1 mmol/L、20 mmol/L的葡萄糖中培养24h后,高糖组(11.1mmol/L和20mmol/L)与低糖组(3mmol/L和7mmol/L)相比,前者完全磷酸化形式的MafA(p-MafA)和insulin 2 mRNA表达均降低(P﹤0.05),而insulin 1 mRNA表达无显著差异(P﹥0.05)。(2)大鼠INS-1细胞在0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的GSK3抑制剂中培养24h后,50μmol/L和100μmol/L的GSK3抑制剂组与对照组(0μmol/L)相比, MafA蛋白完全磷酸化形式降低(P﹤0.05),低磷酸化形式显著增加(P﹤0.05);同时insulin 2 mRNA表达均显著降低(P﹤0.01),分别下降了31.45%和46.77%,insulin 1 mRNA表达差异无显著性(P﹥0.05)。 结论(1)转录因子MafA调节大鼠insulin 2基因而非insulin

1基因的转录。(2)MafA在葡萄糖调节胰岛素基因表达中发挥重要作用,葡萄糖毒性可能通过抑制转录因子MafA而降低insulin 2基因表达。(3)大鼠INS-1细胞中,GSK3可能通过磷酸化MafA蛋白,进而促进insulin 2基因表达。(4)大鼠INS-1细胞中,转录因子MafA可促进胰岛素基因的转录。
目的:低甲状腺腺素被认为与病人重症监护期的短期死亡率和心脏疾病的长期死亡率密切相关。本实验探讨对离体培养乳鼠心肌细胞在缺氧复氧前短期给予三碘甲状腺原氨酸(T3)是否能减少未成熟心肌的细胞凋亡,而这种减少是否受缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白的表达和Cx43蛋白构成通道功能变化的影响。方法:通过高密度培养原代心肌细胞形成可见的细胞紧密连接,于缺氧复氧前短期加入不同浓度的T3(50ng/ml,1ng/ml,0.02ng/ml)及Cx43蛋白构成通道失耦联剂庚醇后通过流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,并用Western

为什么 LY294002订单 blotting检测T3对Cx43的蛋白表达的调控,最后用划痕示踪法检测心肌细胞间缝隙连接功能变化的影响。 结果:短期的各浓度T3干预均可减少心肌细胞的凋亡,而缝隙连接失耦联剂庚醇可减弱这种保护效应,T3可以上调Cx43的蛋白表达。短期给予各浓度T3对缝隙连接通信功能的无明显影响,而庚醇可以减弱缝隙连接的通信功能。 结论:三碘甲状腺原氨酸对培养未成熟心肌细胞遭遇缺氧复氧凋亡具有保护作用,而其作用的机制不局限于细胞间的缝隙连接,而可能在与心肌细胞的线粒体Cx43蛋白构成通道变化有密切关系。
目的：观察七氟烷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤是否具有保护作用,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases, p38 MAPK)信号传导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤中的意义。 方法：取出生1-3天的Sprague-Dawley (SD)大鼠心脏,利用酶消化法分离心肌细胞。通过倒置相差显微镜观察培养细胞的生长状态,并采用a-actin免疫细胞化学法鉴定培养细胞类型及心肌细胞特征。制作心肌细胞缺氧／复氧模型和七氟烷后处理模型,并将培养乳鼠心肌细胞随机分为7组：(1)正常对照组(Control组)细胞于C02培养箱中持续培养3h。(2)缺氧／复氧组(A／R组)细胞缺氧2h,复氧1h。(3)七氟烷后处理组(S-post组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min。(4)七氟烷后处理+SB203580组(S-post+SB组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min,并在七氟烷后处理同时给予p38 MAPK抑制剂SB203580(终浓度为5μmol/L;溶解于终浓度为0.1%的DMSO),持续20min。(5)七氟烷后处理+二甲亚砜组(S-post+DMSO组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min,并在七氟烷后处理同时给予SB203580溶剂DMSO(终浓度为0.1%),持续20min。(6)SB203580组(SB组)细胞缺氧2h,复氧1h,并在复氧同时给予SB203580(终浓度为5μmol／L；溶解于终浓度为0.1%的DMSO),持续20min。(7)二甲亚砜组(DMSO组)细胞缺氧2h,复氧1h,并在复氧同时给予DMSO(终浓度为0.1%),持续20min。实验结束时各组分别用比色法检测乳酸脱氢酶(lactate

而且 dehydrogenase, LDH)活性、肌酸激酶(creatine kinase, CK)活性,台盼蓝排斥实验检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并提取细胞蛋白,应用Western blot检测]p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)蛋白水平。 结果：成功培养出大鼠心肌细胞并经免疫组化鉴定证实,细胞数量达到实验要求。与Control组相比,A／R组LDH和CK活性升高、细胞存活率降低、流式细胞仪检测细胞凋亡率升高(P<0.05)。与A／R组相比,S-post组LDH和CK活性降低、细胞存活率提高、流式细胞术检测细胞凋亡率降低(P<0.05)。与S-post组相比,S-post+SB组LDH和CK活性升高、细胞存活率降低、流式细胞仪检测细胞凋亡率升高(P0.05)。各组间p38 MAPK水平差别无统计学意义(P>0.05),与A／R组相比,S-post组p-p38 MAPK蛋白水平升高(P<0.05)。SB组p-p38水平低于A／R组(P0.

01或0.05)。LPS刺激能明显增加4h和24h小鼠肺泡灌洗液角质细胞趋化因子(KC)的含量(P<0.01),只有SHBM1009经鼻滴入4h组显示出明显抑制作用(P<0.01)。利用伊文思蓝染色证明LPS能增加肺泡毛细血管通透性(P<0.01),而经鼻滴入SHBM1009具有明显保护作用(P<0.05)。通过肺组织免疫荧光染色方法发现经鼻滴入SHBM1009能抑制LPS所诱导的中性粒细胞(P<0.01)和巨噬细胞的浸润(P<0.05和P<0.05和P<0.05or0.01)。在PE刺激后第7天,大鼠肺组织密度明显升高,第28天时,肺组织密度明显减轻,SHBM1009或Bud治疗具有明显保护作用(P<0.01)。PE刺激后第7天,Vehicle组肺泡灌洗液蛋白含量明显增加(P<0.01),SHBM1009或Bud治疗均具有明显抑制作用(P<0.05orP<0.01)。PE刺激后第7天和第28天,BALF细胞计数明显增多(P<0.01),SHBM1009或Bud治疗均具有明显抑制作用(P<0.05or0.01)。PE刺激能诱导BALF炎症因子IL-1p水平的升高,SHBM1009或Bud治疗均具有明显抑制作用(P<0.05)。IR之后,大鼠肺泡灌洗液细胞计数和蛋白水平均明显增加,KGF-2和DXM均显示出不同程度的保护作用(P<0.05或P
研究背景 Epacadostat 价格 作为当前全世界发生率及死亡率最高的恶性肿瘤,肺癌具有很强的异质性。根据几十年来沿用的组织学分类方法指导下的肺癌治疗,目前已遭遇重大瓶颈,而基于生物学特性的肺癌分类,仍是当前选择治疗策略的基础。根据非小细胞(non

