HO-1 and ferritin may account for the gastric protection of lansoprazole and is dependent on a pathway blocked by LY294002.
目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤的治疗作用及机制。方法88只雄性蒙古沙鼠随机分成对照组、模型组、补阳还五汤高、低剂量组。据Kirino法制作沙鼠前脑缺血模型。术后1、6h,1、3、7d尼氏染色观察海马区神经细胞组织形态变化,Western印迹法检测海马区磷酸化p38MAPK的表达,TUNEL法检测凋亡细胞,术后7～13d八臂迷宫法测试动物学习记忆功能。结果与对照组比较,脑缺血后海马区神经元结构损伤明显、磷酸化p38MAPK表达水平、凋亡神经细胞数量增加(P<0.05);大鼠的学习记忆功能下降;与模型组比较,补阳还五汤组大鼠的学习记忆功能得到改善、神经元形态结构损伤减轻、磷酸化p38MAPK蛋白以及神经细胞凋亡数量回降,上述变化在高剂量补阳还五汤组更为明显(P<0.

05);IPO组各指标较IR组显著下降(P
目的探讨IκB激酶(IκB kinase,IKK)催化亚基α(IKKα)在紫外线(ultraviolet radiation,UV)诱导的细胞反应中介导p53活化的信号转导机制。方法采用双荧光素酶报告基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性。Western印迹检测IKKα、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB在野生型小鼠成纤维细胞中能显著诱导p53发生磷酸化修饰反应;同时转录激活活性显著提高,IKKα基因敲除后,以上活化反应受到显著抑制,而恢复IKKα表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKKα也能调节p38K的诱导活化,抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKα能通过调控p38K活化进而介导UVB诱导p53磷酸化修饰反应。
多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统脱髓鞘性疾病,近年的研究已经证实遗传、环境、免疫等因素改变引起的免疫细胞比例失衡、机体的氧化应激等在MS发病中起到重要作用。髓鞘是有髓神经纤维外包绕的一层膜,它在中枢神经系统主要是由少突胶质细胞的片状突起包绕神经元轴突而形成的螺旋形多长膜性结构。病理染色及免疫组化染色可发现多发性硬化患者的病灶处大量的神经纤维脱髓鞘。
缺血预适应是机体对缺血性损伤的一种内源性保护机制。近来研究发现,p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)的激活参与了脑缺血预适应的发生发展过程。关于p38MAPK在脑缺血预适应中的作用,报道的结果并不一致。本文就近十余年来p38MAPK在脑缺血预适应中的作用进展进行综述。
The

LBH589购买 Editor welcomes submissions for possible publication in the Letters to the Editor section.Letters commenting on an article published in the Journal or other interesting pieces will be considered if they are received within

6 weeks of the time the article was published.Authors of the article being commented on will be given an opportunity to offer a timely response to the letter Authors of letters will be notified that the letter has been received.Unpublished letters cannot be returned.
骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell,BMSC)是一种具有多向分化潜能的成体干细胞,适量的力学刺激能促进BMSC向成骨细胞分化。近几年来,一些学者利用力学刺激作用于体外培养的BMSC,促进其向成骨细胞分化,并且对其诱导分化的机制进行了大量研究。尽管这一机制目前尚不十分清楚,但是已有的研究表明,多条信号通路参与了该力学信号传导。本文就国内外近几年来关于力学信号影响BMSC成骨分化的信号转导机制研究进展做一综述。
目的:探讨基因修饰过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响与作用机制。方法:将稳定过表达VCAM-1的MSC细胞(MIGR1-VCAM-1)和转入空载体的MSC细胞(MIGR1)分别向脂肪细胞诱导分化,以原位油红O染色和real-time INK-128 也许 PCR检测成脂分化能力与相关关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达;Western

