整体试验：建立裸鼠肺癌移植瘤模型,包括A549,H292等多种肺癌。Pt(0506)101尾静脉注射给药,每4天给药1次,共5次。顺铂和卡铂作为阳性对照药。每3天测量小鼠体重及肿瘤体积1次。给药结束后取肿瘤称重,并拍照。 2.离体试验：采用MTT法检测Pt(0506)101对各种肿瘤细胞的体外细胞毒作用,流式细胞仪检测Pt(0506)101作用后的肺癌细胞A549、H292的细胞周期、凋亡率的变化。 3.作用机制研究：1)在肺癌细胞A549、H292中加入不同浓度的Pt(0506)101,并以顺铂和卡铂作为阳性对照药,48h后检测凋亡蛋白以及信号通路相关蛋白表达情况。2)A549细胞中p53基因特异性敲除后,western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。3)JNK抑制剂(SP600125)、p38抑制剂(SB203580)、Erkl/2抑制剂(U0126)以及P13K抑制剂(LY294002)干预A549细胞后,western blot法检测Pt(0506)101诱导表达上升凋亡相关蛋白。4)超声冻融法提取并测定Pt(0506)101作用后A549细胞内GSH水平,并用流式细胞仪进一步检测ROS的表达情况。用抗氧化剂NAC干预后,测定细胞凋亡率。 结果： 1.整体试验结果：Pt(0506)101-30mg/kg、60mg/kg、120mg/kg呈剂量依赖性地抑制裸鼠A549、H292肺癌移植瘤的生长,且与模型组比较有显著性差异,A549的肿瘤抑制率分别为31.00%、47.03%、64.64%；H292的肿瘤抑制率分别为45.53%、53.79%、65.41%。Pt(0506)101抗肺癌作用略弱于顺铂DDP-6mg/kg,与卡铂CBP-60mg/kg接近。

2.离体试验结果：1)Pt(0506)101对A549、H292、H460等肺癌细胞株的细胞毒作用较强,虽然作用不及顺铂,却明显强于对卡铂。对顺铂耐药株A549/PPD的作用强度较顺铂强；而对正常肺上皮细胞株BEAS-2B,其作用强度比顺铂弱2倍,此外,Pt(0506)101对胃癌MGC-803, Gefitinib LBH589浓度 HGC-27具有很强的抗癌活性,提示Pt(0506)101在抗瘤作用方面有选择性。2)100gM

Pt(0506)101预处理肺癌细胞48h能显著性促进A549,H292和LTEP-A-2三种肺癌细胞发生凋亡**(P
目的：近期我们研究发现既往主要应用于治疗感染中毒性休克、急性肺损伤等感染性炎性疾病的药物乌司他丁在卵清蛋白（OVA）诱导的小鼠变应性炎症模型中具有免疫调节和抗氧化作用，同时还发现其免疫调节、抗氧化作用与血红素加氧酶(Heme Oxygenase，HO)-1密切相关。 乌司他丁(Ulinastatin，UTI）是一种高效广谱的水解酶抑制剂，感染性炎症以中性粒细胞介导为主，而变应性炎症以嗜酸性粒细胞、肥大细胞等免疫细胞介导为主，二者的作用机制截然不同。因此进一步深入明确UTI在变应性炎症中的药理作用机制，为其转化为治疗变应性炎症的辅助用药提供实验室依据。HO-1属于微粒体催化酶，是体内免疫调节和抗氧化的重要调控因子。前期实验我们发现，乌司他丁在体内实验模型中发挥免疫调节、抗氧化作用与HO-1密切相关，乌司他丁是否是通过调控HO-1以及是通过何种信号通路来调控HO-1发挥免疫调节、抗氧化作用的机制需要在体外细胞实验模型中进一步探讨。 肥大细胞是介导变应性炎症的免疫细胞之一，变应性炎症的病理变化主要表现为肥大细胞活化脱颗粒，进而释放大量炎性介质。许多研究证明Th1/Th2细胞因子失衡是气道变态反应性炎症疾病发病机制的主要原因之一。因此实验选取Th2的代表因子IL-4作为刺激因素，它可以刺激B细胞增殖，从而产生大量的IgE抗体，导致肥大细胞活化。因此，本课题选用IL-4刺激肥大细胞活化，建立体外细胞实验模型对乌司他丁发挥免疫调节、抗氧化的药理作用机制进行深入探讨。 方法：肥大细胞（P815细胞株，购买自美国）培养于1640培养基中，其中含有10%新生牛血清,根据实验设计分组：空白对照组（Con组）、IL-4刺激组、乌司他丁干预组（UTI+IL-4组）、Znpp干预组（Znpp+UTI+IL-4组）。通过检测类胰蛋白酶活力及Th1/Th2细胞因子（IL-5、IL-13、TNF-α、INF-γ）水平从免疫调节角度验证乌司他丁是否能够抑制IL-4介导的肥大细胞活化；通过检测活性自由氧（ROS）、蛋白质羟基含量水平、丙二醛（MDA）及抗氧化酶指标：总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、微量还原性谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的水平从氧化应激角度验证乌司他丁是否能够调节IL-4介导的肥大细胞活化引起的氧化/抗氧化失衡；应用血红素加氧酶(Heme

