2%）高，差异有统计学意义（χ2=4.327，P=0.038）。TNM Ⅲ期和Ⅳ期阳性率（84.2%）要高于Ⅰ期和Ⅱ期阳性率（45.1%），差异有统计学意义（χ2=7.484，P=0.006）。c-myc的表达与性别、年龄、吸烟、肿瘤大小、肿瘤位置、胸腔积液无明显关系（P>0.05）。 3.2caspase-8在NSCLC中的表达及其与临床病理特征的关系 caspase-8在NSCLC中细胞核和（或）细胞质中经免疫组化被染成棕黄色，肺癌组织50例，阳性率为62.0%(31/50)，正常肺组织20例，阳性率为65%(13/20)，两者差异无统计学意义（χ2=0.055，P=0.814）。淋巴结转移阳性率（79.2%）较无淋巴结转移者阳性率（46.2%）高，差异有统计学意义（χ2=5.773，P=0.016）。TNM Ⅲ期和Ⅳ期阳性率（84.2%）要高于Ⅰ期和Ⅱ期阳性率（48.4%），差异有统计学意义（χ2=6.417，P=0.011）。caspase-8在NSCLC中的表达与性别、年龄、病理类型、高中低分化、吸烟、肿瘤大小、肿瘤位置、胸腔积液无明显关系（P>0.05）。

3.3NSCLC组织中c-myc与caspase-8表达的关联性分析 c-myc为原癌基因，参与细胞凋亡，caspase-8为参与细胞凋亡蛋白，和其他凋亡相关基因共同介导着肺癌细胞凋亡。实验结果示NSCLC组织中，c-myc阳性30例，caspase-8阳性31例，两者共同表达阳性19例，c-myc阴性20例，caspase-8阴性19例，两者共同表达阴性8例，应用配对资料的相关性分析示，两种因子间无明显相关性（r=0.034，P=0.812）。 时间 3.4ｃ-myc、caspase-8与凋亡之间的关系 c-myc与细胞凋亡呈负相关(r=-0.784，P=0.000)，caspase-8与细胞凋亡呈正相关(r=0.885，P=0.000)。 4结论 1．c-myc与NSCLC的发生、进展、临床分期、恶性程度关系密切。 可能 2．caspase-8与NSCLC的发展关系密切，可能预测淋巴结转移。 3．下调或抑制该c-myc可能抑制NSCLC的发生进展；修复caspase-8蛋白的基因表达有望抑制NSCLC的进展。
目的：通过观察养阴益肺方联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌对近期疗效、免疫功能的影响、毒副反应及安全性评价,为中医中药干预及中西医互补治疗晚期非小细胞肺癌提供有力的理论支持和临床指导。 方法：本研究采用单盲随机对照的原则,将59例符合临床研究标准的病例随机分为两组,其中治疗组30例,对照组29例。治疗方法：对照组单纯化疗,化疗方案：非鳞癌予PP方案、鳞癌予TC方案,21天为一周期,化疗2周期；治疗组在化疗基础上加用养阴益肺方,化疗方案同对照组,并随证加减,2周期后比较两组近期客观疗效、临床症状、体重、KPS、QOL、血清相关指标及毒性的变化。

结果： 1、在近期客观疗效、降低血清肿瘤标志物方面,治疗组较对照组未显示出明显优势(P>0.05)； 2、在症状改善,尤其在咳嗽、乏力、自汗、午后潮热、口干舌燥症状改善方面,治疗组优于对照组(P0.05)。 结论：养阴益肺方联合化疗可有效改善晚期非小细胞肺癌患者临床症状、降低毒副反应、提高患者生活质量,为晚期非小细胞肺癌肺癌提供了有效的治疗方药与治疗方案。
目的：本课题采用前瞻性研究方法,在中西医理论的指导下,对晚期原发性非小细胞肺腺癌PP方案化疗前后中医证候特征演变进行深入、细致的研究,以探讨PP方案化疗对晚期非小细胞肺腺癌中医证候变化的影响,并提出“中医药早期干预治疗”的思路,为选择PP化疗方案时中医药减毒增效的最佳时机和理法方药提供重要的临床理论基础,予中医药早期干预以防止PP方案化疗所致不良反应,使中西医两种医学能够更有机地结合起来,以提高晚期非小细胞肺癌的临床疗效。 方法：采用前瞻性研究方法,选择80例于2013年3月至2014年1月期间在江苏省中医院肿瘤科及江苏省肿瘤医院中医科住院的病人,研究对象为晚期原发性非小细胞肺癌,研究非小细胞肺腺癌经PP方案化疗后证候的变化,从中找出规律。

selleckchem 结果：晚期非小细胞肺腺癌患者在PP方案化疗前与化疗后证候分布有显著差异,而化疗后8天与化疗后15天的证候分布无显著差异。痰湿证及气虚证在疗前分别占40%和25%,化疗后第8天构成比降低,分别占12.5%及15%,而气阴两虚证及气滞血瘀证较化疗前的构成比明显增多,疗前分别占10%及7.5%,疗后8d分别占27.5%和25%。 结论：结果显示PP方案化疗前后中医证候变化有规律可循,化疗前以气虚证及痰湿证为主,化疗后以气阴两虚证及气滞血瘀证为主,研究表明考虑PP化疗方案能够耗伤气血津液,而使气阴两虚,气虚而使血行不畅,而成气滞血瘀证。
目的：初步总结本地区肺癌患者的疾病特点,系统性分析并传承导师章永红教授治疗肺癌的经验,以期进一步提高中医治疗肺癌的疗效。 方法：以章永红教授近四年来诊治的肺癌患者病案为基础,对其进行全面的整理,严格按照纳入标准和排除标准进行筛选,共得到符合条件的初诊患者病案205例,录入至Epidate章永红教授肺癌门诊系统,建立肺癌患者数据库,按照既定规范进行数据预处理,使用频数分析、关联规则、因子分析等计算机数据挖掘技术分析患者总体特征以及章教授治疗不同特点患者的用药经验。结合临床实际情况及章教授本人意见,对挖掘结果进行分析、总结与归纳,以期获得系统的章教授治疗肺癌经验。 结果：205例患者中男性115例,女性90例,平均年龄60.