small cell lung cancer, NSCLC)患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是否存在敏感突变来选择治疗方案,这种量体裁衣的策略为靶向治疗目标人群带来了突破性的生存获益,已成为NSCLC基于分子分型个体化治疗的典范。然而,NSCLC患者中分子驱动事件未知的仍占据相当份额,为了这部分患者也能得到最适宜的个体化治疗,需要更详细的NSCLC分子分型。 2007年,间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)基因和棘皮动物微管相关蛋白样4(echinoderm microtubule associated protein like4, EML4)融合型肺癌的发现,堪称NSCLC临床研究史上的又一里程碑事件。研究提示,该分子亚型的肺癌患者约占所有患者的5%；同时将EML4-ALK转染入正常细胞后,该细胞可转化为肿瘤细胞,进入体内后将最终定位于肺部形成肿瘤；体内实验证实,表达EML4-ALK融合基因的NSCLC中瘤细胞在应用针对ALK的特异性小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine

kinases PLX3397购买 inhibitors, TKIs)Crizotinib后,肿瘤可显著缩小乃至消失；早期临床试验亦显示,ALK融合型肺癌患者在给予ALK TKI后,其生存获益较标准治疗有显著提高。目前美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration. FDA)已批准将ALK TKI应用于发生ALK融合的晚期NSCLC患者。因此,EML4-ALK已成为继EGFR之后NSCLC的一个新治疗靶标。本研究所就收治的连续NSCLC病例进行了流行病学的初步研究,发现EML4-ALK在未经选择的国人患者中,发生率高于已报道的欧美日等发达国家和地区：且多发生于腺癌患者中。在与EGFR, K-RAS突变等常见肺癌分子事件间的相关性研究发现,EML4-ALK与上述两者基本呈互斥性。目前,ALK作为受体酪氨酸激酶之一,其下游调控细胞恶性转化生长的分子机制和相关关键信号通路尚不清楚,需要依靠流行病学数据提供的概率和趋势,应用高通量的生物信息学手段,从海量数据中总结其独特之处,并根据计算结果对关键分子进行后续的功能验证。因此本研究分成二个部分：

第一部分采用生物信息学领域相关工具,全面分析发生EML4-ALK基因融合的NSCLC在肿瘤信号转导中各信号通路的变化状态,并与发生其他分子事件的肺癌组织进行比较,筛选差异表达基因,对其进行注释及归类,在整体水平初步探索EML4-ALK融合型NSCLC的发病机制、特异性的生物学行为及信号转导特征。 Lenvatinib 第二部分主要对第一部分的发现进行初步的功能验证。通过对表达谱芯片的数据挖掘,我们发现STAT3参与的诸多肿瘤生物学过程和信号转导通路在EML4-ALK融合型肺癌的信号转导中发挥了关键性作用,该基因在多条重要通路中处于枢纽位置。为初步验证STAT3的功能,我们通过RNAi技术在出现EML4-ALK融合及对照细胞系中沉默STAT3的表达,并通过构建STAT3表达载体,利用分子克隆技术,将其在靶细胞中过表达,尝试从正反两个方面论证STAT3主导的信号转导过程中,该分子表达水平的高低对通路各关键节点的影响,并初步分析该基因与肿瘤细胞增殖、凋亡间的相互作用,为后续的临床研究及个体化治疗提供理论支持。课题设计与主要结果 第一部分EML4-ALK融合型肺癌生物学特性的数据挖掘与分析 第一章ALK表达水平与EML4-ALK融合发生的关系 目的 分析NSCLC组织中EML4和ALK基因表达水平与EML4-ALK融合型肺癌发生的相关性。 材料与方法 将本研究所流行病学研究的标本中质控合格的94例NSCLC组织标本制备表达谱芯片,采取customCDF的注释方法及RMA(Robust multiarray analysis)算法计算芯片杂交信号值。方差分析比较EML4-ALK融合组、非融合组和正常组织EML4、ALK两个基因的表达水平；Pearson相关分析比较两者间的相关性。 结果 customCDF注释方法共注释18123个人类基因。含EML4-ALK融合组11例及非EML4-ALK融合组83例,应用RMA算法计算ALK基因表达信号值并对数均一化后,EML4-ALK融合组肿瘤标本均值+SD为5.27±1.35,非EML4-ALK融合组肿瘤组织为2.99±0.17,正常组织中为2.86±0.16,EML4-ALK融合高于非融合组(P=0.001),高于正常组织(P=0.000),差异有统计学意义,非融合组高于正常组织(P=0.000),差异有统计学意义；EML4基因表达水平在融合组肿瘤组织、非融合组肿瘤组织和正常组织中表达水平分别为6.47±0.29、6.87±0.48和6.42±0.47,融合组与非融合组EML4表达差异有统计学意义(P=0.003),非融合组与正常组EML4表达差异有统计学意义(P=0.000),融合组与正常组EML4表达差异无统计学意义(P=0.922)。Pearson目关分析融合组与非融合组EML4或ALK表达的相关性：EML4表达水平与融合基因状态相关(P=0.009),但R=-0.268,仅有弱相关性,实际效用很低；ALK表达与融合基因状态相关(P=0.000).R=0.

00%)。而80例膀胱尿路上皮癌组织中有59例(73.75%)为表达阳性。这说明相比于正常膀胱移行上皮组织,OPN具有一定的特异性,有希望成为膀胱尿路上皮癌早期筛查和诊断的协同分子标记物。 最后,通过免疫组化结果的统计学分析可以看出CIP2A的表达,与病人的年龄、性别、临床的分期、分级、组织病理类型等这些临床指标,无明显的相关性。但CIP2A与OPN在膀胱尿路上皮癌组织样本中的蛋白表达有明显的相关性,提示两者在蛋白协同表达方面具有统计学意义。同时CIP2A.OPN蛋白表达主要在细胞胞浆、同时部分细胞核也有阳性表达的定位,也显示了两者在位置及表达强度上具有一致性。CIP2A和OPN在临床标本蛋白水平免疫组化的协同表达结果,提示了两者结合作为膀胱肿瘤的标记物的研究应用前景。

所以 综上所述,我们从临床实际问题出发,采用临床组织样本和临床资料,从标志物的遗传和生化调控的视角,深入揭示CIP2A和骨桥蛋白(肿瘤或间质来源的)两者之间可能具有的协同表达机制和临床应用价值。既往研究中CIP2A和骨桥蛋白多效性的功能在肿瘤发生发展中的作用,及本课题临床标本检测的突出意义显示出,CIP2A和OPN作为膀胱尿路上皮癌诊断分子标记物的可能。进一步深入了解有关CIP2A和骨桥蛋白调节的信号转导通路,将有助于这两种分子标记物作为对抗癌症的新型分子诊断和靶向治疗标记物的可能。
目的： 探讨高容量血液滤过(high volume hemofiltration, HVHF)对脓毒症伴急性肾衰竭犬的疗效,并观察血清及肝、肺、肾组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)、 TNF-α、IL-6等因子的变化,HVHF对肝、肺、肾病理改变的影响。 方法： 12只雄性Beagle犬双侧输尿管结扎后静脉注射内毒素(LPS)1.0mg/kg,制作脓毒症伴急性肾衰竭犬模型。随机均分为模型组和HVHF组(注射LPS后立即行HVHF治疗24h)。注射LPS前及注射后2、4、8、16、24h取静脉血检测血常规、肝肾功能、电解质,注射LPS前及注射后24h行动脉血气分析,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各时间点血清及注射后24h肝、肺、肾组织上清液中HMGBl、 TNF-α、IL-6的浓度,并行24h肝、肺、肾组织HE染色观察组织损伤程度。