Oxygenase，HO)-1的抑制剂Znpp验证乌司他丁是否通过调节HO-1来发挥免疫调节、抗氧化作用；通过电泳迁移率（EMSA）、WesternBlot等方法检测HO-1的上游调控因子Nrf2及相关信号通路探讨乌司他丁调节HO-1表达的具体机制。 结果： 1IL-4、UTI的最适干预时间和浓度 通过MTT法及类胰蛋白酶活力实验确定IL-4的最适宜浓度及干预时间分别为100ng/ml、6h；通过MTT法及UTI诱导HO-1蛋白水平的表达确定UTI的最适宜浓度及干预时间分别为100U/ml、2h。 2Znpp抑制HO-1在肥大细胞中的表达 肥大细胞在给予HO-1的抑制剂Znpp干预后，HO-1的表达无论是在细胞免疫荧光水平，还是在蛋白表达水平都有明显减弱趋势，差异均具有统计学意义（P﹤0.05）。 selleckchem 3UTI抑制IL-4介导的肥大细胞脱颗粒 IL-4刺激肥大细胞后，类胰蛋白酶活力明显增强，高于空白对照组，差异具有统计学意义（P﹤0.05）；UTI能够明显降低类胰蛋白酶活力，抑制肥大细胞活化状态，差异具有统计学意义（P﹤0.05）。 4UTI调节IL-4介导肥大细胞活化引起的Th1/Th2细胞因子失衡 Th1代表因子IL-5、IL-13、TNF-α的表达在IL-4刺激组明显高于空白对照组，Th2代表因子INF-γ的表达明显低于空白对照组，差异具有统计学意义（P﹤0.05）；UTI明显抑制IL-5、IL-13、TNF-α的表达，提高INF-γ的表达，从而调节IL-4介导肥大细胞活化引起的Th1/Th2细胞因子失衡，差异具有统计学意义（P﹤0.05）。 5UTI调节IL-4介导肥大细胞活化引起的氧化/抗氧化失衡 在空白对照组中，活性自由氧（ROS）、蛋白质羟基含量及丙二醛(MDA)处于低水平；给予IL-4刺激后，三个氧化应激损伤指标表达明显升高，差异具有统计学意义（P﹤0.05），抗氧化酶（T-AOC、SOD、CAT、GSH、GSH-Px）水平明显下调，差异具有统计学意义（P﹤0.05）；当给予UTI干预后，ROS、蛋白质羟基含量及MDA水平明显降低，差异具有统计学意义（P﹤0.

METHODS: Human embryonic stem cells (hESC) differentiated to cardiomyocytes (CM) using a p38 MAPK inhibitor (SB203580) based serum-free medium (SB media). Nutrient supplements known to increase cell viability were added

to SB medium. The ability of these supplements to improve cardiomyogenesis was evaluated by measurements of cell viability, total cell count, and the expression of cardiac markers via flow cytometry. Tariquidar 价格 An improved medium containing Soy hydrolysate (HySoy) and bovine serum albumin (BSA) (SupSB media) was developed and tested on 2 additional cell lines (H1 and Siu-hiPSC). Characterization of the cardiomyocytes was done by immunohistochemistry, electrophysiology and quantitative real-time reverse transcriptionpolymerase chain reaction. RESULTS: hESC cell line, HES-3, differentiating in SB medium for 16 d resulted in a cardiomyocyte yield of 0.07 ± 0.03 CM/hESC. A new medium (SupSB media) was developed with the addition of HySoy and BSA to SB medium. This medium resulted in 2.6 fold increase in cardiomyocyte yield (0.21

± 0.08 CM/hESC). The robustness of SupSB medium was further demonstrated VE-821购买 using two additional pluripotent cell lines (H1, hESC and Siu1, hiPSC), showing a 15 and 9 fold increase in cardiomyocyte yield respectively. The age (passage number) of the pluripotent cells did not affect the cardiomyocyte yields. Embryoid body (EB) cardiomyocytes formed in SupSB medium expressed canonical cardiac markers (sarcomeric α-actinin, myosin heavy chain and troponin-T) and demonstrated all three major phenotypes: nodal-, atrial- and ventricular-like. Electrophysiological characteristics (maximum diastolic potentials and action potential durations) of cardiomyocytes derived from SB and SupSB media were similar. CONCLUSION:

The nutrient supplementation (HySoy and BSA) leads to increase in cell viability, cell yield and cardiac marker expression during cardiomyocyte Doxorubicin化学结构 differentiation, translating to an overall increase in cardiomyocyte yield.
目的探讨乳凝集素通过ERK、p38 MAPK信号通路对未成熟树突状细胞(iDCs)分泌白介素(IL)-12和IL-10的影响。方法脐带血中分离得到单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(50 ng/mL)和重组人白介素-4(10 ng/mL),同时按照不同组合加入乳凝集素(10μg/mL)和信号通路阻滞剂,诱导分化为iDCs。分组如下:①对照组;②乳凝集素组;③ERK通路阻滞组;④ERK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑤p38MAPK通路阻滞组;⑥p38MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑦JNK通路阻滞组;⑧JNK通路阻滞剂+乳凝集素组。采用Western blotting检测ERK、JNK、p38MAPK蛋白磷酸化水平,ELISA法检测iDCs分泌IL-12和IL-10的变化。结果与对照组比较,乳凝集素组ERK蛋白磷酸化水平升高(P0.05),IL-12和IL-10的分泌量显著降低(P<0.05)。ERK通路阻滞组和ERK通路阻滞剂+乳凝集素组中ERK蛋白磷酸化水平几乎为零;ERK阻滞剂+乳凝集素组IL-12和IL-10的分泌量显著高于乳凝集素组(P<0.

PCR array法检测结果显示，在短时间点（3h）UPR信号通路多种未折叠蛋白伴侣分子（包括PERK、ATF6和IRE1三条应答途径）表达上调应答了应激，长时间点（24h）则呈下降趋势，表明ERS趋缓，而JNK3则持续高表达，同时JNK家族其他亚型无明显变化。Western blot检测也显示JNK3蛋白水平表达上调。 3.结合mRNA及Western blot检测确认Si3为JNK3有效沉默序列。 4.较之S1处理，抑制剂Ⅻ和siRNA干预后，光镜下皱缩细胞增多；细胞存活率显著降低；抑制剂Ⅻ与S1联合应用后细胞凋亡率增加。 5.较之S1处理，抑制剂Ⅻ或siRNA与S1合并干预后，Bcl-2表达降低，同时Cleaved Caspase-3蛋白的表达增加；JNK靶标分子c-Jun、p-c-Jun表达明显下降；而c-Jun的负性调节靶标p53表达上调，相应地，p53下游分子Noxa和Bax表达亦明显上调；线粒体膜电位显著下降；未折叠蛋白反应伴侣分子Grp78表达降低、CHOP表达升高。