01),较12h显著升高(P<0.05)；NF-κB与DNA的结合率也随PCV2作用时间延长逐渐升高,24h时极显著高于0h和6h(P<0.01),较12h显著升高；p-IκBα蛋白的含量,在PCV2作用24h时达到最高,并且极显著高于Oh、6h和12h(P0.05)外,其余组之间两两差异均显著；p-P38蛋白含量,在PCV2作用6h时有所下降,12h和24h上升,并在24h显著高于6h(P0.05)。结果表明,PCV2能通过激活仔猪淋巴细胞中NF-κB信号,从而对相关炎性细胞因子进行调控。
目的：探讨iRGD（immobilized RGD）肽对超顺磁性氧化铁（Superparamagnetic Iron Oxide，SPIO）标记人胰腺癌细胞的影响，通过磁共振扫描，分析其最佳和较适宜的标记浓度及范围。 材料和方法：(1)实验主要研究对象为人胰腺癌细胞株（PANC-1，Pancreas ductal epithelial cancer），其特点是分化程度低，良好的细胞主动；（2）按照SPIO浓度不同（铁离子浓度：8.4μg/ml, 12.6μg/ml, 14.7μg/ml,16.8μg/ml, 21μg/ml）分为5个系列，每个系列内以SPIO-PLL和SPIO作为对照，其余按照iRGD肽浓度不同（肽浓度：0.25μg/ml, http://www.selleckchem.cn/products/PD-0325901.html 0.5μg/ml,0.75μg/ml, 1μg/ml, 1.25μg/ml）分为5个组进行标记，待细胞长至对数期，按照SPIO浓度的不同依次标记人胰腺癌细胞（PANC-1），标记时将iRGD肽同SPIO一并加入，上述系列重复3次。按照相同的细胞数量，留3个孔，不加SPIO及iRGD，作为空白对照组。将标记后的细胞制成标本进行MR（3.0T）扫描，扫描序列包括T2WI-

FRFSE、T2-W PROPELLER及T2*MAPPING序列，通过计算T2WI-FRFSE及T2-W PROPELLER图像上、不同浓度下各标本相对于同系列下SPIO对照组信号强度衰减差值（△S）并进行统计学分析，得出最佳的SPIO及iRGD浓度配比；测量T2*MAPPING序列上T2*及各SPIO浓度系列不同iRGD肽浓度样本相对于同SPIO系列SPIO对照组T2*值变化值（△T2*），并分析；(3)计算分析各不同SPIO浓度系列不同iRGD肽浓度标本相对于PBS空白组的信号衰减值（△S′），找出各SPIO浓度系列下，适宜的iRGD肽浓度范围；（4）以适宜浓度的SPIO及iRGD肽标记细胞，将标记好的细胞进行：a、普鲁士蓝染色，显微镜下观察细胞内的铁沉积情况并照相，计算细胞标记阳性率；b、原子吸收光谱进行铁定量检测，并与SPIO对照组比较。（5）计算适宜SPIO浓度和iRGD浓度组在T2WI-FRFSE序列及T2-WPROPELLER序列上的平均信号变化率(S-SSPIO/

抑制剂 Library制造商 SSPIO×100%)。（6）将适宜标记组与SPIO-PLL对照组△S进行比较分析（。7）SPIO浓度为21μg/ml时，按5种不同iRGD肽浓度培养细胞，进行台盼蓝染色，测定细胞活力。细胞活力(% ) = (细胞总数-着色细胞数)÷细胞总数×100%。 结果：（1）不同浓度SPIO（铁离子浓度：8.4μg/ml, 12.6μg/ml, 14.7μg/ml,16.8μg/ml, 21μg/ml）标记人胰腺癌细胞，T2WI-FRFSEMR图像上：在SPIO浓度为8.4μg/ml，随着iRGD肽浓度的升高，各样本信号强度逐渐减低，各样本相对于SPIO对照组信号强度△S变化呈“逐渐升高”的趋势；在SPIO浓度为12.6μg/ml时，各样本信号强度先减低后升高，各样本相对于SPIO对照组信号强度△S变化呈“先升高后减低”；而SPIO浓度为14.7μg/ml、16.8μg/ml浓度时，各iRGD肽浓度样本信号强度逐渐升高，各样本相对于SPIO对照组信号强度△S变化呈“逐渐减低”趋势；在SPIO浓度为21μg/ml浓度时，各样本信号强度无一定规律，各样本相对于SPIO对照组信号强度△S变化呈“波浪状”改变，且均为负值；在SPIO和iRGD肽浓度分别为12.6μg/ml和1μg/ml时，样本MR信号强度最低，其△S最大，为243.89±89.1。在T2-W

Selumetinib数据表 PROPELLER图像上，各标本扫描图像中，靠中间位置的信号较低，各SPIO浓度系列下不同iRGD肽浓度各样本相对于同系列SPIO对照组△S变化无规律性，部分呈“波浪状”改变，但在SPIO和iRGD肽浓度分别为14.7μg/ml和0.5μg/ml时，样本信号强度最低，其△S最大，为393.88±86.19。T2 *MAPPING序列上，所测T2*值在不同SPIO浓度系列下，随iRGD肽浓度不同，各SPIO浓度系列上各样本的△T2*变化和T2WI-FRFSE序列上相似，在SPIO和iRGD肽浓度分别为12.6μg/ml和1μg/ml时，其△T2*为9.43±7.13，位于所有△T2*曲线的最高点。（2）SPIO浓度为8.4μg/ml，各iRGD浓度样本的△S′，与SPIO对照组样本△S′（604.79±58.64）比较无统计学意义（P＞0.05）；SPIO浓度为12.6μg/ml时，各iRGD浓度样本的△S′，均较SPIO对照组样本△S′（313.03±56.9）大，差异具有统计学意义（P＜0.05）；SPIO浓度为14.7μg/ml时，iRGD浓度为0.25μg/ml时样本△S′为720.92±92.75，较SPIO对照组样本△S′（510.5±73.47）大，具有统计学差异（P＜0.05）；SPIO浓度为16.8μg/ml及21μg/ml，各iRGD肽浓度样本的△S′，较同系列SPIO对照组样本△S′比较，前者无统计学差异（P＞0.05），而后者具有统计学意义（P＜0.05）。（3）SPIO浓度为12.6μg/ml和iRGD肽1μg/ml时，显微镜下观察，细胞均呈“菱形”及“类椭圆形”，经普鲁士蓝染色可见点状、小颗粒状及小片状蓝染颗粒，多位于细胞质内，少数位于细胞核，细胞标记阳性率约为82.9%。；原子吸收光谱检测结果示每个细胞内含铁量约为13.2pg；而SPIO同SPIO浓度系列下的SPIO对照组细胞阳性标记率为59.9%，每个细胞内含铁量为0.94pg。（4）适宜浓度的SPIO及iRGD肽组在T2WI-FRFSE序列上的平均信号变化率分别为21.07%、22.81%、23.09%、24.66%、24.2%；在T2-W PROPELLER图像上的平均信号变化率分别为20.91%、20.8%、22.79%、21.93%、21.26%，前者的平均信号变化率较后者好。（5）SPIO浓度为8.4μg/ml, 12.6μg/ml, 14.7μg/ml,16.