结果： 一般情况改变：与模型组相比,HVHF组所有犬体温、呼吸、心率、缺氧表现及大便情况明显改善。 细胞炎症因子的变化：与模型组相比,HVHF组血清HMGB1、TNF-α、IL-6的峰值及维持值降低,HMGB1达峰值时间延迟；肝、肺、肾组织上清液中HMGB1、TNF-α、IL-6浓度降低(P<0.05)。注射LPS后24h两组动物均出现呼吸衰竭；HVHF组注射LPS后24h的PaO2高于模型组,PaCO2低于模型组(P<0.05)；HVHF组肺脏炎性细胞浸润、肺泡破裂等组织学改变明显减轻,量化评分(2.04±0.62比2.50±0.51),差异有统计学意义(P0.05)。 时间 结论： 1.HVHF可以改善脓毒症伴急性肾衰竭犬呼吸、心率、缺氧、大便等一般情况。 2. HVHF可以降低脓毒症伴急性肾衰竭犬血清Cr、BUN、ALT、AST水平,改善肺功能。 获悉更多 3. HVHF可以降低脓毒症伴急性肾衰竭犬血清及肝、肺、肾组织HMGB1、TNF-α、IL-6的浓度,减轻肝、肺、肾组织损伤。
子痫前期（PE）多发生于妊娠20周后，以高血压和蛋白尿为主要特征，伴全身多器官功能损害或功能衰竭，严重者可出现抽搐、昏迷，甚至死亡。目前，诱发子痫前期的病因及病理机制仍是围产医学中广泛研究的重要课题。因此，子痫前期中胎盘组织内信号转导途径的改变，是研究PE发生发展的关键性环节之一。

促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases, MAPK）是广泛存在于真核生物细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，其家族主要由c-Jun-N-终端激酶（JNK）、p38激酶和细胞外信号转导激酶（ERK）等组成。MAPK通过将细胞外的刺激信号传导至细胞内，从而引起细胞发生增殖、分化、转化及凋亡等生物学反应。ERK主要介导细胞增殖、分化、转化，而JNK和p38则与细胞损伤、炎症、梗死、氧化应激反应密切有关，三者之间既各自独立，也相互作用，共同参与完成细胞内各种信号的转导。 子宫螺旋动脉和管腔中滋养细胞层的重铸障碍，导致胎盘缺氧缺血灌注不足，胎盘炎性因子等过度激活，使得滋养细胞、血管内皮细胞等发生功能障碍，最终导致PE发生。通过以往对子痫前期胎盘滋养细胞的体外培养发现，p-ERK的表达较正常下降而p-p38的表达却与滋养细胞毫无关系。然而通过动物实验发现p38α的高表达与胎盘的形成缺陷相关，可引起胎盘滋养细胞、间质细胞凋亡增加，最终导致胎鼠的死亡率上升。因此，PE中MAPK信号转导通路蛋白对滋养细胞的调节仍需进一步研究。 本课题以子痫前期和正常妊娠妇女的血清和胎盘组织进行研究，检测PE组和正常妊娠组血清中TNF-α、IL-6，胎盘组织中MAPK转导通路相关蛋白（p38、JNK、ERK）、凋亡蛋白以及MMP-9和TIMP-1的表达。通过对MAPK信号转导通路及凋亡蛋白的研究，探明引发子痫前期的主要靶蛋白，为子痫前期发生的病理机制及病理生理学研究提供实验依据。本研究总共包括三个部分： 实验一子痫前期患者胎盘组织中MAPK信号转导通路相关蛋白的表达 目的：研究在子痫前期外周血肿瘤坏死因子TNF-α与胎盘组织MAPK信号转导通路相关蛋白的相关性，探明子痫前期的主要靶蛋白，为子痫前期的病理机制提供依据。方法：采用病例对照研究，选择西京医院妇产科住院分娩的子痫前期孕妇和正常妊娠妇女各45例，通过ELISA分析两组孕妇血清中TNF-α、IL-6，免疫组化与蛋白印记检测胎盘组织中MAPK信号转导通路相关蛋白以及NF-κBp65、c-fos、c-Jun，并进行相关性分析。结果：（1）子痫前期血清中TNF-α、IL-6水平明显高于正常妊娠组1.56±0.3vs0.85±0.1pg/ml、95.31±1.38vs56.40±1.45pg/ml，P<0.01；(2)子痫前期组胎盘滋养细胞中p-p38、p-JNK的表达均高于正常妊娠组（P<0.01），而p-ERK的表达则低于正常妊娠组（P<0.

Zey体外抗肿瘤作用研究体外培养人结肠癌细胞HCT-8,人宫颈癌细胞HeLa和Caski,人肝癌细胞HepG2,人乳腺癌细胞MCF-7和MX-1,人口腔表皮样癌细胞KB,人胃癌细胞BGC823,人前列腺癌细胞DU-145和PC-3共10种肿瘤细胞株和人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1和人正常膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1共2种正常细胞株,采用MTT法检测Zey的增殖抑制作用,并计算出半数抑制浓度IC50 (μM)。以对Zey敏感的人宫颈癌HeLa和Caski细胞为研究对象,首先以不同剂量(0、3.27、6.54、13.08、26.16和52.32 μM；0、1.64、3.27、6.54、13.08和26.16μM)的Zey分别于不同时间(12、24、36、72、96 h)处理HeLa和Caski细胞,测定其抑制肿瘤细胞增殖的时效和量效关系。Zey处理细胞24 h后,光学显微镜观察对细胞凋亡形态的影响；DAPI染色观察对细胞核凋亡形态的影响；克隆原形成试验检测对肿瘤细胞集落形成能力的影响；流式细胞术分析对肿瘤细胞周期分布的影响；明胶酶谱法检测对肿瘤细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)分泌的影响。2. SILAC分析Zey对肿瘤细胞蛋白质组表达变化的影响通过体外培养Zey敏感的人宫颈癌HeLa细胞,应用SILAC培养基进行细胞培养、同位素标记,Zey干预24

h后,提蛋白,电泳,进行质谱检测。应用Gene Ontology、 Cytoscape软件和Western blot、qPCR技术分析和鉴定Zey处理前后人宫颈癌HeLa细胞中蛋白质组以及磷酸化蛋白质组表达的变化。3.Zey诱导肿瘤细胞凋亡作用研究应用透射电镜观察Zey对肿瘤细胞超微结构的影响；采用AO/EB染色检测Zey诱导肿瘤细胞凋亡的程度；应用流式细胞术通过JC-1染色检测Zey对肿瘤细胞线粒体膜电位的影响；应用流式细胞术采用Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒检测Zey诱导肿瘤细胞凋亡的时期和比例；采用TUNEL原位检测凋亡法进一步检测Zey对肿瘤细胞诱导凋亡的比例；应用DCFH-DA荧光探针法检测Zey对肿瘤细胞活性氧产生的影响。4.Zey体外抗肿瘤分子机制研究使用Discovery Selleckchem GDC-0449 Studio 3.5软件包中ligand profiler模块,对PharmaDB药效团库中6000余种靶点药效团逐一进行匹配计算,对Zey进行作用靶点分析。应用Western blot技术研究①Zey对内源凋亡通路和外源凋亡通路标志性蛋白表达的影响；②Zey对Bcl-2家族蛋白表达的影响；③Zey对Caspase家族凋亡标志性蛋白表达的影响；④Zey对ERK/MAPK通路激酶磷酸化水平的影响；⑤Zey对PI3K/AKT/mTOR通路激酶磷酸化水平的影响；⑥应用小分子抑制剂确定Zey作用PI3K/AKT/mTOR信号通路及其上游RTKs的关键靶点蛋白。5.Zey体内对人宫颈癌HeLa裸鼠移植瘤药效实验及分子机制研究采用人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植成瘤,再把裸鼠传代2代以上的瘤块,使用套管针接种于裸鼠腋部皮下,建立人宫颈癌裸鼠异体移植瘤模型。分别以7.5mg/kg,