那个 6.抑制剂Ⅻ与S1联合应用后，胞内ROS水平显著增加，氧化损伤导致的存活率降低可被抗氧剂NAC所逆转。 7. AO及Lyso-Tranker Red染色结果显示抑制剂Ⅻ与S1联合应用后胞内酸性结构明显增多；同时LC3-Ⅱ表达在S1组、S1合并Ⅻ处理组均显著增加，p62表达在合并处理组显著增加，相应地siRNA干预后也呈现出LC3-Ⅱ和p62表达升高的趋势；氯喹合并S1处理SKOV3/DDP细胞进一步降低了存活率。 结论 1. BH3模拟物S1能够降低卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP存活率；UPR相关基因JNK3的高表达可能与SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性密切相关。 2.抑制JNK3可通过阻断其下游靶蛋白c-Jun的活化，诱导p53表达增加，上调凋亡相关蛋白Noxa和Bax的表达，从而加剧S1诱导卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP凋亡。 3.抑制JNK3通过促进细胞氧化损伤从而提高了卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性。 4.抑制JNK3通过阻断细胞自噬通量从而提高了卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP对BH3模拟物S1的敏感性。 本文首次探讨了JNK家族的亚型JNK3在卵巢癌细胞耐药中的作用，JNK3可能通过减少氧化损伤和激活自噬途径发挥了促进细胞存活的作用。因此JNK3可能是逆转肿瘤细胞耐药的一个潜在靶标。
在世界范围内大约有10%-15%的育龄夫妇正在遭受不育症的折磨。不育症夫妇中40%的男性是不育的,并且随着环境和社会等因素的影响,男性不育的比例正在逐渐增加。男性不育患者大部分为非梗阻性无精症(non-obstructive azoospermia, NOA),其病因不明,对临床治疗极为不利。随着对非梗阻性无精症的深入研究,发现男性不育与血睾屏障(Blood-testis

barrier, BTB)的功能异常有关,然而导致血睾屏障功能异常的分子机制仍有待阐明。 PLX3397购买 位于生精上皮底部的支持细胞(Sertoli cell)通过彼此间的紧密连接构建血睾屏障,为精子发生提供一个稳定的微环境和独特的免疫屏障,并通过有序的开放调节精子生成。血睾屏障开放机制的异常使得精子发生的微环境和免疫屏障受损,进而影响精子生成,导致男性不育。血睾屏障的开放机制受到众多因子的调节,而TGF-β3是调节血睾屏障开放的主要因子之一,因此研究影响TGF-β3的表达和分泌的因素具有重要意义,这也是本文的第一个研究课题。

NXF3属于核输出因子蛋白家族(nuclear RNA export factor family, NXF),本文研究发现NXF3在小鼠睾丸的支持细胞中特异性地表达,并且在附睾头部、区的主细胞中也检测到NXF3的表达。在支持细胞中首次检测到NXF3的表达是小鼠出生后10天,而此时正是小鼠血睾屏障形成之时,因此NXF3极有可能与血睾屏障相关,这引起我们的极大兴趣。由于TGF-β3是参与血睾屏障调节的主要因子之一,我们检测了NXF3和TGF-β3在睾丸中的表达,发现两者之间具有负相关的关系。进一步的实验也证实了这一关系：在用热或CdC12处理小鼠睾丸后发现,NXF3的表达下降,而TGF-β3的表达上升了。随着研究的深入,发现NXF3参与调节TGF-β3转录负反馈的调控进而影响了TGF-β3的表达,即TGF-β信号通路激活后,NXF3增强了Smad2/3途径的活性,从而使TGF-P3的转录受到抑制。通过更详细的研究我们发现了NXF3的结合蛋白：STRAP, Ivacaftor TGF-β信号通路的抑制因子。因此NXF3调节TGF-p3的机制得以阐明：TGF-β信号通路激活后,NXF3与STRAP结合,抑制了STRAP与Smad7的结合,影响了TpR1-STRAP-Smad7复合体的形成,使得Smad2/3途径激活从而抑制了TGF-β3的转录,并且Smad2/3途径的下游靶基因Claudin11、WT1、GATA1和p21也受到调控. 拟染色小体(chromatoid body)是雄性圆形精子时期出现的一个特异性结构,在电子显微镜下呈纤维状结构,主要由蛋白质和RNA组成,不含DNA。由于其含有许多RNA结合蛋白、mRNA和nicroRNA,拟染色小体被认为是精子发生过程中的RNA存储和加工中心,参与精子发生过程中的基因表达调控,因此非常引人关注。距1891年拟染色小体首次被报道,至今已有一百多年,有关拟染色小体的研究取得了很大的进展,许多拟染色小体的蛋白和RNA组分被发现,但是拟染色小体的功能和机制仍然不清楚,需要进一步的探究。 本文发现CaMKIV (Ca2+/Calmodulin-dependent Protein Kinase IV, CaMKIV)定位在拟染色小体上,是拟染色小体的一个新的组分。CaMKIV是钙调蛋白激酶家族之一,据报道CaMKIV表达在睾丸的精原细胞和精子细胞中,并且camkiv基因敲除小鼠由于在精子变形过程中组蛋白替换异常而不育。研究发现CaMKIV能够和拟染色小体中的MVH.

05)。2ALP比活性测定:OM组和SIM组显著高于CM组,与相比,SB+SIM组显著低于SIM组(P
目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)在脂多糖(LPS)诱导大鼠滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast,SF)合成炎性因子IL-1β、MMP3中的作用。方法:采用酶消化法分离获得大鼠SF,体外培养并鉴定,分别作为空白对照组、与不同浓度LPS共培养、以SB203580预处理后与LPS共培养,24h后免疫化学染色、RT-PCR分别检测通路活化水平和炎性因子蛋白及m RNA表达量。结果:LPS可刺激SF使IL-1β、MMP3蛋白和m RNA表达上调,表达量随LPS浓度增高而增加(与对照组相比P
低剂量顺铂可通过诱导p21与p16表达而诱导肿瘤细胞早衰,但其机制不明。本研究探讨了低剂量顺铂诱导的He