05)。 结论：小胶质细胞作为脑内重要的抗原提呈细胞(APC)，在HSV1感染后被大量激活、增殖，细胞表面MHC抗原表达增加，发挥抗原提呈作用，CD40表达增加，有助于淋巴细胞通过血脑屏障和活化，并进一步激活小胶质细胞，分泌大量细胞因子，TH1及TH2型细胞因子反应在HSE中均起重要作用，并相互协调和制约，过氧化反应也是HSE的一个重要方面。 第二部分单纯疱疹病毒性脑炎免疫炎性机制研究 目的：以小胶质细胞系BV2作为小鼠单纯疱疹病毒性脑炎的替代研究对象，了解小胶质细胞激活并分泌细胞因子的刺激信号，及细胞因子分泌的细胞内信号途径。 方法：MTT选择合适的细胞上药物稀释浓度，RT-PCR法检查细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、iNOS)mRNA含量。小鼠颅内注射HSV1(10~(-3)／0.1ml)制造小鼠单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型，与接种HSV1病毒(10~(-2)／0.1ml)的小胶质细胞系BV2细胞比较接种病毒前后以及用药前后细胞表面抗原表达及细胞因子mRNA含量改变。Western 没有 blot检测HSV1感染前后细胞JNK MAPK表达情况，及RT-PCR法检测ERK

MAPK和P38 MAPK的抑制剂作用前后细胞因子表达变化及预后改变。

结果：BV2细胞具有和Balb／c小鼠脑组织相似的免疫反应特性。JNK Selleck CI994 MAPK在病毒感染后激活，ERK MAPK和P38 MAPK的抑制剂PD98059和SB203580均可改善BV2细胞在HSV1感染后的生存率，并可减少TNF mRNA表达；阿司匹林和地塞米松均可减少iNOS mRNA表达。 结论：BV2细胞可作为小鼠单纯疱疹病毒性脑炎的替代研究对象。3条MAPK的主要途径(JNK，ERK和P38 MAPK)在HSE的免疫反应中均发挥作用，ERK和P38 MAPK参与HSV1感染后细胞TNF mRNA表达，TNF的表达认为与病毒感染造成细胞死亡有关。阿司匹林和地塞米松可能具有减少组织过氧化损伤的潜在神经保护作用。 第三部分 临床用药对单纯疱疹病毒性脑炎疗效研究 目的：了解几种临床常用药物对HSE预后及细胞因子分泌的影响。 方法：小鼠颅内注射HSV1(10~(-3)／0.1ml)制造小鼠单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型，BV2细胞直接接种病毒作为细胞模型，根据MTT结果选用合适的细胞药物浓度及了解细胞生存率，RT-PCR法检测小鼠脑内细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、iNOS)mRNA表达，流式细胞术检测小胶质细胞表面CD11b、CD40、MHCⅠ、MHCⅡ抗原表达，比较在病毒感染后和几种药物作用后小鼠脑组织和BV2细胞生存率、免疫抗原表达和细胞因子表达差异。 结果：黄芪、干扰素和脑多肽可显著改善BV2细胞和模型小鼠在HSV1感染后的生存率，同时各种细胞因子表达降低(T_(H1)／T_H型细胞因子)；阿司匹林、菲克维兹和地塞米松不能改善HSV1感染后的生存率，各种细胞因子分泌仍明显偏高，以地塞米松明显；药物作用后脑组织免疫抗原CD11b、CD40、MHCⅠ、MHCⅡ变化各异。

结论：HSV1感染的初期，提高机体抗病毒免疫能力是治疗的主要方向，具有免疫抑制的药物如阿司匹林、地塞米松由于不能抑制病毒复制反而造成晚期的细胞因子表达显著增高，免疫损伤更严重，应避免使用；在HSV1感染晚期病毒复制控制的情况下，可适当选用具有免疫抑制作用的药物。不同神经营养剂的免疫调节作用不同。 第四部分单纯疱疹病毒性脑炎治疗中的预后评估及用药指导 目的：找到可通过检测的细胞因子指导HSE感染后的预后评估及用药方案制定的有效工具。 http://www.selleckchem.cn/products/ipi-145-ink1197.html 方法：RT-PCR方法检测在多种实验药物及条件下BV2细胞表达细胞因子mRNA含量，MTT检测细胞存活率。将得到的以上数据进行相关及回归分析以得到一元线性回归方程，通过此方程得到BV2细胞的预后估计值。以2nsoftEditor神经网络建模工具软件作为神经网络软件工具，神经网络通过前38组训练集进行训练后，将剩下的23组数据作为盲法测试集，代入已经训练好的神经网络，得到相应的预后估计值。将以上2种方法得到的预后分析结果与实际生存率比较，以计算值与实测值之间误差在15％为标准，15％以内为符合，＞15％为不符。了解2种不同方法对HSE感染预后分析的符合率。 结果：对61组数据进行相关性分析，得到相关系数，同时作实际细胞生存率与各细胞因子关系散点图，发现与生存率相关性最好的参数是TNF-α，IL-23，IL-4，而其中以TNF-α和IL-23较优。但它们之间的关系也并非纯粹的线性关系，或多或少存在一定的非线性关系。回归分析得到的一元线性回归方程为SR=0.184+0.043×(IL-2)-0.013×(IL-4)-0.016×(IL-10)-0.022×P19—0.018×TNF-0.