blot检测相关信号通路P38、ERK和JNK通路的活化。利用信号通路抑制剂处理MSC,观察其成脂分化能力的变化。结果:无论是自分化组还是诱导分化组,过表达VCAM-1的MIGR1-VCAM-1/MSC与对照组MIGR1/MSC相比,脂滴变大,脂肪细胞数量显著增加(P
为研究小型猪复合麻醉剂(XFM)对大鼠中枢神经系统p-p38蛋白表达的影响,将30只大鼠分为对照组(C组)和麻醉剂组(M组),M组又分为4个亚组:M1组(注射XFM后大鼠翻正反射消失即刻)、M2组(注射XFM后大鼠翻正反射消失后1h)、M3组(注射XFM后大鼠翻正反射恢复即刻)和M4组(注射XFM后大鼠翻正反射恢复后1h),各组大鼠到达预定的时间点后分别采取脑组织,应用RT-PCR法检测脑内p38 mRNA转录量,应用Western blot方法检测中枢神经系统中p-p38蛋白的表达量。大鼠注射XFM后,与对照组比较,试验组大鼠大脑皮层和丘脑p38mRNA转录量显著降低(P<0.05),在苏醒过程中有所恢复,但仍显著低于对照组(P<0.05);大脑皮层和丘脑内p-p38蛋白的相对表达量,在M1、M2组的时间点显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);大鼠注射XFM后,与对照组比较,试验组大鼠小脑、海马、脑干内p38mRNA转录量显著升高(P<0.05),在苏醒过程中仍显著高于对照组(P<0.05);小脑、海马、脑干内p-p38蛋白的表达量,在M1组、M2组、M3组显著升高,与对照组相比差异显著(P<0.05或P0.

In detail, firstly we describe the therapeutic approaches that utilize the monoclonal antibodies while in the second part we analyze the cell-based immunotherapies.
目的探讨间质上皮转化因子(mesenchymal-epithelial selleck公司 transition factor,c-MET)m RNA在原发性肺腺癌组织中的表达及意义。方法回顾性分析2011年7月-2013年10月在我院手术并确诊的83例原发性肺腺癌患者的临床资料及c-MET m RNA检测结果。根据c-MET m RNA检测结果将患者分为高表达组和低表达组。结果 83例中,c-MET m RNA高表达占36.1%(30/83)。高表达组淋巴结转移率为46.7%(14/30),高于低表达组的20.8%(11/53)(P<0.05)。高表达组的1年、2年无进展生存率为53.3%和22.2%,低表达组为81.1%和67.9%,两组无进展生存时间有统计学差异(P
目的研究雷公藤红素对肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡的影响及机制。方法应用CCK8试剂检测雷公藤红素对SMMC-7721细胞的毒性和增殖影响,用软琼脂克隆形成试验检测药物对肝癌细胞的克隆形成能力的干预,通过核染色及检测活化caspase-3水平观察细胞凋亡情况,用流式细胞术检测药物干预对细胞周期分布的影响,并用Western

blot检测细胞周期相关蛋白细胞周期素B1(cyclin B1)及细胞分裂周期蛋白2(cell division 很少 cycle protein 2,cdc2)水平。结果雷公藤红素以剂量依赖性方式使SMMC-7721细胞的增殖下降和克隆形成减少,使细胞凋亡增加及细胞周期阻滞在G2/M期,同时增加失活cdc2表达,并导致cyclin B1的积聚。结论雷公藤红素可显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖并促进细胞凋亡,对分裂周期相关蛋白调控导致的分裂阻滞可能是影响其对细胞凋亡和增殖作用的机制之一。
受体酪氨酸激酶c-Met即肝细胞生长因子HGF受体。HGF/c-Met信号通路在肿瘤形成、生长和转移过程中被频繁激活,因此,c-Met已成为抗癌药物研究中一个重要靶标。重点介绍近年来基于c-Met通路的抗癌药物研究进展。
雷公藤红素(celastrol)是一种从传统中药雷公藤根皮中提取出的三萜单体,具有显著的抗癌活性。它作为一种蛋白酶体抑制剂,能影响肿瘤细胞内多种信号通路,如抑制蛋白酶体、IKKα/β激酶、HSP90等,并能激活caspase3/7。本文就雷公藤红素诱导肿瘤细胞凋亡及其机制做一系统综述。
The