La细胞衰老过程中p21与p16的上调机制。低剂量顺铂(4μmol/L)处理He La细胞后,DNA甲基转移酶DNMT1蛋白水平降低;p21与p16启动子甲基化水平降低,二者mRNA及蛋白质水平升高;顺铂对DNMT1蛋白水平的降低作用与其激活p38MAPK有关,用SB203580抑制p38MAPK可部分逆转顺铂对DNMT1蛋白水平以及p21与p16启动子甲基化的降低作用,从而部分逆转顺铂对p21与p16表达的诱导;抑制p38MAPK也可部分逆转低剂量顺铂诱导的He La细胞早衰。上述结果表明,低剂量顺铂可通过p38MAPK信号通路下调p21与p16启动子甲基化水平,进而上调二者的表达。这些结果为解析低剂量顺铂诱导肿瘤细胞早衰的信号转导机制提供了实验依据。
目的明确缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)调控的卵巢癌细胞迁移中的作用及其机制。方法采用免疫组化分析HIF-1α在卵巢癌组织中的表达水平;将HIF-1αsiRNA转染SKOV3卵巢癌细胞,分别用SDF-1α和SDF-1α+SB203580处理,用RT-PCR及western 此网站 blotting分析HIF-1α、p38MAPK的表达水平。结果免疫组化分析表明,HIF-1α在卵巢癌组织中高表达,同时SDF-1α可明显诱导HIF-1α的mRNA及蛋白水平的表达;当用HIF-1αsiRNA转染后,细胞中HIF-1α的表达水平明显下降。当用通路抑制剂SB203580处理后,SDF-1α诱导的HIF-1α水平明显降低。结论 无 SDF-1α可通过p38MAPK-HIF-1α通路来调控卵巢癌细胞的迁移。因此,该研究将为卵巢癌的防治提供新的研究方向。
目的研究脂多糖(LPS)所致炎症与脑细胞色素P4502E1和CYP2E1之间的相互影响。方法采用具有胆碱能神经元特征的IMR-32人神经母细胞瘤细胞系,分别给予低剂量(0.1

mg·L~(-1))和高剂量(1.0 mg·L~(-1))LPS处理24

h,检测LDH和SOD活性。在LPS处理前45 min,分别加入p38抑制剂SB203580和ERK抑制剂U0126处理IMR-32细胞,观察MAPK信号系统对神经元CYP2E1表达的影响。采用具有多巴胺能神经元特征的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞系建立高表达CYP2E1细胞系,并与正常SH-SY5Y细胞同时给予低剂量(0.1 mg·L~(-1))和高剂量(1.0 mg·L~(-1))LPS处理24 h后检测LDH和SOD活性。结果与对照组相比,高剂量LPS处理IMR-32细胞,SOD的活力下降15.0%(P<0.01),LDH上升1.38倍(P<0.01),蛋白水平升高1.19倍(P<0.05)。p38和ERK抑制剂可拮抗高剂量LPS对CYP2E1的诱导作用。低剂量LPS处理CYP2E1高表达SH-SY5Y细胞,LDH的升高幅度较非高表达的对照组上升了1.28倍(P<0.01),SOD活力下降幅度增加了3.53倍(P<0.01);高剂量LPS使得CYP2E1高表达SH-SY5Y细胞LDH的升高幅度较非高表达的对照组上升了1.54倍(P<0.01),SOD活力下降幅度增加了2.17倍(P
目的探索钙卫蛋白(S100A8/A9)、Toll样受体4(TLR-4)及丝裂原活性的蛋白激酶(MAPK)信号传导途径在动脉血栓中的表达及与环氧化酶-2(COX-2)的关系。方法 INK1197核磁共振 24只SD大鼠分为实验组和对照组,实验组利用FeCl_3溶液建立颈动脉血栓大鼠模型,对照组注射等量生理盐水。分别于造模后第1、3、7、14日分批处死2组大鼠,每次每组3只。利用ELISA检测大鼠外周血S100A8/A9水平。采用Western blotting对SD大鼠外周血白细胞中COX-2、p-p38 MAPK、TLR-4水平进行检测,并分析各因子水平之间的相关性。利用MAPK抑制剂SB203580对模型大鼠进行干预,观察对COX-2蛋白水平的影响。结果实验组大鼠外周血S100A8/A9水平在造模后第7日达到最高值,第14日回落,且均显著高于对照组相应时间点水平(P
P38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(MAPKS,mitogen-activated kinase)的一个亚类,有关P38MAPK信号通路在肾缺血/再灌注损伤中与细胞凋亡关系的研究国内外很少。本研究通过检测肾缺血/再灌注不同时间点细胞凋亡及P38MAPK的变化,来揭示肾缺血/再灌注损伤的病理机制。 一、材料和方法 1.

00±1.13;IP组:32.83±1.81;BI组:24.30±1.47。IR、IP及BI组较Sham组均有明显的心肌梗死(P selleck < 0.01),IP、BI组较IR组心肌梗死面积明显缩小(P < 0.01),且BI组较IP组梗死面积缩小更明显(P < 0.05);(2)心肌酶学:缺血前5min,sham组:CK 2125.33±148.35,LDH 173.58±16.85; IR组:CK 2151.42±88.86,LDH 176.25±15.95;IP组:CK 2088.67±68.86,LDH 172.33±14.21;BI组:CK

2104.00±78.27,LDH 168.50±15.68。缺血30min , sham组: CK 2088.42±69.32 , LDH 176.42±15.79;IR组:CK 3617.50±97.43,LDH 466.50±26.42;IP组:CK 2559.00±103.31,LDH 332.08±20.68;BI组:CK 2459.83±92.35,LDH 310.25±23.16。再灌注2h,sham组:CK 2148.67±63.53,LDH 177.42±16.94;IR组:CK 4676.33±78.61,LDH 591.17±25.67;IP组:CK 3011.83±79.98,LDH 362.08±12.99;BI组:CK 2936.58±80.08,LDH 339.50±24.96。IR、IP及BI组较Sham组均能明显升高心肌酶(P Selleckchem LBH589 < 0.01),IP、BI组各时间点CK和LDH均较IR组明显降低(P < 0.01),且BI组较IP组降低更明显(P < 0.05);(3)NF-κB蛋白表达评分:sham组:0.73±0.32;IR组:3.51±0.58;IP组:2.62±0.69;BI组:2.01±0.62。IR、IP及BI组较Sham组NF-κB蛋白表达均明显增加(P < 0.01);IP组、BI组NF-κB蛋白表达均较IR组显著较少(P < 0.01),且BI组较IP组更明显(P < 0.05)。(4)TNF-α蛋白表达评分:sham组:0.81±0.30;IR组:4.06±0.59;IP组:3.01±0.48;BI组:2.60±0.27。IR、IP及BI组较Sham组TNF-α蛋白表达均明显增加(P < 0.01);IP组、BI组TNF-α蛋白表达均较IR组显著较少(P