OGD was achieved by exposingthe cells to glucose-free DMEM and placing the 2 Methoxyestradiol cells in an anaerobic chamber flushed with 5% CO_2and 95% N_2 (v/v) at 37 ℃ for 1 hour.MAIN OUTCOME MEASURES: TTC staining

was used to measure infarct volume 7 days afterphotothrombotic stroke. Cell viability was evaluated using the MTT kit. Opening of the mitochondrialpermeability transition pore, intracellular concentration of superoxide anion, and calcium after OGDwere detected with fluorescence intensity of calcein-AM, hydroethidine, and fluo-3/AM.RESULTS: At 7 days after stroke, total infarct volume and cortical infarct volume were significantlygreater in the APP/PS1 transgenic mice compared with the wildtype littermates mice (P < 0.01). Aβ,OGD, and

Aβ + OGD significantly decreased cell viability and increased fluorescence intensity ofhydroethidine and fluo-3/AM (P < 0.01 许多 ). Compared with the Aβ or OGD group, Aβ + OGDsignificantly decreased cell viability (P < 0.01) and significantly increased fluorescence intensity ofcalcein-AM, hydroethidine, and fluo-3/AM (P < 0.01 or P < 0.05).CONCLUSION: The APP/PS1 double-transgenic mice were more vulnerable to ischemia. Thepossible mechanisms included enhanced opening of the mitochondrial permeability transition pore,overproduction of superoxide anion due to pore opening, and disturbed calcium homeostasisinduced by excess superoxide anion.
目的:探讨GSK3β在失代偿期肝硬化患者中感染早期炎症因子过表达中的作用及其机制。方法:分离失代偿期肝硬化患者与对照组的PBMCs,给予/不给予GSK3β抑制剂SB216763,同时使用LPS刺激,使用ELISA检测细胞上清液TNF-α、IL-6、IL-12的含量,使用Western blot检测细胞裂解液中p-GSK3β的表达情况。结果:LPS刺激肝硬化组PBMCs之后,可以产生过量的前炎症因子如TNF-α、IL-6、IL-12。GSK3β抑制剂SB216763抑制肝硬化组PBMCs的IL-12、TNF-α、IL-6的产生;LPS刺激肝硬化组患者PBMCs、GSK3β的磷酸化程度较对照组明显减低。结论:肝硬化患者PBMCs在LPS的刺激下,可以产生过量的前炎症因子如TNF-α、IL-6、IL-12,这是由于肝硬化患者中GSKβ的磷酸化减低,进而导致其活性增强而造成的;同时,肝硬化患者炎症细胞因子的过量产生,仍然可以被GSK3β的抑制剂所抑制。
目的探讨GSK-3β对小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)成熟和功能的调控作用。方法脂多糖催熟BMDC,Western 购买Ponatinib blotting检测刺激前后糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化水平的改变;利用GSK-3β的选择性抑制剂SB216763处理BMDC,检测表型、细胞因子表达和混合淋巴反应(MLR)的变化情况;构建过表达小鼠GSK-3β的慢病毒载体并转染DC2.4细胞,Western blotting检测过表达GSK-3β对调控树突状细胞(DC)成熟的关键调控因子鸟的网状内皮组织增生病毒癌基因相关B(Rel B)蛋白水平的影响。结果经脂多糖处理后,GSK-3βY216磷酸化水平下调,Ser9磷酸化水平显著上调,表明GSK-3β的活性显著下降。抑制GSK-3β的活性能上调DC表面共刺激分子CD40和CD86的表达,削弱脂多糖诱导的促炎细胞因子IL-6和IL-12表达上调,而对抗炎细胞因子IL-10的表达有促进作用,同时降低脂多糖诱导成熟的DC刺激同种异基因T细胞增殖的能力。在未成熟的DC2.4细胞中,过表达GSK-3β能够下调Rel

B的水平。结论 GSK-3β参与调控DC的成熟和功能,高活性的GSK-3β抑制未成熟树突状细胞(i DC)的自发性成熟,GSK-3β失活后促进DC表型的成熟,而在脂多糖诱导DC分化的过程中GSK-3β发挥促炎作用。GSK-3β能够下调Rel B的蛋白水平,有望成为构建新型耐受性DC的新靶点。
Pancreatic cancer is the fourth most common cause of cancer deaths worldwide. Although recent therapeutic developments for patients with pancreatic cancer have provided survival benefits, the outcomes for patients with pancreatic cancer remain unsatisfactory. Molecularly targeted cancer therapy has advanced in the past decade with the use of a number of pathways as candidates of therapeutic targets.

2mV且持续30分钟为手术成功标准。Sham组手术过程同AMI组,但缝线穿过冠状动脉不结扎。各组大鼠于实验终点采取静脉血5毫升,行血流动力学检查后取出心脏行病理学检查并分离非梗死区心肌低温保存。结果显示:(1)AMI组肉眼直视下观察结扎线以下阻断部位心肌颜色由鲜红变为暗紫色,搏动减弱;(2)I、avL导联心电图ST段抬高大于0.2mV,持续30分钟。(3)左室重量指数3天即有增加并持续增加至4周。(4)AMI组术后4小时病理学检查即可见到梗死区心肌水肿明显,细胞界限不清,心肌细胞出现颗粒变性、空泡变性胞浆疏松透明,部分细胞出现坏死,核消失,心肌纤维成波浪状改变。心肌间质水肿出血,有较多中性粒细胞和红细胞浸润。(5)血流动力学测定显示AMI组4小时后LVEDP即持续升高至4周,LVSP、±dp/dt