HGF/c-Met pathway plays an important role in the proliferation, invasion, angiogenesis, and metastasis of tumors. With the successful development of small molecule c-Met kinase inhibitors, this signal pathway has become the focus of oncology research. In this review, we discuss the basic mechanism, targeted therapy, and early results of clinical trials of the HGF/c-Met pathway.
目的分析c-Met基因在新疆哈萨克族(哈族)、汉族食管鳞癌患者中的表达及其与临床病理的相关性。方法收集2013年5月至2014年5月新疆医科大学附属肿瘤医院收治且手术切除的100例冰冻食管鳞状细胞癌组织以及配对对癌远端正常组织的标本,其中哈族50例,汉族50例。观察两组c-Met基因转录的m RNA的表达相关情况。结果在本次研究完成后我们发现,c-Met基因转录的m

RNA在所有患者的食管鳞癌组织中共50例呈现阳性表达,其中汉族40例,哈族60例,配对癌远端的正常组织中6例呈现出阳性表达的情况,其中汉族2例,哈族4例,对于食管鳞癌组织及其配对的癌远端的正常组织相比,c-Met基因的表达呈现出明显增加的情况,并与肿瘤细胞的分化程度有较大的相关性。结论对于食管鳞癌患者而言,c-Met基因在部分的食管鳞癌的组织中会呈现出一种高表达的情况,同时与患者的性别、年龄以及肿瘤的发生部位并无显著的相关性,但与患者的肿瘤分化程度有着明显的相关性,同时c-Met的表达在哈族以及汉族患者的食管鳞癌中的表达差异无统计学意义。
Gastric STI571体外 cancer remains one among the leading causes of cancer-related deaths, regardless of its decreasing incidence and newly available treatment options. Most patients present at an advanced stage and are treated with upfront systemic chemotherapy. Those patients receiving first-line therapy may initially respond to treatment, but many of them relapse over time. In such condition, second-line treatment for disease progression remains the only available option. Although there exists no standard approach in the second-line setting, several phase Ⅲ trials have shown modest survival benefit in patients receiving irinotecan, taxane and ramucirumab over the best supportive care or active agents. This review analyzes the currently available treatment regimens and future directions of research in the second-line setting for metastatic gastric cancer with the best available evidence.

0对结果进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用q检验。

结果: 1、SHG-44细胞株在DMEM培养液中生长良好,在倒置显微镜下可见细胞呈长梭形,核异形性常见。细胞的冻存与复苏对细胞生物学特性没有影响。加入他莫昔芬后,细胞折光性变弱,轮廓增强,突起减少,胞质中出现大量颗粒,细胞之间的间隙明显增大,细胞变老,脱落,生长受到抑制。正常对照细胞生长良好。2、加入PKCα抗体的SHG-44细胞的细胞质中出现棕黄色染色,提示细胞中含有PKC,而加入ER抗体的细胞中未出现染色,提示SHG-44细胞中无ER成分。3、MTT试验显示:应用不同浓度他莫昔芬作用后测量各培养孔的吸光值,与空白对照组相比,他莫昔芬使细胞的吸光值明显下降。再计算细胞的抑制率,结果显示,随着他莫昔芬从2μmol/L上升至10μmol/L,SHG-44细胞的抑制率也明显增加,但超过10μmol/L,则抑制率的变化就不够显著。同一药物浓度下,48h组的细胞抑制率明显高于24h组,但与48h组相比较,在72h组中只有6μmol/L组的抑制率增加了。4、流式细胞仪检测显示:与空白对照组相比,SHG-44细胞经过他莫昔芬作用后,G0/G1期细胞比例减少,G2/M期及S期细胞比例增多,细胞阻滞于G2/M期及S期。细胞凋亡检测显示:与空白对照相比,应用他莫昔芬组凋亡细胞比例增高,并且随着作用剂量的增加,凋亡细胞比例有增多的趋势。 GSK1120212半抑制浓度 第二部分SHG-44人胶质瘤细胞离子通道特性及他莫昔芬调控研究 方法:1、培养SHG-44胶质瘤细胞,试验前,以0.25%胰蛋白酶及0.02% EDTA消化,制成细胞悬液,接种于预先放置盖玻片含无血清培养基的培养板中,经过48小时后可进行膜片钳记录。应用全细胞膜片钳方式记录SHG-44细胞膜上的钠通道、内向整流钾通道及氯离子通道电流,细胞破膜后5min开始记录。2、绘制各离子通道的电流密度–电压关系(I–V)曲线。观察施用不同浓度他莫昔芬后各离子通道的I-V曲线及峰值电流密度的变化。3、以I/Imax为纵坐标,以他莫昔芬浓度为横坐标,绘制各通道药物作用的量效关系散点图,以Origin 7.5软件行Hill拟合,求出他莫昔芬抑制各离子通道的半数抑制浓度(IC50)值。4、以标准化后的电导值对测试电压脉冲作图。以Origin 7.5软件行Boltzmann拟合,绘出对照组及各处理组钠、钾、氯通道的激活曲线,求出通道的半数激活电压(V1/2)及斜率(k)值,并观察不同浓度的他莫昔芬对它们的影响。5、比较空白组及加入他莫昔芬、PKC抑制剂、PKC激活剂、他莫昔芬+PKC抑制剂各处理组之间的氯离子通道电流变化情况,以分析他莫昔芬对通道的影响是否与抑制PKC活性有关及其程度。他莫昔芬浓度为1.5μmol/L 可能 ,PKC抑制剂为100nmol/L十字孢碱(staurosporine),PKC激活剂为1μmol/L 12-佛波醇脂(PMA)。6、应用SPSS 12软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(χ-±s)表示,首先进行组间均衡性检验,两组计量资料采用t检验或配对t检验,成组资料间比较采用配伍组分析,以P
目的: 1.研究月经周期不同时期人输卵管黏膜上皮维生素D受体(vitamin