< 0.01),且BI组较IP组更明显(P < 0.05)。 结论心肌缺血再灌注可以导致心肌组织的再灌注损伤,而缺血预适应及灯盏花素联合预适应均显著缩小心肌梗死面积,降低心肌酶,减少心肌细胞内TNF-α、NF-κB蛋白的表达。其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用机制可能与减轻再灌注心肌的炎性损伤有关。
目的血管外膜成纤维细胞(adventitial AP24534订单 fibroblasts,AFs)表型转变在血管重塑、纤维化过程中发挥重要作用,我室前期研究发现,尾加压素II(UrotensinII,UII)能够促进血管外膜成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转变、促进胶原合成,其机制尚待阐明。已知转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是促进成纤维细胞表型转化和胶原合成的重要活性因子,为此,本工作通过体外培养大鼠血管外膜成纤维细胞,观察尾加压素II刺激后转化生长因子β1表达的变化,以及UII、TGF-β1处理后α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth

muscle actin,α-SM–actin)mRNA及蛋白表达的变化,探讨UII对TGF-β1表达的影响以及两者在促血管外膜成纤维细胞表型转化中的相互作用及其机制。 方法(1)用贴块法培养大鼠胸主动脉血管外膜成纤维细胞,取3~5代细胞用于实验,以1×10-10～1×10-7mol/L尾加压素II刺激血管外膜成纤维细胞24h,或以1×10-8mol/L尾加压素II刺激血管外膜成纤维细胞8h、12h、24h、48h,或以1×10-7mol/L尾加压素II受体阻断剂SB-710411分别作用24h、48h,提取上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测各组上清液中TGF-β1蛋白含量;(2)将细胞分为单纯培养基对照组、UII(10-8 mol/L)组、TGF-β1(20ng/mL)组、UII(10-8 mol/L)+TGF-β1(20ng/mL)、UII(10-8 mol/L)+ TGF-β1特异性中和抗体(20ug/ml)组以及TGF-β1(20ng/mL)+SB-710411(10-7mol/L)组,培养24h后,用蛋白免疫印迹试验(Western Blotting)及实时定量PCR(Real-time PCR)方法分别检测α-平滑肌肌动蛋白及mRNA表达。计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,两组间均数比较用t检验,多组间均数比较用单因素方差分析,P0.

Given the complexity and redundancy of the PI3 K signaling network, PI3 K pathway inhibition may be most useful in combination with either chemotherapy or other targeted therapies, such as MEK inhibitors, anti-angiogenic therapy, and hormonal therapy, in appropriately selected OC patients. Here, we discuss the relevance of the PI3 K pathway in OC and provide an up-to-date review of clinical trials of novel PI3 K inhibitors Raf抑制剂 alone or in combination with cytotoxics and novel therapies in OC. In addition, the challenges of drug resistance and predictive

biomarkers are addressed.
目的:研究隐丹参酮对Akt活性的影响及其在抑制HepG2细胞生长中的作用。方法:Western印迹检测隐丹参酮对Akt磷酸化的影响;CCK-8法检测隐丹参酮与MK2206或PP242联合用药对HepG2的生长抑制作用。结果:Western印迹证明隐丹参酮处理能够增强HepG2细胞Akt的磷酸化,同时发现隐丹参酮对Akt的增强作用依赖于mTORC2的活性;通过MK2206或PP242抑制Akt的反馈激活,能够明显促进隐丹参酮对HepG2细胞的生长抑制作用。结论:通过抑制Akt的反馈激活能够增强隐丹参酮的抗肿瘤作用,为隐丹参酮肿瘤治疗的临床应用联合用药提供了理论基础。
Head and neck squamous cell carcinoma is the sixth most common cancer in the world with approximately650000 new cases diagnosed annually.Next-generation molecular techniques and results from phase 2 of the Cancer

Genome Atlas becoming available have PFTα溶解度 drastically improved our current knowledge on the genetics basis of head and neck squamous cell carcinoma.New insights and new perspectives on the mutational landscape implicated in head and neck squamous cell carcinoma provide improved tools for prognostication.More importantly,depend on the patient’s tumor subtypes and prognosis,deescalated or more aggressive therapy maybe chosen to achieve greater potency while minimizing the toxicity of therapy.This paper aims to review our current

knowledge on the genetic mutations and altered molecular pathways in head and neck squamous cell carcinoma.Some of the most common mutations in head and neck squamous cell carcinoma reported by the cancer genome atlas including TP53,NOTCH1,Rb,CDKN2 A,Ras,PIK3 CA and EGFR are described here.Additionally,the emerging role of epigenetics and the role of human papilloma virus in head and neck squamous cell carcinoma are also discussed RAD001 in this review.The molecular pathways,clinical applications,actionable molecular targets and potential therapeutic strategies are highlighted and discussed in details.
目的:观察爱罗咳喘宁对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonarydisease,COPD)大鼠模型支气管和肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen activatein kinase,p38MAPK)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、及水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)基因表达的影响,探讨爱罗咳喘宁方对COPD炎症及气道高分泌的作用及机制。方法:采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)加烟雾诱导COPD大鼠模型,随机将大鼠分为正常组、模型组、爱罗咳喘宁低、中、高剂量组。正常组、模型组灌胃生理盐水(15.52 m L·kg-1·d-1),爱罗咳喘宁口服液低、中、高剂量组分别灌胃(7.75,15.52,31.

MEK抑制剂PD98059、PKA抑制剂H89dihydrochloride、Dl受体抑制剂SCH23390hydrochloride、D2受体抑制剂Haloperidol hydrochloride预处理均不影响ghrelin对CTA获取的抑制作用。 我们的结果提示,外侧杏仁核微量注射ghrelin抑制大鼠CTA的获取,而且这种抑制作用是通过激活GHS-Rla而实现的。在以往离体研究报道的ghrelin/GHS-Rla激活可能参与的多个胞内信号通路中,外侧杏仁核PLC以及PI3K/Akt/mTOR通路可能是介导ghrelin对味觉厌恶行为产生调控的关键下游信号通路。而这些通路最终起作用的效应分子(靶点)还有待进一步研究。近年来越来越多的实验证据提示促进摄食和调节能量平衡的肽类激素ghrelin与抑郁、癫痫等神经精神疾病的病理生理相关。因此,我们的研究不仅可深化对ghrelin多重生理功能及机制的了解,同时对伴有情绪和认知障碍的神经精神疾病的治疗具有潜在的理论指导意义。
虽然已经有五种FDA认证的药物（tacrine,