max 4周内持续下降。Sham组以上指标均无明显变化。 二、AMI后MMP-9mRNA表达与心室重构关系的研究 取大鼠AMI后非梗死区心肌行RT-PCR,观察MMP-9mRNA变化规律,研究MMP-9与心功能及左室重量指数之间的的关系。结果显示:(1)AMI组MMP-9mRNA表达4小时与Sham组无显著性差异,12小时即有明显升高,1周达高峰并在此水平持续至4周。(2)AMI组MMP-9mRNA与LVEDP成正相关(r=0.831,P
背景动脉粥样硬化性疾病的一、二级预防已经使缺血性心脏病事件的发生率显著下降。但是缺血性心脏病依然是大多数发达国家最主要的死亡病因之一。为了进一步减少急性缺血性心脏病事件的发生率,人们仍在寻找各种更为有效的治疗方案。促红细胞生成素(erythropoietin, selleck screening library Epo)是由165个氨基酸组成并折叠成4个α螺旋的糖蛋白。属于I型细胞因子超家族,分子量约为30.4kDa。Epo最早运用于慢性肾功能衰竭相关性贫血治疗。此后Bernaudin等发现其在脑缺血及神经组织的机械性损伤中也发挥着保护作用,多项实验表明,脑组织局部及全身运用Epo可防治缺血诱发的神经元损伤。相似的,通过动物模型人们逐渐认识到Epo的心肌保护作用。近年来有部分小规模临床实验提示了Epo的心肌保护效应,但是其具体分子生物学机制尚未阐明。

购买BMN 673 目的为了深入探讨Epo在缺血性心脏病中的生理保护作用及其临床意义。明确:1、Epo治疗是否能影响心肌细胞凋亡;2、促进血管新生、改善心肌梗塞术后心功能;3、明确EPO在缺血再灌注损伤中的保护机制,我们设计了该课题。 方法 1、通过RT-PCR及Western Blot验证体外培养的心肌细胞是否表达Epo的受体。采用H_2O_2诱导体外培养心肌细胞凋亡,运用Tunel染色探讨Epo对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡的影响。结合细胞信号传导通路阻滞剂明确Epo抑制心肌细胞凋亡的信号传导通路。分别收集不同时间点的心肌细胞培养上清液,观测Epo对心肌细胞VEGF表达的影响。 2、采用Langendroff离体心脏缺血再灌注模型,运用不同剂量Epo观测Epo对缺血再灌注离体心脏的血流动力学影响;OCT染色观测Epo对梗塞面积的调节。结合信号传导通路阻滞剂,探讨Epo对细胞外基质代谢的调节作用及其机制。酶谱法(Zymography Assay)及大鼠缺血再灌注模型验证EPO对缺血再灌注损伤后MMPs活性的调节。 结果证实心肌细胞表达Epo受体;Epo可抑制H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡、下调心肌细胞促凋亡相关蛋白的表达,上调抗凋亡蛋白表达。Epo通过Erk及PI3K-Akt途径抑制细胞凋亡。Epo可促进心肌细胞VEGF的表达及内皮细胞增殖;通过促进心肌细胞分泌VEGF,EPO可间接对内皮细胞的增殖发生调控。利用Langendroff离体心脏缺血再灌注模型,运用不同剂量Epo证实Epo可改善缺血再灌注离体心脏的血流动力学指标;减少缺血再灌注损伤后梗塞面积。Epo激活了Jak2-Erk信号传导通路,促进了CollagenI/III的表达,抑制了MMP2及MMP9的表达。MEK拮抗剂可抑制Epo的这一保护作用。在1周的随访期中EPO显著抑制了心肌缺血再灌注损伤后MMPs的活性。 结论 1、心肌细胞可表达EPO的受体,EPO经由Erk及Akt途径抑制心肌细胞凋亡; 2、EPO促进心肌细胞VEGF的合成分泌,促进内皮细胞增殖; 3、EPO治疗可显著提高心肌梗塞术后小鼠的生存率、改善心功能、抑制心脏组织凋亡、促进血管新生。 4、EPO可通过Erk途径调节心脏组织细胞外基质代谢。
目的

1.研究雷公藤内酯醇(TL)对人纤维肉瘤HT-1080细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响; 2.研究TL调控MMP-9表达的意义; 3.探讨TL调控MMP-9表达的机制。 方法 1.选择人纤维肉瘤细胞系HT-1080为研究对象,常规培养、传代,药物的3个工作浓度分别为6nM、12nM和18nM,处理时间均为72小时; PI3K activation 2.采用MMT法检测TL对HT-1080细胞增殖能力的影响; 3.用流式细胞仪检测TL致HT-1080细胞凋亡情况; 4.运用RT-PCR检测TL对9个基因mRNA表达的影响,这些基因是:MMP-9和-2,基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1、-2、-3和-4,DNA甲基转移酶(DNMT)-1、-3A和-3B; 5.用明胶酶谱实验检测TL对HT-1080细胞MMP-9和-2活性的影响; 6.用Transwell侵袭实验检测TL对HT-1080细胞体外侵袭能力的影响; 7.用甲基化特异性PCR(MSP)检测TL对MMP-9基因甲基化水平的影响; 8.用Western blotting检测TL对DNMT-1、-3A和-3B蛋白表达的影响。 结果 1.TL作用72小时,随药物浓度的增加,HT-1080细胞的增殖逐渐受到抑制;其中,半数抑制浓度约为25nM; 2.浓度分别为6 nM、12 nM和18 nM的TL处理72小时后,HT-1080细胞的凋亡率分别为16.0%、17.3%和18.8%,对照组凋亡率为17.7%; 3.18 nM TL处理HT-1080细胞72小时后,MMP-9 mRNA的表达明显下调(P＜0.05),但MMP-2、TIMP-1/-2/-3/-4 mRNA的表达无明显变化(P均＞0.05);6 nM和12 nM TL处理组上述基因的mRNA表达均无明显变化(P均＞0.05); 4.12 nM TL处理HT-1080细胞72小时后,在细胞无血清培养基上清中检测到的MMP-9的活性明显下调(P＜0.05),18 nM TL处理组无血清培养基上清中则基本检测不到MMP-9(P＜0.01);3个药物处理组MMP-2的活性均无明显变化(P均＞0.05); 5.Transwell侵袭实验发现,18nM TL处理72小时后,穿过人工基底膜的细胞数明显减少,约相当于对照组的65%(P＜0.