A-1210477研究购买 15mg/kg剂量腹腔注射给药,连续14天,观察Zey对人宫颈癌移植瘤模型动物的体重、瘤体积和瘤重的影响,计算抑瘤率和T/C值；采用免疫组化和Western blot检测Zey对肿瘤组织中相关信号通路蛋白表达的影响。结果：1.Zey体外抗肿瘤作用的初步研究体外抗肿瘤实验表明,Zey对10种不同来源的恶性肿瘤细胞均具有明显的抑制活性,其IC50值范围为3.3-25.7μM,其中宫颈癌HeLa和Caski细胞对Zey较为敏感,IC50值分别为4.2和3.3μM,而对2种正常细胞WPMY1和SV-HUC-1的抑制作用显著低于肿瘤细胞,IC50值分别为81.4和98.4μM,表明其对肿瘤细胞具有很好的选择性。时效、量效实验表明Zey对HeLa和Caski细胞的抑制作用具有很好的时间-剂量依赖性。Zey干预24

h后,HeLa和Caski细胞皱缩,透光度增加,贴壁能力下降；DAPI染色可以观察到染色质固缩、细胞核碎裂、核解体等现象；克隆实验显示Zey对HeLa和Caski细胞具有较强的集落形成抑制能力；流式细胞仪检测Zey能够将HeLa和Caski细胞分别阻滞在G0/G1期和S期；明胶酶谱实验检测Zey能够抑制HeLa细胞的基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的分泌。2. 点击此处 SILAC分析Zey对肿瘤细胞蛋白质组表达变化的影响为了明确Zey抗肿瘤作用的蛋白质组变化,从而能够高效、快速地定位Zey可能的作用靶点和作用机制,应用SILAC蛋白组学技术对Zey作用前后的蛋白质组的变化进行了筛选。结果发现Zey作用HeLa细胞24 h导致229个蛋白显著改变,15个蛋白表达上调,214个蛋白表达下调,其中下调幅度较大的蛋白包括：14-3-3protein theta、14-3-3 protein zeta/delta、Bcl-2、Mcl-1、Bcl-xL、PARP1、HSP70 1A/1B、 HSP 90-beta、HSP70-4、HSP beta-1、HSP105、HSP 90-alpha、RPL38、RPL17、RPS8、 RPL7a和RPL37a等,这些蛋白主要与细胞能量代谢、细胞凋亡和细胞周期相关。3.Zey诱导肿瘤细胞凋亡作用研究在SILAC实验结果的基础上,我们进一步考察Zey是否能够诱导细胞凋亡。通过透射电镜观察、AO/EB染色、TUNEL、JC-1检测线粒体膜电位、Annexin V-FITC双染检测细胞凋亡的时期和比例以及DCFH-DA荧光探针检测活性氧等实验,可观察到Zey干预24 h后,HeLa和Caski细胞表现出明显的凋亡形态,在超微结构下,能够观察到凋亡小体的产生,线粒体膜电位显著降低,产生大量活性氧,HeLa和Caski细胞凋亡比例最高可分别达到：83.68%和88.00%,表明Zey可明显诱导HeLa和Caski细胞的凋亡。4.Zey体外抗肿瘤分子机制研究对Zey抗肿瘤分子机制的研究发现其明显诱导肿瘤细胞凋亡,对凋亡的内源性通路和外源性通路均产生影响,可活化凋亡因子caspase-8, caspase-9, caspase-7, caspase-3以及PARP和Bid,而使FasL、Bcl-2、Bcl-xL等表达下降,FasL、Fas、FADD等表达上调,诱导线粒体内Cytochrome c和AIF释放到胞质。应用Discovery Studio 3.

05),HbAlC在4周时有所下降,8周时进一步下降且有统计学差异(p<0.05),IPGTT示SGK1抑制剂组30min、60min、120min血糖下降有统计学差异(p<0.05),葡萄糖曲线下面积(AUC)明显减少(p
目的:探讨青海非小细胞肺癌(Non-small

cell lung cancer,NSCLC)患者表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变率,突变状态与其临床基本资料及病理类型之间的相互关系;对比观察NSCLC患者不同EGFR基因状态下接受化学治疗和分子靶向治疗后的临床疗效及无疾病进展期(progression free surviva,PFS),为NSCLC患者的临床治疗提供有力的理论依据。方法:搜集2013年01月至2015年10月本地区医院经组织病理学证明的晚期或局部晚期的不能手术的NSCLC患者,通过病灶穿刺及淋巴结穿刺、支气管镜活检等获得组织标本,应用扩增阻滞突变系统(amplification Ruxolitinib浓度 refractory mutation system,ARMS)法检测EGFR基因。记录患者各种基本资料(性别、民族、年龄、吸烟情况)、明确病理类型、体力状况(performance status,PS)评分及分期,分析EGFR基因状态与上述各因素的关系,根据患者不同EGFR基因状态行分子靶向治疗或化疗,对规律治疗者进行疗效评价,分析临床有效率及PFS。结果:1、70例非小细胞肺癌患者EGFR突变阳性27人,突变率38.6%;其中,男、女突变率分别为27.3%、57.7%(P=0.012);吸烟、不吸烟患者突变率分别为18.5%、51.2%(P=0.006);腺癌、鳞癌突变率分别为39.7%、0.00%(P=0.519);小于60岁患者与大于等于60岁患者突变率分别为36.8%、40.6%(P=0.746);汉族、非汉族突变率分别为37.3%、66.7%(P=0.555);Ⅲ期、Ⅳ期突变率分别为33.3%、45.2%(P=0.313);PS评分0-1分与2分突变率分别为37.9%、50.0%(P=0.637);外显子19突变15例(55.56%,15/27),外显子21突变11例(40.74%,16/27),外显子18、20同时突变1例(3.70%,1/27),外显子19、21同时突变1例(3.70%,1/27),外显子19、20同时突变1例(3.70%,1/27)。2、NSCLC患者EGFR基因突变与性别、吸烟情况相关,差异具有统计学意义(P0.05)。3、EGFR突变阳性患者靶向治疗与化疗的客观有效率ORR分别为37.5%、9.1%,差异无统计学意义,P>0.05;疾病控制率DCR分别为87.5%、27.3%,差异有统计学意义,P0.05;DCR分别为27.3%、65.1%,差异有统计学意义,P<0.05)。EGFR突变阴性患者化疗的中位PFS是201d。结论:1、青海NSCLC患者EGFR基因突变率为38.6%,其与性别、吸烟史相关,其中女性、非吸烟患者EGFR基因突变率高。2、EGFR基因突变以外显子19、21为主。3、EGFR突变阳性靶向治疗疾病控制率高于化疗;EGFR突变阴性化疗比阳性化疗疾病控制率高。4、NSCLC患者治疗前须行EGFR基因检测,敏感突变型患者TKI治疗较化疗可获得更好的PFS,突变阳性者应首选靶向治疗,EGFR基因野生型患者行化疗为最佳。
目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)、曲古霉素A(TSA)对Lovo细胞株生物学行为的影响和TSA对Lovo细胞株5-FU化疗敏感性的影响及可能的机制。方法:选取结直肠癌Lovo细胞株,将实验分为5组:对照组、5-FU组、TSA组、TSA预处理组、联合组(TSA+5-FU)。(1)MTT法及软琼脂集落形成实验:对各组细胞加药后的增殖水平进行检测。(2)Transwell肿瘤细胞侵袭实验及划痕愈合实验:对干预24