所以 rivastigmine,galantamine, donepezil, and memantine）可以有效的延缓Alzheimer病（AD）的发病进程，但是至今依然缺乏对AD这种中枢神经退行性疾病有效的治疗策略。目前认为，有效阻止AD的方法是依赖于早期的诊断和预防。对于中药治疗AD的研究不失为一种AD的早期预防与治疗有效策略。 AD与2型糖尿病（T2DM）之间的密切关系目前已经得到了广泛的证实。基于两者的共同发病机制，糖尿病治疗药物或许可以发挥神经保护作用。通过激活GLP-1受体，GLP-1类似物已经成为了一种临床上成熟的糖尿病治疗新药。同时，在动物实验中，GLP-1类似物则被证实具有对AD动物模型的神经保护效应。 本实验所采用的中药单体京尼平苷（Geniposide）已被证明是一种GLP-1受体激动剂，同时在培养细胞水平已经被证实具有神经保护作用。本实验旨在从AD动物模型的水平证实京尼平苷的神经保护效应。采用链脲佐菌素（STZ）侧脑室注射形成AD大鼠模型。通过Morris水迷宫实验和免疫组织化学实验我们证实了单次侧脑室注射京尼平苷（50μM,10μl）有效的阻止了约40%的STZ诱导的空间认知损伤和约30%的STZ诱导的tau蛋白的过度磷酸化。与我们的预期相反，在免疫组化试验中，我们并没有在STZ诱导的大鼠脑内观察到AD的另一重要病理变化β-淀粉样蛋白（Aβ）的聚集，同时westernblot测定也显示Aβ的前体蛋白——淀粉样前体蛋白（APP）在STZ大鼠脑内的表达也没有明显升高。在治疗组的基础上，我们利用PI3K的特异性抑制剂wortmannin（WT）阻止PI3K活性从而引起其下游蛋白GSK3的去抑制，以此干预治疗组从而探究PI3K/GSK3信号通路在京尼平苷神经保护作用中扮演的角色。结果显示，WT一定程度上阻止了京尼平苷对STZ诱导的大鼠行为学保护作用以及tau蛋白过度磷酸化的缓解作用，这一结果证实了PI3K/GSK3在京尼平苷的神经保护作用中扮演着关键角色。 GSK3是一种重要的参与tau蛋白磷酸化调节的激酶。GSK3的过度活化在AD的多种病理变化有着广泛的相关性。通过westernblot实验，我们发现STZ侧脑室注射引发了脑内颞叶皮层GSK3β的过度活化。同时，京尼平苷通过对GSK3β两个调控位点的调节——上调抑制位点Ser9的磷酸化，下调激活位点Tyr216的磷酸化——抑制了STZ诱导的GSK3β的过度活化。

最后，我们通过透射电镜进行超微结构观察并发现京尼平苷阻止了STZ诱导的超微结构变化，包括双螺旋细丝（PHFs）样结构，突触前膜囊泡的过度聚集，内质网异常，以及以暗细胞为特征的早期凋亡。总之，我们的研究证明了京尼平苷对于STZ急性侧脑室注射诱导的AD大鼠模型的神经保护作用，这也提示京尼平苷可以作为一种AD预防或治疗的新药进行进一步的研究。
目的：体外实验短期诱导人胃癌阿霉素耐药细胞株(SGC7901/ADM)并研究三氧化二砷(As2O3)对SGC7901/ADM的逆转耐药作用及机制。方法：大剂量冲击结合持续低剂量ADM浓度递增诱导的方法诱导细胞耐药。光镜观察细胞形态,MTT法检测SGC7901/S和(?)SGC7901/ADM对ADM的耐药性并用Westernblot检测两细胞P-gp的表达证明已获得短期耐药细胞株SGC7901/ADM。MTT法检测磷酸化ERK selleck合成 哪里 (p-ERK)激动剂G-CSF作用前后As2O3的逆转耐药倍数；免疫细胞化学法测定As2O3及G-CSF作用前后SGC7901/ADM细胞内Ras和p-ERK的变化；流式细胞仪测定G-CSF和As2O3干预后SGC7901/ADM的细胞周期和凋亡率。结果：大剂量冲击结合持续低剂量ADM浓度递增法获得了对阿霉素短期耐药的细胞株SGC7901/ADM。SGC7901/ADM对ADM耐药,As2O3可逆转耐药,其中0.5μmol/L

AS2O3作用48h后逆转耐药倍数约为6.29。G-CSF干预后,逆转耐药倍数降至4.72;SGC7901/ADM中Ras表达高于亲本细胞株SGC7901/S,而p-ERK无明显差异,As2O3可下调Ras及p-ERK的表达。G-CSF干预后,As2O3下调Ras及p-ERK表达的能力较干预前显著降低。0.1μmol/L和0.5μmol/L As2O3组的G0～G1,期细胞比例和凋亡率均显著高于各个对照组；G-CSF干预后同一剂量的As2O3组G0～G1期细胞及凋亡率较干预前均显著降低。结论：对阿霉素短期耐药细胞株SGC7901/ADM模型建立；As2O3可逆转人胃癌短期耐药细胞株SGC7901/ADM对ADM的耐药作用；其机制与下调Ras/p-ERK信号传导通路中Ras、磷酸化ERK的表达有关。
目的：第一部分：探讨Dickkopf-1(DKK-1)在肺癌患者血清以及胸水中的表达和临床意义。第二部分：研究Glycogen synthase kinse（GSK-3β）、Phosphatase Glycogensynthase kinse（PGSK-3β）在肺癌细胞株中的表达情况，以及顺铂作用后肺癌细胞株中GSK-3β、PGSK-3β表达变化情况。 方法：(1)酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)检测肺癌以及肺部良性病变患者血清以及胸水中DKK-1的表达量，分析其表达量与各临床病理资料之间的关系，评价DKK-1在肺癌中的诊断价值；(2)流式细胞术检测肺腺癌细胞株A549（实验组）、支气管上皮细胞株HBE（对照组）中GSK-3β、PGSK-3β的表达情况，以及顺铂作用后A549中GSK-3β、PGSK-3β表达变化情况。 结果：(1)肺癌与肺部良性病变患者血清中DKK-1表达分别为[（36.23±17.45）ng/mlVS（10.88±7.40）ng/ml（P=0.