正常对照组小鼠肺泡结构基本正常,肺组织结构完整,肺泡腔清晰,肺泡间隔无增厚。LPS组肉眼可见肺脏表面淤血、出血点和水肿明显,光镜下肺泡结构破坏严重,肺泡萎陷、肺泡间隔增厚,炎细胞浸润。LPS+PCA组组织损伤程度比LPS组显著减轻,且与PCA给药浓度有关,尤以PCA高浓度组较为明显肺间质和肺泡腔内渗出物及炎细胞浸润较LPS组明显减少;LPS+SB203580、LPS+Dex、LPS+PCA+SB203580组也可见组织损伤较LPS组减轻,大部分肺泡结构清晰,肺泡间隔略增厚。2.PCA可使小鼠BALF及血清中TNF-α含量与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,BALF及血清中含量明显低于模型组(P<0.05)。3.PCA可使小鼠BALF及血清中IL-1β含量与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组(P<0.05)、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,BALF及血清中含量明显低于模型组(P<0.01)。4.PCA可使小鼠BALF中蛋白浓度与模型组相比出现明显下降,并随PCA剂量的增多而降低,PCA高剂量组差异显著(P0.05)。阻断剂SB203580组(P<0.05)、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,血清中含量明显低于模型组(P<0.01)。6.LPS模型组各组肺组织中p-ATF2蛋白的表达强度较对照组显著增高(P<0.01)；PCA治疗组中p-ATF2蛋白表达量较LPS模型组相比显著降低(P<0.01),并随浓度的增高而降低。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,肺组织中p-ATF2含量明显低于模型组(P<0.01)7.LPS模型组各组肺组织中TLR4蛋白的表达强度较对照组显著增高(P<0.01)；PCA治疗组中TLR4蛋白表达量较LPS模型组相比显著降低(P<0.01),并随浓度的增高而降低。阻断剂SB203580组、阳性药物地塞米松组及PCA和阻断剂组也表现出相同的作用效果,肺组织中TLR4含量明显低于模型组(P<0.01)。结论1.PCA对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠有一定的保护作用。2.PCA对脂多糖所致急性肺损伤的保护作用与PCA浓度成正相关。3.PCA可通过减少炎症介质的产生而对受损小鼠发挥保护作用。4.PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与抑制P38MAPK信号通路有关。5.PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与抑制TLR4信号通路有关。6.当同时应用PCA及SB203580后PCA对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用减弱,进一步证明PCA对急性肺损伤小鼠的保护作用与其抑制P38MAPK信号通路有关。
[目的]研究高糖状态下,体外培养的小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)的细胞增殖、分化、细胞外矿物质沉积的情况以及葡萄糖浓度对P38MAPK信号通路的影响,进一步探讨P38MAPK特异性抑制剂SB203580对高糖所导致的成骨细胞活性改变的影响,以阐明P38MAPK信号通路在高糖状态下成骨细胞活性中的作用。[方法]将培养的小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)分为8组：1)正常对照组5.5mM葡萄糖；2)高糖组A：15.5mM葡萄糖；3)高糖组B：25.5mM葡萄糖；4)高糖组C：35.5mM葡萄糖；5)SB203580组A：5.5mM葡萄糖+10gM

什么 Ki16425订单 SB203580；6)SB203580组B：15.5mM葡萄糖+10μMSB203580;7)SB203580组C：25.5mM葡萄糖+10μMSB203580；8)SB203580组D：35.5mM葡萄糖+10μM 因为 SB203580。细胞接种后,待细胞生长至80%密度后,同步化24小时后,分别用以下各因素处理细胞并继续培养。1、甲基噻唑基四唑(MTT)法检测3、7、14d

MC3T3-El细胞增殖情况；2、碱性磷酸酶(ATP)试剂盒检测3d、7d细胞裂解液中ALP活性；3、茜素红染色观察细胞细胞矿化结节的大小和形态；4、荧光实时定量PCR检测核心结合因子1(core binding factor-1, Cbfal)和骨钙蛋白基因(osteocalcin, OCN)分别在培养3d、7d的表达。收集细胞,提取总RNA,逆转录cDNA,采用实时荧光定量PCR法检测各组成骨细胞中成骨相关基因的表达。5、Western blot检测P38MAPK和磷酸化P38MAPK在3d、7d的表达情况。[结果]1、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mM)可抑制MC3T3-E1细胞的增殖。且经过SB203580干预后,细胞增殖水平继续下降,差异具有统计学意义。(P<0.05)。2、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mM)可抑制MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、细胞矿化和成骨相关基因的表达。SB203580干预后,ALP活性、细胞矿化及成骨相关基因(Cbfal和OCN)表达水平较未干预组升高。3、与低浓度葡萄糖相比,高糖组(≥15.5mmM)对P38MAPK,总蛋白分泌无明显的作用,但能够促进P-P38MAPK的表达且成剂量相关关系,经过SB203580干预后,可明显抑制P38MAPK磷酸化。(P<0.