www.selleckchem.cn/products/Erlotinib-Hydrochloride.html Dolutegravir订单 h后各组细胞的侵袭和迁移能力进行检测。(3)流式细胞术:对干预24 h后各组细胞的凋亡率水平及细胞周期各时相比例进行检测。(4)Western-blot法:对干预24 h后各细胞组胸苷酸合酶(TS)蛋白的表达情况进行检测。结果:(1)MTT细胞增殖检测:与对照组相比,5-FU组、TSA预处理组及联合组细胞24 h、48 h和72 h生长受到抑制(p0.05)。(2)软琼脂集落形成实验:与对照组相比,各用药组集落形成数均明显下降(p<0.05),与5-FU组相比,TSA预处理组与联合组细胞集落形成数减少显著(p0.05)。(3)细胞侵袭及迁移能力检测:与对照组相比,各用药组的穿膜数及划痕愈合率都有所下降(p<0.05),TSA预处理组及联合组与5-FU组比较,细胞穿膜数和划痕愈合率下降明显(p0.05)。(4)细胞凋亡检测:与对照组比较,各加药组细胞凋亡比例增加明显(p<0.05),与5-FU组比较,TSA预处理组及联合组细胞凋亡比例升高显著(p0.05)。(5)细胞周期检测:与对照组相比,各用药组在细胞周期各时相的比例变化无显著差异(p>0.05)。(6)TS蛋白表达检测:与对照组相比,5-FU组TS表达无明显差异(p>0.05),TSA组、TSA预处理组及联合组细胞TS表达明显下调(p<0.05);与5-FU组相比,TSA组、TSA预处理组及联合组细胞TS表达显著减少(p0.

05)。STAT3mRNA表达活性也受到显著抑制(p<0.05),但STAT1mRNA并未出现显著抑制效应。T-2毒素诱导IL-6基因表达在12h出现了显著的抑制p
背景：人参皂苷Rh2是中国传统中药人参中的主要活性成分，具有优异的免疫调节、抗炎、抗疲劳、抗肿瘤等药理作用。然而因其难溶于水,限制了体外实验中可应用的最大浓度，人参皂苷Rh2的生物活性在实际应用和生产研究中受到严重的制约。为了提高Rh2的水溶性和生物活性，本室制备了人参皂苷Rh2的硫酸化修饰产物Rh2-B1和Rh2-B2。两种衍生物的水溶性都获得大幅提高。在本论文中，我们研究了Rh2-B1对细胞毒性T细胞系CTLL-2细胞的作用，细胞毒性T细胞因其能够保护机体免受病毒感染而成为近年来研究的热点，此外，我们还探讨了Rh2影响CTLL-2细胞增殖和发挥免疫功能的分子机制。

目标：我们的目标是调查Rh2-B1对干扰素-（γInterferon-γ, IFN-γ）的分泌和细胞增殖的影响，并研究其可能的机制。 LY294002数据表 材料与方法：酶联免疫吸附实验（Enzyme Linked ImmunosorbentAssay,ELISA）被用于检测IFN-γ在全血培养上清和CTLL-2细胞培养上清液中的浓度。噻唑蓝染色法（MTT Cell Proliferation Assay，MTT）被用来检测CTLL-2细胞的增殖情况。蛋白免疫印迹试验（Western blot）被用来评价CTLL-2细胞中信号转导通路相关蛋白表达量及其活化程度的变化。 结果：我们的研究证明，Rh2-B1能够显著提高Balb/c小鼠全血培养上清中IFN-γ的水平。在此之后，我们评估了Rh2-B1对CTLL-2这种细胞毒性T细胞的增殖、IFN-γ的分泌情况的影响，并研究了其作用机制。Rh2-B1刺激了CTLL-2细胞的增殖和IFN-γ的分泌，还能够介导丝裂原活化蛋白激酶p38（p38mitogen-activated 此网站 protein kinase，p38MAPK）和胞外信号调节激酶（extracellular regulated proteinkinases，ERK）的表达和活化，但对淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase,Lck or p56Lck）和信号转导及转录激活因子（Signal transducers and activators oftranscription5，STAT5）的表达呈现抑制作用。这种作用能够被特异性的p38MAPK抑制剂SB203580和特异性ERK抑制剂U0126阻断。 结论：Rh2-B1能够通过激活p38MAPK和ERK依赖的信号通路进而刺激细胞毒性T细胞的增殖和IFN-γ的分泌。这可能成为一种新的病毒感染治疗潜在药物。
凋亡对于胚胎发育具有至关重要的作用，细胞增殖和凋亡的共同作用才雕塑出了面部复杂精细的结构。各种原因导致的凋亡改变，会干扰两侧腭突和原始腭的融合，从而引起腭裂的发生。研究证明骨形成蛋白（bone

morphogenetic protein (BMP))通过调节凋亡，能够导致上颌骨和腭骨的缺损，进而引起腭裂的发生；而其上游基因GATA-6作为与胚胎发育密切相关的转录调节因子，能引起多个胚层来源的器官发育异常。GATA-6等位基因完全被敲除的杂合子动物无法存活，而胚胎干细胞小体（embryonic stem cell–derived embryoid 可能 bodies (EBs))能够准确模拟胚胎发育早期的情况，因此是研究GATA-6与腭裂等胚胎发育异常导致的先天性畸形相关性的理想模型。 GATA蛋白家族，作为一组锌指翻译因子，对于细胞分化和胚胎器官发育具有非常重要的作用。在小鼠体内敲除GATA-6会阻碍内胚层的分化，并且引起外胚层的凋亡。之前的实验观察到，敲除GATA-6的EB内出现大量的凋亡，并且其内胚层的分化会受到影响。本实验发现，将正常的内胚层细胞的移植到突变的胚胎干细胞小体能够完全阻止细胞凋亡，并恢复外胚层极化和成腔。laminin能够诱导基底膜细胞在突变胚胎干细胞小体上组装；而laminin

γ1被敲除的内胚层细胞移植到突变胚胎干细胞小体上，由于不分泌三聚体层粘连蛋白，就不会形成基底膜，只能部分抑制凋亡。这些现象说明内胚层细胞来源的基底膜和非基底膜因素都对于GATA-6依赖的细胞存活具有重要的作用。 我们的微阵列分析显示在EB分化的过程中，BMP-2、IGF-2、TGF-β和VEGF-A的表达增加，而BMP-4，FGF-4，PDGF-A，PDGF-C和VEGF-C的表达减少。为了确定这些生长因子的表达在GATA-6被敲除的胚胎干细胞内是否发生了改变，我们采用了逆转录PCR（RT-PCR）和免疫印迹的方法对2天的EB进行分析，发现GATA-6被敲除后，BMP-4和IGF-2的mRNA表达明显减少，而FGF-4的mRNA表达不变。重要的是，BMP-2的mRNA在2天正常的EB内已经能检测到，然而在GATA-6被敲除的EB内则检测不到。为了证明各种生长因子对EB凋亡的影响，我们在1天的GATA-6-/-的EB内，使用分别使用浓度为0.1μg/ml的BMP-2, FGF-4, EGF, IGF-2,PDGF和TGF-β1分别作用24小时，并且与对照组相比，然后使用全量免疫染色，通过检测cleaved caspase-3对凋亡进行分析。结果显示凋亡广泛的出现在GATA-6-/-的EB的周围细胞内，而BMP-2的加入明显抑制了caspase-3的激活， FGF-4, EGF和PDGF则没有效果。将BMP-2的浓度增加到0.