05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低神经功能缺损，差异有统计学意义（P＜0.05），H-AS对神经功能缺损的这种改善作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）；

2与Vehicle组相比，L-AS组在24h和72h可降低脑含水量，但是差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低脑含水量，差异有统计学意义（P＜0.05），H-AS对脑水肿的降低作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）； Protein Tyrosine激酶抑制剂 3与Vehicle组相比，L-AS组在24h和72h可减小脑梗死体积，但是差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低脑梗死体积，差异有统计学意义（P＜0.05），H-AS对脑梗死体积这种减小作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）。 4免疫组化结果显示，与Vehicle组相比，缺血后24h和72h，H-AS组在24h和72h均可明显升高p-ERK、 HO-1的阳性细胞数，差异有统计学意义（P＜0.05）；L-AS组在24h和72h可升高p-ERK、HO-1的阳性细胞数，但是差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS对p-ERK、HO-1阳性细胞数的升高作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）。 5Western blot结果显示，与Vehicle组相比，H-AS在24h和72h可明显升高p-ERK、 HO-1的蛋白表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；L-AS组在24h和72h可升高p-ERK、HO-1的蛋白表达，但差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS对p-ERK、HO-1蛋白的升高作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）。 SKI-606订单 6与免疫组化和Western blot结果一致，H-AS在24h和72h可升高ERK、HO-1的mRNA表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；L-AS组在24h和72h可升高ERK、HO-1的mRNA表达，但差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS对p-ERK、HO-1mRNA的升高作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，差异有统计学意义（P＜0.05）。

7与Vehicle组相比，H-AS可明显增加SOD，减低MDA的含量，差异有统计学意义（P＜0.05）。L-AS组可增加SOD，减低MDA的含量，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论：局灶性脑缺血再灌注后，阿利吉仑对局灶性脑缺血再灌注小鼠具有脑保护作用，可改善神经功能缺失，降低脑含水量，减小脑梗死体积，诱导ERK、HO-1的表达，增加SOD活性，减少MDA的含量，且上述保护作用可被ERK抑制剂PD98059阻断，因此我们推测阿利吉仑的神经保护作用可能是通过增加ERK、HO-1的表达，并增加SOD的活性，减少MDA含量从而实现其抗氧化作用。 第三部分阿利吉仑对局灶性脑缺血再灌注损伤小鼠的抗凋亡作用及其相关机制研究

目的：观察脑缺血再灌注损伤后PI3K/Akt/Bcl-2/Bax的表达变化，研究阿利吉仑对脑缺血再灌注损伤小鼠的抗凋亡作用，探讨阿利吉仑抗凋亡作用的相关机制。 可能 方法：选用成年雄性C57/BL小鼠为研究对象，应用改良线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注模型。随机将C57/BL小鼠分为5组：假手术组（Sham），溶剂对照组（Verhicle），阿利吉仑低剂量组（L-AS），阿利吉仑高剂量组（H-AS），阿利吉仑+LY-294002组（AS+LY-294002)。Sham组：假手术前连续5天以灌胃方式给予等量生理盐水，每日一次；Vehicle组：术前连续5天以灌胃方式给予等量生理盐水，每日一次；小剂量阿利吉仑干预组(L-AS)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑10mg/Kg，每日一次；大剂量阿利吉仑干预组(H-AS)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑25mg/Kg，每日一次；阿利吉仑组+LY-294002组（Aliskiren+LY-294002)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑25mg/Kg，每日一次，术前15分钟脑室注射30μg LY-294002。各组取材前进行神经功能评分，干湿重法测定脑组织含水量，TTC染色评价脑梗死体积，将各组小鼠分别于相应时间点进行神经功能评分后断头处死，采用免疫组化、Westernblot和RT-qPCR来观察脑缺血后PI3K、Akt、Bcl-2及Bax的mRNA和蛋白水平动态变化。 结果： 1Sham组中未见小鼠神经功能缺损，神经功能缺失评分为0分；Vehicle组在24h和72h神经功能缺损评分均较严重，L-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可降低神经功能缺损，但差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低神经功能缺损，差异有统计学意义（P＜0.05），H-AS对神经功能缺损的这种改善作用可被PI3K抑制剂LY-294002阻断，差异有统计学意义（P＜0.

0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0h经眼眶内呲静脉丛采血，用上述建立的HPLC-MS/MS方法检测Res及Res-G，Res-S的血药浓度，WinNonlin软件进行Res及Res-G，Res-S的药动学（pharmacokinetics, 无 PK）模型模拟拟合，并计算药动学参数；3) C57BL/6荷黑色素瘤小鼠灌胃给予低、高剂量Res（50、100mg/kg/d），连续给药21d，分别在第3,6,9,12,15,18,21d采样，于当天给药后0.167、1.0、2.0、4.0h经眼眶内呲静脉丛采血，检测血药浓度。参考单次给药药动学参数，结合多次给药有限采样的实测血药浓度，采用WinNonlin软件建立Res长期给药过程中PK模型，模拟拟合Res及Res-G，Res-S的药时曲线，并计算多次给药药代动力学参数。 结果：结果：黑色素瘤小鼠单次灌胃给予Res后，药物在体内表现出较快的吸收和消除，代谢物Res-G的血药浓度及明显高于Res，Res-S的血药浓度与Res接近；多次给药过程中，AUC增加，清除率降低，Res及Res-G、Res-S均表现出一定程度的蓄积。 结论： Res在体内吸收消除较快，并快速转化为代谢物，Res-G、Res-S是其循环过程中的主要存在形式；多次给药过程中，黑色素瘤病情进展可影响Res原型及代谢物使之蓄积。

第二部分白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的药效动力学研究 目的：研究在黑色素瘤发生发展过程中及Res给药治疗过程中，肿瘤体积，Tyrosinase，COX-2, Ape/Ref-1, VEGFA及Survivin的动态变化规律，为PK-PD结合模型提供合适的药效替代指标PD endpoint。 方法：1）建立C57BL/6小鼠皮下移植B16F10黑色素瘤模型，分为3组：模型对照组（0.5%CMC-Na），低、高剂量Res组（50、100mg/kg/d），连续灌胃21d，监测肿瘤体积；分别于开始给药后第3，6，9，12，15，18，21d分批处死动物，剖取肿瘤组织；2）提取mRNA，普通PCR扩增后回收，构建重组质粒标准品，绘制标准曲线，采用绝对实时荧光定量RT-PCR法检测Tyrosinase，COX-2,Ape/Ref-1,VEGFA,