D receptor,VDR)蛋白及其mRNA的表达与变化,阐明人输卵管组织中是否存在VDR表达及其表达状况。 2.检测输卵管妊娠病理状态下人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达及其变化,分析人输卵管黏膜上皮VDR蛋白表达与输卵管妊娠发病的可能关系。 3.体外培养人输卵管上皮细胞,观察1α,25-二羟维生素D_3(1α,25-dihydroxyvitamin D_3,1α,25-(OH)_2D_3)对人输卵管上皮细胞增殖的影响。

4.检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)mRNA及其蛋白表达的影响,分析1α,25-(OH)_2D_3对人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k表达可能的调控作用,探讨1α,25-(OH)_2D_3调节人输卵管上皮细胞CaBP-D28k表达可能的作用机制。 方法: 1.应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法和逆转录聚合酶链反应(reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测人输卵管黏膜上皮VDR蛋白及其mRNA的表达。 2.应用IHC法检测输卵管妊娠病理状态下,种植部位和非种植部位人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达。 3.应用机械法结合差速贴壁原理获取并体外培养人输卵管上皮细胞,免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)法鉴定上皮细胞纯度,建立人输卵管上皮细胞的体外培养体系。应用噻唑兰(3.(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium AZD4547浓度 bromide,MTT)比色法检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞增殖的影响。 4.应用RT-PCR法和免疫印迹(Western blot,WB)法检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k mRNA及其蛋白表达的影响。 结果: 1.人输卵管黏膜上皮VDR蛋白及VDR mRNA的表达 人输卵管黏膜上皮可检测到VDR蛋白及其mRNA表达。VDR蛋白主要表达于人输卵管上皮细胞的细胞核内,部分间质平滑肌细胞核内亦可见阳性染色。相同时期各不同部位人输卵管上皮细胞VDR蛋白表达无明显差别(P＞0.05),随月经周期变化,各不同部位输卵管上皮细胞VDR蛋白表达发生改变,在增生早期和分泌中晚期较低,与之比较,在增生中晚期和分泌早期其表达明显增高(P＜0.01),至分泌早期达最高值。壶腹部人输卵管黏膜上皮组织VDR mRNA表达在增生早期和分泌中晚期较低,在增生中晚期和分泌早期明显增高(P＜0.01)。 2.输卵管妊娠病理状态下人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达 输卵管妊娠病理状态下,种植部位和非种植部位人输卵管黏膜上皮均可检测到VDR蛋白阳性表达。VDR蛋白阳性表达于输卵管上皮细胞的细胞核内,部分间质平滑肌细胞核内亦可见阳性染色。种植部位人输卵管上皮细胞VDR蛋白表达较低,与之比较,非种植部位输卵管上皮细胞VDR蛋白表达明显增高(P=0.017,P＜0.05)。 3.