05)；但患者空腹血糖、甘油三酯和低密度脂蛋白水平明显高于对照组(均P＜0.05。糖尿病患者收缩压(P=0.086)与舒张压(P=0.116)水平较对照组差异无统计学意义。 2．T2DM患者血浆CF6水平(262.1±49.9)pg／ml比对照组高23.9％(P＜0.01)，患者血浆6-keto-PGF1a水平(13.7±3.9)pg／ml比对照组降低16.5％(P＜0.05)。患者血浆6-keto-PGF1a水平与CF6水平呈显著负相关关系(r=-0.52，P＜0.01)。 3．分析临床危险因素发现，吸烟患者血浆CF6水平显著高于不吸烟患者(293.1±56.2pg／ml对255.6±46.4 pg／ml，P＜0.05)。但本组患者血浆CF6水平在有无高血压病分组间的差异无统计学意义。血浆CF6水平在不同性别间差别无统计学意义(男259.7±46.6pg／ml对女264.6±53.9pg／ml，P=0.687)。应用胰岛素治疗患者的血浆CF6水平显著低于非胰岛素治疗者(249.13±65.9pg／ml对281.75±55.4pg／ml，P＜0.05)。

4．单变量简单相关分析显示，患者血浆CF6水平与空腹血糖(r=0.535，P＜0.01)、GHbA_(1c)、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白及载脂蛋白B水平均显著相关；以CF6水平为因变量，选择年龄、性别、血糖、血脂及血压等指标为自变量进行多元回归分析显示：两步选入的变量分别为GHBA_(1c)和LDL，无变量从方程中剔除。回归分析第一步接受变量为GHBA_(1c)(r=0.553，R~2=0.306，P＜0.01)，第二步接受GHBA_(1c)和LDL(r=0.638，R~2=0.406，P＜0.01)；对方程检验有统计学意义(F=21.575，P＜0.01)；回归方程为CF6=105.95+12.24×GHBA_(1c)+16.44×LDL。即，GHBA_(1c)和LDL是影响T2DM患者血浆CF6水平的独立因子。 不 血浆6-keto-PGF1a水平与空腹血糖、GHbA_(1c)及CF6水平均显著相关。以血浆6-keto-PGF1a水平为因变量，多元逐步回归分析显示血浆CF6水平是影响T2DM患者6-keto-PGF1a水平变化的独立因子(r=-0.521，R~2=0.27，P＜0.01)。

5．离体实验发现，排除渗透压影响后，高浓度葡萄糖孵育内皮细胞，CF6基因表达和蛋白释放水平均呈时间和浓度依赖性增加。分别给予10mmol／L，20mmol／L和30mmol／L浓度葡萄糖孵育24h后，培养基中CF6浓度比对照组(123.8±14.7pg／ml)分别增高28.5％(P＜0.05)，116.2％(P＜0.01)和125.5％(P＜0.01)。以含30mmol／L葡萄糖培养基孵育细胞后，时间依赖性增加CF6分泌水平(6h 163.5±20.4 pg／ml；12h 201.0±35.0pg／ml；24h 272.3±33.0 pg／ml和48h 266.5±13.2 pg／ml)，24h达到稳态水平，较对照组培养基中CF6浓度高2.2倍(P＜0.01)。CF6基因的表达有相似改变。 6．用30mmol／L葡萄糖孵育HUVECs显著促进p38 MAPK的磷酸化水平，而甘露醇对照组未发现该作用。并且，PKC抑制剂和p38 MAPK抑制剂能够抑制高糖诱导的p38 MAPK磷酸化。同时发现，高糖诱导的CF6分泌能够被PKC阻滞剂和P38 selleck screening library MAPK阻滞剂显著抑制，其抑制率分别为-45％(P＜0.01)和-23％(P＜0.018)；同样，上述阻滞剂也抑制高糖诱导的CF6mRNA表达(均P＜0.01)。 7．胰岛素抑制高糖刺激的CF6分泌，胰岛素(10~(-7)mol／L)与高糖共孵育HUVECs 24h后，培养基中CF6浓度较单纯高糖孵育组降低56.6％(P＜0.01)。同样，与单纯高糖组比较，加入胰岛素共孵育内皮细胞能够显著抑制高糖诱导的CF6mRNA表达增加(P＜0.01)。

结论及意义 1．T2DM患者血浆CF6水平升高，并与其PGI_2水平降低独立相关。提示T2DM患者CF6升高可能通过抑制PGI_2等途径参与糖尿病及其心血管并发症的发生，为体液因素参与糖尿病发病提供了新认识。 很少 2．T2DM患者血糖水平与循环CF6升高显著正相关；体外高糖刺激HUVECs也能促进CF6表达与分泌。表明高糖可能是新发现的促进内源性CF6分泌的刺激因子。 3．PKC及P38MAPK等细胞内信号通路分子活化参与高糖诱导的内皮细胞CF6释放。提示探讨糖尿病CF6异常与PKC、MAPKs、PGI_2等相关因子的关系，可能具有重要理论和临床价值。 4．体内外实验均提示胰岛素抑制高糖诱导的CF6分泌，提示胰岛素治疗可能有助于降低糖尿病患者循环CF6水平异常。
目的:研究热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)磷酸化在血管紧张素II(angiotensinⅡ,AngII)与血小板源性生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移中的作用及其作用机制。 方法:采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞;用特异性的单克隆Phospho-HSP27抗体的蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSP27的活性;用FITC-鬼笔环肽标记F-actin并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的形态变化;采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验。 结果: 第一部分:AngII和PDGF-BB呈浓度依赖性诱导VSMCs的HSP27磷酸化,使VSMCs内F-actin数量明显增加,纵向平行排列,形成应力纤维丝,并促进细胞迁移。AngII(10-7mol/L)和PDGF-BB(30ng/ml)诱导后VSMCs的HSP27磷酸化水平在30分钟达高峰。AngII和PDGF-BB均能诱导VSMCs的HSP27磷酸化,作用峰值浓度分别为10-5mol/L和100 ng/ml,分别较对照组增高338.9%和159.1%(P<0.01)。HSP选择性阻断剂槲皮素以浓度依赖性方式抑制AngII和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化,最大抑制率分别为71.7%和66.7%(P<0.01),对PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化的最大抑制率分别为85.0%、55.3%和41.0%(P<0.01),对PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为55.3%、55.6%和38.