20%,糖醛酸含量为7.35%,硫酸根含量为14.67%;龙须菜多糖的糖含量为81.19%,糖醛酸含量为8.20%,硫酸根含量为9.33%。利用巨噬细胞RAW264.7探究紫菜多糖和龙须菜多糖的生物活性。MTT实验显示,两种多糖都能够有效促进RAW264.7的增殖,增强细胞活性;在5~100μg/m L浓度范围内,紫菜多糖刺激12 h,其促增殖作用随浓度升高而升高,刺激24

h,浓度在40μg/m L时细胞活力达到最高,是对照组细胞活力的2.7倍;龙须菜多糖浓度在12.5~200μg/m L范围内能够显著增强RAW264.7细胞活力,但各浓度之间无显著差异。中性红摄取实验显示,紫菜多糖和龙须菜多糖能够显著增强巨噬细胞的吞噬能力,不同浓度(25、50、100μg/m L)的紫菜多糖处理组RAW264.7吞噬能力分别是对照组的1.8、2.1、2.5倍,不同浓度(50、100、200μg/m L)的龙须菜多糖处理组RAW264.7吞噬能力分别是对照组的1.7、2.0、2.4倍。此外,紫菜多糖和龙须菜多糖都能够有效促进RAW264.7释放NO、TNF-α、IL-6等细胞因子;RAW264.7经不同浓度(25、50、100μg/m L)紫菜多糖刺激后,NO释放量为34.76、49.20、53.18μmol/L,与对照组(1.722μmol/L)相比显著上升,TNF-α含量为136.76、147.08、141.72 ng/L,与对照组(109.84 ng/L)相比显著上升,IL-6的含量(147.17、160.55、155.13 ng/L)与对照组(133.01 ng/L)相比显著上升;经50、100、200μg/m L龙须菜多糖刺激后,NO释放量由对照组0.21μmol/L上升到50.31、55.13、69.66μmol/L,TNF-α含量为132.20、141.27、149.93ng/L,与对照组(107.34 GSK1363089核磁共振 ng/L)相比显著上升,IL-6的含量(142.20、151.27、159.93 ng/L)与对照组(127.34 ng/L)相比显著上升。实验结果表明,紫菜多糖和龙须菜多糖促进RAW264.7释放NO主要是通过JNK和JAK2两条信号通路途径。综上所述,从坛紫菜和龙须菜中纯化的多糖能够有效激活RAW264.7,促进其细胞的增殖,增强其吞噬能力,并调节RAW264.7分泌相关细胞因子。
目的:本实验从张景岳之“阴阳互济”理论出发,选取中医经典补肾填精方剂左、右归丸并将其拆方,以两方的共有药为共同方组,以左归丸中滋阴药为滋阴方组,以右归丸中补阳药为补阳方组,以雌二醇戊酮片为阳性对照组,以绝经后骨质疏松症(PMOP)大鼠BMSCs为研究对象,着重观察左、右归丸及其拆方水煎液在PMOP大鼠体内代谢后提取的BMSCs的成骨分化潜能,并从ERK1/2信号通路途径探讨左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠BMSCs成骨诱导的可能机制。材料与方法:采用双侧去卵巢法建立绝经后骨质疏松症模型,SPF级2月龄Sd雌性未生育大鼠90只,200-220g,适应性喂养1周后按数字随机法随机分为正常组10只、假手术组10只和手术组70只,正常组继续常规饲养,手术组实施双侧去卵巢手术造模处理。术后3天,将行双侧切除卵巢术后存活的大鼠再次按体重分层随机分为7组,最后的分组结果为正常组(Control)10只、假手术组(Sham)10只、模型组(OVX)、补佳乐组(BJL)、左归丸组(ZGW)、右归丸组(YGW)、共同药方组(GTY)、滋阴药方组(ZYY)和补阳药方(BYY)组各8只。按每kg体重大鼠的给药量为人的6.3倍计算,并且每次给大鼠灌胃量为正常人用药量的2倍,每日灌胃1次,空白对照组、假手术组、模型组均灌服蒸馏水,其余各组分别灌服各组相应制备好的药液。给药12周后分别提取各组大鼠BMSCs,采用MTT法检测BMSCs增殖率,PNPP法检测BMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性,采用改良钙钴法检测ALP活性,茜素红法观察矿化结节的形成,并用Quantitative

http://www.selleck.cn/pathways_Wnt.html real-time PCR法检测核心结合因子(Cbfα1)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)m RNA表达,用Western blot法检测Cbfα1、ColⅠ蛋白表达。另外,采用ERK1/2、MAPK信号阻滞剂方法,以PD98059(ERK1/2特异阻滞剂)干预PMOP大鼠BMSCs,并用Quantitative real-time PCR法检测Cbfα1、ColⅠm RNA表达,用Western blot法检测Cbfα1、ColⅠ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达。结果:1.BMSCs的鉴定经流式细胞仪检测,各组BMSCs的CD29、CD90表达均为阳性,且CD29的阳性率均在94%以上,CD90的阳性率均在50%以上。CD45表达为阴性,其中OVX和BJL组的阴性率在30%以下,其余各组的阴性率在6.4%以下。2.左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠BMSCs增殖的影响2.1 Luminespib 花费 BMSCs生长曲线绘制BMSCs生长曲线大体呈S形,接种后第1~2d为潜伏期,从第3d细胞开始增殖并进入对数生长期,第5~6d达到高峰,以后进入平台期。2.2左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠BMSCs增殖的影响结果显示,左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠BMSCs的促增殖作用呈时间相关性。在第1d时,与Control组比较,OVX、ZGW、ZYY、BJL组有显著性差异(P0.05)。第3d时,与Control组比,ZGW、YGW、ZYY与BJL组有显著性差异(P<0.05),只有BJL组与OVX组比有显著性差异(P<0.05)。第5d时,OVX、ZGW、YGW、GTY与BJL组与Control组比较都有统计学意义(P<0.05),同第3d一样只有BJL组与OVX组比有显著性差异(P<0.05)。第7d时,与Control组及OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组均有显著性差异(P<0.05),与ZGW组比较,Sham、GTY、ZYY、BYY组有有统计学意义(P<0.05);YGW组ALP活性在1d、5d、7d时与Control、OVX组比较著性提高(P<0.05);而BJL组在1d、3d时与Control、OVX组比较著性提高(P<0.