Survivin的mRNA表达；制备组织匀浆，BCA法测总蛋白浓度，采用相应的ELISA试剂盒检测上述各指标的蛋白表达；制备酶液，通过检测催化特异性底物的反应，计算Tyrosinase和COX-2的酶活性；提取细胞核蛋白，采用DNA-binding 查看更多 Elisa法检测Ape/Ref-1的氧化还原活性； 结果：随着时间推移，荷瘤小鼠肿瘤体积逐渐增大，Tyrosinase, COX-2及Survivin的活性或表达逐渐升高，Ape/Ref-1先升后降, VEGFA初期无明显变化,在第9-12天开始上升；Res能够降低肿瘤生长速度，下调COX-2,Ape/Ref-1, VEGFA, Survivin的mRNA和蛋白表达，同时抑制Tyrosinase，COX-2和Ape/Ref-1的活性，但对Tyrosinase的mRNA和蛋白表达无明显影响，上述作用呈动态变化。 有 结论：Tyrosinase，COX-2, Ape/Ref-1, VEGFA及Survivin在黑色素瘤的发生发展过程中呈动态变化，Res可抑制小鼠黑色素瘤生长，并从不同水平影响上述各指标 第三部分白藜芦醇在黑色素瘤小鼠体内的PK-PD结合模型研究 目的：建立PK-PD结合模型，量化Res的药代动力学与药效动力学之间的关联，阐明Res的药动学行为与药理学效应之间的“矛盾”，有助于阐明Res的作用机制，明确作用靶标。 方法：1）分别将Res及代谢物的血药浓度C和药时曲线下面积AUC，与不同的药效指标进行模型拟合，明确药代动力学过程的驱动因素PK input。2）根据上述确定的PK input，分别采用不同的药效动力学模型和初始参数，建立可定量描述PK input与肿瘤体积之间关系的PK-PD结合模型。3）将PK input的动态变化，分别在活性、mRNA表达及蛋白表达水平，与Tyrosinase，COX-2,APE/Ref-1,

VEGFA,Survivin等药理效应指标进行拟合，选择相关性较好的效应指标作为PD endpoint。4）选择合适的药代动力学模型和药效动力学模型,建立联接PK input和PDendpoint的PK-PD结合模型，得到模型动力学参数，明确Res的药代动力学与药效动力学之间的定量关系 结果：1）相比血药浓度C，Res及代谢物的总药时曲线下面积AUCRes-Total的能够较好地与各药效指标拟合，可作为PK input获得较满意的PK-PD模型。2）指数方程结合Sigmoid Emax模型可较好地量化拟合肿瘤体积与AUCRes-Total的关系。3）Simple Emax可较好地拟合COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达与AUCRes-Total的关系。4）Sigmoid Emax模型可较好地量化拟合Tyrosinase的活性, VEGFA、Survivin的mRNA及蛋白表达与AUCRes-Total的关系。 结论：1）主要代谢物Res-G，Res-S在Res的体内活性中起到重要作用，这可能与代谢物在肿瘤组织中重新解离成原型发挥作用或代谢物本身的活性有关。2）以COX-2、Tyrosinase的酶活性, COX-2、VEGFA、Survivin的mRNA及蛋白表达作为PD endpoint建立了相应的PK-PD模型，可定量描述上述效应指标的变化与Res及代谢物的药代动力学的关联。
VBE-1为中药黄荆子Vitex Negundo L.

HLECs-B3 were incubated in the fresh media containing so-dium salicylate at different concentrations for different durations, and allowed to be recovered in fresh 哪里 medium

without sodium salicylate for different durations with or without pretreatment with p38MAPK inhibitor (SB203580), ERK1/2 inhibitor (PD98059) and JNK/SAPK inhibitor (SP600125). The expression of P38MAPK, ERK1/2, JNK/SAPK, phosphorylated P38MAPK, phosphorylated ERK1/2, phosphorylated JNK/SAPK and HSP27 was detected by Western blot. The expression of HSP27 mRNA and protein was detected by RT-PCR and immunohistochemistry respectively. It was found there was only weak expression of HSP27 in normal HLECs. The expression Sorafenib细胞系 of HSP27 was not detectable in HLECs-B3 that were exposed to sodium salicylate (55 mmol/L) for 1-5 h. It was indicated that recovery from sodium salicylate (>35 mmol/L) significantly increased the synthesis of HSP27. The expression of HSP27 was up-regulated in HLECs-B3 under sodium salicylate recovery for 3 h, reached the peak level for 6 h, and returned to the level of

control cells by 24 h. Activation of P38MAPK from sodium salicylate stimulation occurred KRX-0401订单 at 30th min, and increased significantly at 1st h, then declined and returned to baseline level at 3rd h under sodium salicylate recovery. Activation of ERK1/2 occurred at 1st h and reached the peak level at 6th h under sodium salicylate recovery. However, JNK/SAPK was inactivated by sodium salicylate. The expression of HSP27 could be down-regulated with the pretreatment of SB203580 and PD98059 jointly. It is concluded

that sodium salicylate can induce the expression of HSP27 in HLECs-B3. The effects are mediated, at least in part, through the activation of P38MAPK and ERK1/2 signaling pathway.
目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK,p38)和心锚重复蛋白(cardiac ankyrin repeat protein,CARP)与心肌梗死后心肌重塑的关系,及辛伐他汀改善心肌梗死后心肌重塑的机制。方法结扎大鼠冠脉前降支致心肌梗死,术后24h存活大鼠随机分为心肌梗死组(MI组)、p38抑制剂SB203580组(SB组)、辛伐他汀组(Sim组)和假手术组(sham组)。7d后测定左心室重量指数(LVWI),心肌细胞横切面面积(CSA),RT-PCR和免疫组化法测定p38和CARP在非梗死区心肌中的表达。结果与Sham组相比,MI组LVWI和CSA明显增加(P<0.01),磷酸化p38(P-p38)和CARP表达明显增加(P<0.05)。与MI组相比,SB组和Sim组LVWI和CSA明显降低(P<0.01),SB组CARP表达低于MI组(P<0.01),Sim组p38和CARP表达明显低于MI组(P<0.