Such metastases are referred to as oligometastases. Local therapy, such as surgical resection and radiotherapy, has been suggested to be the first-line treatment of choice foroligometastatic recurrence; and(3) While locoregional recurrence is likely to cause troublesome symptoms, it is a potentially limited

disease. Therefore, providing local control is important, and radiation is usually beneficial for treating local recurrence. In order to obtain better control of the disease and provide treatment with curative intent in patients with limited disease, the administration of concurrent platinum-based chemoradiotherapy is recommended according to the results of originally nonresectable stage ⅢA and ⅢB disease.
目的探讨儿童炎症性肌纤维母细胞性肿瘤(IMT)的临床特点、病理组织学特征及鉴别诊断。方法回顾性分析2006~2014年15例儿童IMT的临床资料,进行组织形态学分析及免疫表型检测。结果15例IMT术后随访时间为3~60个月,其中10例无瘤生存,3例术后半年到1年内复发,1例发生恶变。1例失访。免疫组化结果:梭形细胞胞质内波形蛋白、平滑肌肌动蛋白、肌特异性肌动蛋白、结蛋白阳性率分别为100%(15/15)、87%(13/15)、80%(12/15)、47%(7/15);间变型淋巴瘤激酶阳性率为40%(6/15);Ki-67阳性超过15%1例,Ki-67阳性10%2例,Ki-67阳性小于5%12例。CD117、S-100、CD34(内皮细胞标记)、肌调节蛋白、肌浆蛋白、肌红蛋白均为阴性。结论儿童IMT是具有恶变倾向的间叶性肿瘤,具有一定的复发率。手术彻底切除仍为目前首选的治疗方法,放疗和化疗的作用有待进一步探讨。
Head

selleck产品 KRX 0401 and neck squamous cell carcinoma is the sixth most common cancer in the world with approximately650000 new cases diagnosed annually.Next-generation molecular techniques and results from phase 2 of the Cancer Genome Atlas becoming available have drastically improved our current knowledge on the genetics basis of head and neck squamous cell carcinoma.New insights and new perspectives on the mutational landscape implicated in head and neck squamous cell carcinoma provide improved tools for prognostication.More importantly,depend on the patient’s tumor

subtypes and prognosis,deescalated or more aggressive therapy maybe chosen to achieve greater potency while minimizing the toxicity of therapy.This paper aims to review our current 也许 knowledge on the genetic mutations and altered molecular pathways in head and neck squamous cell carcinoma.Some of the most common mutations in head and neck squamous cell carcinoma reported by the cancer genome atlas including TP53,NOTCH1,Rb,CDKN2 A,Ras,PIK3 CA and EGFR are described here.Additionally,the emerging role of epigenetics and the role of human papilloma virus in head and neck squamous cell carcinoma are also discussed in this review.The molecular pathways,clinical applications,actionable molecular targets and potential therapeutic strategies are highlighted and discussed in details.
目的观察吉西他滨或长春瑞滨联合顺铂一线治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的近期疗效及毒副反应。方法回顾性分析我院自2011年8月1日~2014年1月31日期间应用吉西他滨或长春瑞滨联合顺铂一线治疗晚期转移性NSCLC近期疗效及毒副反应。结果共计72例患者纳入统计,34例接受吉西他滨联合顺铂化疗(GP组),38例接受长春瑞滨联合顺铂化疗(NP组),两组患者间一般情况的差异均无统计学意义(P>0.05)。GP方案一线治疗晚期转移性NSCLC有效率略高于NP方案(GP组38.24%比NP组34.21%,χ2=0.126,P=0.723)。两组主要毒副反应为化疗后骨髓抑制(GP组44.12%比NP组39.47%,χ2=0.159,P=0.690)、恶心呕吐(GP组20.59%比NP组23.68%,χ2=0.002,P=0.

海马神经元形态学的改变 电镜下观察各组大鼠各时间点海马CA1区和CA3区神经元超微结构的变化:生理盐水对照组大鼠海马CA1区和CA3区神经元结构正常。槐定碱致痫组,致痫0.5h海马CA1区和CA3区神经元核膜双层结构尚清楚,细胞核出现固缩,线粒体内膜部分损伤,嵴断裂,致痫1.5h核膜双层结构破坏,神经细胞核严重固缩,染色质颗粒状聚集,线粒体肿胀,嵴断裂或消失,毛细血管内皮细胞核固缩,致痫后5.0h、8.0h损伤仍很重。苯巴比妥钠﹢槐定碱组少部分神经细胞核轻度固缩,损伤程度较槐定碱致痫组轻。PD98059﹢槐定碱组大部分神经元结构正常,个别神经细胞核轻度固缩,损伤程度比槐定碱致痫组和苯巴比妥钠﹢槐定碱组轻。

4.细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)免疫组化染色结果 生理盐水对照组大鼠海马CA1区和CA3区有少量的ERK1和ERK2表达,p-ERK1/2仅在胞浆内表达弱阳性,致痫0.5h p-ERK1/2表达迅速增强,在神经元的胞核胞浆内都有表达,与生理盐水对照组比较ERK1和ERK2阳性神经元数量明显增多(P﹤0.05),ERK1主要表达在胞核胞浆内,ERK2主要表达在胞浆内,在致痫1.5 selleck compound h时该三种蛋白阳性细胞数量达到最高值,5.0h时阳性神经元数量回降,8.0h继续回降,但仍高于生理盐水对照组。苯巴比妥钠﹢槐定碱组阳性细胞数量明显低于槐定碱致痫组相应时间点(P﹤0.05),PD98059﹢槐定碱组显著抑制ERK表达,阳性神经元数量低于槐定碱致痫组和苯巴比妥钠﹢槐定碱组(P﹤0.05)。 5.细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)Western blot结果 经光密度定量分析显示:生理盐水对照组大鼠海马表达少量的ERK1和ERK2,而p-ERK1/2蛋白含量更少,致痫0.5h该三种蛋白含量开始升高,1.5h蛋白含量达到最高值,5.0h后逐渐回降,三种蛋白表达趋势与免疫组化染色结果一致。槐定碱致痫组与生理盐水对照组相应时间点比较蛋白含量显著增高(P﹤0.05),苯巴比妥钠﹢槐定碱组蛋白含量明显低于槐定碱致痫组,PDPD98059﹢槐定碱组与槐定碱致痫组和苯巴比妥钠﹢槐定碱组比较三种蛋白含量明显降低。

Rapamycin数据表 结论 1.槐定碱致痫大鼠模型可以很好的复制人类的癫痫发作,具有癫痫发作的行为学和电生理学特征。 2.槐定碱致痫后诱发了大鼠海马细胞内ERK通路的激活,该通路可能参与了癫痫发作后大鼠海马组织的痫性损害。 3.大鼠侧脑室注射PD98059可对癫痫发作引起在体海马神经细胞的损害产生部分保护性作用。
目的:研究MAPKS信号传导通路在高温致金黄地鼠神经管畸形中的表达及其意义研究。方法:选取健康成熟的金黄地鼠,通过孕第8天下午15-16时进行水浴其腹部(水温42℃,时间20分钟)建立高温致神经管畸形的动物模型。肉眼及解剖显微镜下观察胚鼠的畸形情况。应用免疫组织化学的方法检测MAPKS信号传导通路中的P-ERK1/2.P-JNK1/2,P-P38在胚鼠的不同发育阶段,内介膜、神经管上皮、脊索与神经管周围的间质中表达量的变化。并分析3个磷酸化蛋白的功能。在高温导致神经管中所起的作用。结果:在高沮处理后的各期胚胎的上述结构中,P-ERK1/2、P-JNK1/2、P-P38的免疫组织化学染色均明显减弱,不同发育阶段及不同结构的着色强度也不同,特别是P-JNK,对照组中9、10、11的阳性率分别为95%、55%、20%,而实验组中P-JNK的阳性率分别为52%、24%、6%,两组比较,在第9、10天,P-JNK的阳性表达率有统计学意义,说明.P-JNK1/2,