5, 5 ,25,50和100μmol/L的无血清培养基培养U266细胞。各组细胞根据检测方法的要求分别培养于培养瓶中,30min后收集培养细胞待检。 2.检测指标: (1)Western blot技术测定IκB上游激酶IKKα, IKKβ的表达和磷酸化情况;

(2)Western blot技术测定胞浆提取物中IκBα蛋白表达和磷酸化水平; (3)细胞免疫荧光染色技术分析NF-κB/p65蛋白在细胞中的表达和分布; (4)Western blot技术测定胞核提取物中NF-κB /p65蛋白表达水平; (5)Transcription Factor Assay kit试剂盒(酶联免疫吸附技术(ELISA))测定胞核提取物中p65蛋白与DNA靶序列结合能力。 结果 1.氯化镧对LPS诱导的巨噬细胞NF-κB信号通路中关键分子表达和/或活化的影响: (1)氯化镧对LPS诱导的NF-κB活化的抑制作用:氯化镧(2.5μmol/L)能够显著抑制LPS诱导NF-κB/p65自胞浆转位到细胞核,并且显著减弱NF-κB/p65与靶DNA结合活性。 (2)氯化镧对LPS诱导的IκBα降解的抑制作用:氯化镧显著抑制LPS诱导的胞浆IκBα降解,从而抑制了NF-κB/p65自胞浆转位到细胞核。 此网站 (3)氯化镧对LPS诱导的IκBα磷酸化的抑制作用:氯化镧不能阻断LPS介导的RAW264.7巨噬细胞中IκBα的磷酸化。 (4)氯化镧对LPS诱导的IKKs活性的影响:氯化镧不影响RAW264.7巨噬细胞中IKKα/β表达和磷酸化水平,从而不能阻断LPS介导的IκBα的磷酸化。 在RAW264.7细胞株中,NF-κB激活剂LPS诱导IKKβ及IκBα磷酸化,令IκBα降解,最终使NF-κB/p65转位入核与靶基因结合。氯化镧虽然不能阻断IKKβ及IκBα磷酸化,但是能够阻止RAW264.7细胞中IκBα的降解,并抑制NF-κB/p65转位入核并抑制NF-κB/p65与靶基因的结合活性,最终阻断NF-κB信号转导通路。 那个 2.氯化镧对TNF-α诱导的Hela细胞NF-κB信号通路中关键分子表达和/或活化的影响: (1)氯化镧对TNF-α诱导的NF-κB活化的抑制作用:25-100μmol/L氯化镧能够显著抑制TNF-α诱导NF-κB/p65蛋白表达水平并抑制其自胞浆转位到细胞核,5-100μmol/L氯化镧还能显著减弱Hela细胞中NF-κB/p65与靶DNA结合活性,上述抑制效应呈剂量依赖关系。 (2)氯化镧对TNF-α诱导的IκBα磷酸化和降解的抑制作用:TNF-α能够诱导Hela细胞中IκBα的磷酸化和降解。随着氯化镧处理的浓度不断升高,IκBα表达水平逐步升高,而磷酸化水平不断降低。表明氯化镧能够抑制TNF-α诱导的IκBα的磷酸化和表达水平的降低,且该效应随着随着氯化镧浓度的升高而逐步增强。

(3)氯化镧对LPS诱导的IKKs活性的影响:氯化镧不影响Hela细胞中IKKα/IKKβ蛋白的表达水平。静息状态的Hela细胞几乎不表达p-IKKβ,而在TNF-α诱导下p-IKKβ水平则明显升高,随着氯化镧处理浓度的逐渐升高,p-IKKβ水平逐步下降,50-100μmol/L氯化镧能够显著抑制TNF-α诱导Hela细胞中IKKβ的磷酸化。 没有 NF-κB的另一个激活剂TNF-α,亦通过磷酸化IKKβ及IκBα,导致IκBα降解,最终亦使NF-κB/p65转位入核与靶基因结合,启动相关基因的表达。在Hela细胞株中,氯化镧不仅能够抑制IκBα的降解和NF-κB/p65转位入核,阻断NF-κB/p65与靶基因的结合,还能够阻断IKKβ及IκBα磷酸化。可见在不同细胞及激活条件下,氯化镧抑制NF-κB信号通路的靶点不完全相同。 3.氯化镧对U266细胞中NF-κB的组成性活化(constitutive activation)的影响: (1)氯化镧对NF-κB组成性活化的作用:0-100μmol/L的氯化镧不能抑制NF-κB的组成性活化,逆转p65蛋白的移位。

(2)氯化镧对U266细胞中IκBα蛋白的表达和磷酸化的作用:0-100μmol/L氯化镧亦不能影响IκBα蛋白的表达和磷酸化水平。 (3)氯化镧对U266细胞中IKKs活性的影响:0-100μmol/L的氯化镧对U266细胞中IKKα/IKKβ蛋白的表达和磷酸化水平影响不明显。 (4)氯化镧在胞外条件下,对U266细胞核提取物中NF-κB/p65与DNA的结合能力的影响:实验表明在细胞外条件下,5μmol/L氯化镧即能够显著抑制p65蛋白与靶DNA结合活性,并且该抑制效应随着氯化镧浓度的增高不断增强,100μmol/L氯化镧能够完全抑制胞核提取物中NF-κB/p65与靶DNA的结合。研究结果提示:对于NF-κB组成性活化U266细胞,氯化镧不影响IKKβ的磷酸化及IκBα的磷酸化和降解,并无法逆转NF-κB转位,但能够在细胞外条件下阻断NF-κB/p65与靶DNA的结合。 第III部分氯化镧对LPS诱导NF-κB调控的炎症介质表达的影响目的通过观察氯化镧对LPS诱导的炎性因子TNF-α、NO及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达水平及活性的作用,了解氯化镧对LPS诱导NF-κB下游靶基因表达的影响。 方法 (1)实验分组:(同第I部分)。 (2)逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)测定TNF-α及iNOS基因表达水平。 (3)酶联免疫吸附技术(ELISA)测定细胞上清中TNF-α含量。 (4)细胞免疫荧光染色技术分析iNOS蛋白在细胞中的表达和分布。 (5) Western blot技术测定细胞中iNOS蛋白表达水平。 (6)硝酸还原酶法检测培养上清NO含量。 结果 (1)氯化镧对LPS诱导的NF-κB下游炎症介质TNF-α表达和释放的抑制作用:2.5μmol/L氯化镧不仅能够下调静息状态下巨噬细胞TNF-α基因的表达和多肽的释放还能够显著抑制LPS上调TNF-α基因表达和多肽释放。 (2)氯化镧对LPS诱导NF-κB下游基因iNOS表达的抑制作用:2.