17-AAG分子重量 P-ERK1/2,P-P38在高温致神经管崎形中有重要作用,特别是JNK的表达意义更大。结论:MAPK信号传导系统对高温导致的神经管畸形中有一定促进作用。
目的:观察磷脂酶C(Phospholipase C)蛋白在急性肺损伤(Acute Lung Injury, ALI)过程及异丙酚预处理后大鼠脑组织中的动态变化,从信号转导水平进一步阐明ALI致多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的发病机制。方法:48只健康雄性Wistar大鼠随机分为:实验组(OA组,32只)从尾静脉缓慢注射油酸(oleic acid,OA)0.2ml/kg,再以30min、60min、90min、120min为观测时点等分为4组;预处理组(P组,8只),经左颈静脉输注1%异丙酚(propofol)80mg/kg/h,30min后给药同OA组,观察90min;对照组(C组,8只),尾静脉注射生理盐水0.2ml/kg。检测各组大鼠呼吸频率(RF)、心率(HR)、血气(pH、PaO2、PaCO2)、平均动脉血压(MABP)、免疫印迹法检测各组大鼠脑组织中PLC蛋白含量。检测血浆及脑组织MDA、LDH、CK及各组大鼠脑组织形态学结构的改变。结果:呼吸频率OA组较C组明显加快(P<0.01),但仍高于C组(P<0.01),但P组高于OA90min组(P<0.05或0.01),P组低于OA90min组(P<0.01)。脑组织PLC蛋白含量OA30min、60min、90min、120min组及P组分别较C组的(0.62±0.05)升高至(0.67±0.07)、(1.18±0.08)、(1.25±0.09)、(1.39±0.06)、(0.98±0.09)差异均有统计学意义(P<0.01),P组与OA90min组比较,脑组织的PLC含量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。脑组织MDA含量、LDH活性OA各组均较C组升高(P<0.05或0.01),P组较OA90min组则明显减低(P<0.01)。脑组织CK活性OA60min组达到峰值(P<0.01)后下降,P组较C组显著降低(P<0.01),与OA90min组比,P组有所降低具有统计学差异(P<0.

High-frequency stimulation(HFS) of the sciatic nerve,which triggers long-term potentiation(LTP) of C-fiber-evoked field p…
目的:慢性气道炎症是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的重要病理特征之一。有研究发现Wnt/β-catenin信号通路在急性肠炎、肥胖和风湿性关节炎等炎症性疾病中发挥重要作用,而Wnt/β-catenin信号通路是否参与调节香烟诱导的气道炎症目前还不清楚。本研究采用化学激动剂和si

RNA干扰等手段探究Wnt/β-catenin信号通路在香烟提取物(CSE)诱导的炎症细胞模型中的可能调节机制。方法:采用2%的CSE刺激人气道上皮细胞(16HBE)24h,并分别予以10μM Wnt通路激活剂SB216763和50n Mβ-catenin si RNA预处理,采用realtime-PCR、Western…
目的探讨GSK-3在失代偿乙肝肝硬化患者由LPS介导的炎症反应中的作用。方法研究对象为乙肝肝硬化失代偿期合并腹膜炎30例、乙肝肝硬化失代偿期30例、乙肝肝硬化代偿期10例、慢性乙肝15例,正常自愿者10例,分为空白组、LPS组、SB216763组、SB216763+LPS组四个实验组,采集外周血PBMCs,收集PBMCs细胞培养上清液,采用ELISA对上清液的TNF-α与IL-10表达水平进行检
Background&Aims I-BET-762购买 Endoplasmic reticulum stress(ER stress)has been increasingly recognized as an important mechanism in various

liver diseases.However,its intrinsic physiological role in acute liver failure(ALF)remains largely undetermined.This study aimed to examine how ER stress orchestrates glyco…
目的:探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)抑制剂对实验性小鼠根尖周病变中炎症反应和骨吸收的作用。方法:四十八只雄性C57BL/6小鼠被随机分成实验组(SB216763处理组,TDZD-8处理组,氯化锂处理组)和对照组(DMSO处理组),在全麻下用球钻打开下颌第一磨牙,实验组及对照组从术前一天给予腹腔注射SB216763(10 mg/kg),TDZD-8(1mg/kg),LiCL(100 mg/kg)和DMSO,每两天注射一次,直到28天处死。提取血清做ELISA检测,然后取出含有下颌第一磨牙的下颌骨,一部分提取RNA做Realtime PCR检测;另一部分拍摄X线,Miero-CT分析下颌…
目的探讨GSK3在吸烟诱导的气道上皮细胞鳞状分化中的作用。方法使用细胞毒性实验和形态学观察香烟成分处理后猪气道上皮细胞的增殖和形态学改变,Western 许多 blot检测香烟成分处理后鳞状分化标记物外皮蛋白(involucrin)、GSK3 和抑制性磷酸化GSK3 α/β的表达以及GSK3的抑制剂SB216763处理后外皮蛋白的表达变化;用免疫细胞荧光检测GSK3在培养的猪气道上皮细胞中的表达;用基于ELISA技术的转录因子活性检测方法分析香烟成分和GSK3抑制剂处理后转录因子AP-1 与外皮蛋白基因上游调节区域的结合活性。结果细胞毒性实验和形态学观察显示香烟烟雾提取物和尼古丁处理可抑制猪气道上皮…
Background/Aims:Serine-threonine

获悉更多 protein kinase glycogen synthase kinase (GSK)-3 is involved in regulation of many cell functions,but its role in regulation of liver regeneration is unknown. Here we investigated the effects of GSK-3β inhibition on liver regeneration after partial hepatectomy in t…
目的:研究粉防己碱(TET)诱导细胞周期阻滞的分子机制及信号调节通路。方法:在结肠癌细胞 HT-29及 HCT-116中以不同剂量 TET 作用6-18h,以 Western Blot 检测 EGFR、PKC-δ、 mdm2、NF-κB、p-AKT、p27等蛋白表达变化,加用 GSK-3β阻滞剂 LiCl 及 SB216763后检测 Cyclin D1及 p27蛋白表达变化,流式细胞术检测细胞 DNA 含量并观察细胞形态变化。结果: Western Blot 检测蛋白表达变化,30μM 的 TET 作用 HT-29和 HCT-116细胞8h 后,EGFR、mdm2、 NF-κB、cyclin …
In this study,we investigated the role of the glycogen synthase kinase-β(GSK-3β)in glioma migration and invasion.In wound healing assay,administration of lithium chloride(LiC1)and SB216763,inhibitors of GSK-3, slowed down the recovery of scraped glioma cell lines U87 and U251.Similarly,decreased …