再计算细胞的抑制率,结果显示,随着他莫昔芬从2μmol/L上升至10μmol/L,SHG-44细胞的抑制率也明显增加,但超过10μmol/L,则抑制率的变化就不够显著。同一药物浓度下,48h组的细胞抑制率明显高于24h组,但与48h组相比较,在72h组中只有6μmol/L组的抑制率增加了。4、流式细胞仪检测显示:与空白对照组相比,SHG-44细胞经过他莫昔芬作用后,RapamycinG0/G1期细胞比例减少,G2/M期及S期细胞比例增多,细胞阻滞于G2/M期及S期。细胞凋亡检测显示:与空白对照相比,应用他莫昔芬组凋亡细胞比例增高,并且随着作用剂量的增加,凋亡细胞比例有增多的趋势。 第二部分SHG-44人胶质瘤细胞离子通道特性及他莫昔芬调控研究 方法:1、培养SHG-44胶质瘤细胞,试验前,以0.25%胰蛋白酶及0.02可能% EDTA消化,制成细胞悬液,接种于预先放置盖玻片含无血清培养基的培养板中,经过48小时后可进行膜片钳记录。应用全细胞膜片钳方式记录SHG-44细胞膜上的钠通道、内向整流钾通道及氯离子通道电流,细胞破膜后5min开始记录。2、绘制各离子通道的电流密度–电压关系(I–V)曲线。观察施用不同浓度他莫昔芬后各离子通道的I-V曲线及峰值电流密度的Selleck Roxadustat变化。3、以I/Imax为纵坐标,以他莫昔芬浓度为横坐标,绘制各通道药物作用的量效关系散点图,以Origin 7.5软件行Hill拟合,求出他莫昔芬抑制各离子通道的半数抑制浓度(IC50)值。4、以标准化后的电导值对测试电压脉冲作图。以Origin 7.5软件行Boltzmann拟合,绘出对照组及各处理组钠、钾、氯通道的激活曲线,求出通道的半数激活电压(V1/2)及斜率(k)值,并观察不同浓度的他莫昔芬对它们的影响。

目的：胰腺癌已成为常见消化系统恶性肿瘤之一,在国内外,其发病率均呈逐年上升趋势。由于其病程短、进展快、起病隐袭,很难早期发现,故预后很差。早期诊断及治疗成为临床面临的一大难题,吉西他滨为治疗胰腺癌的首选药物,可改善患者的生活质量,但以吉西他滨为基础的联合化疗是否由于单药化疗仍存在争议。本文就大连医科大学附属一院及大连市三院的部分进展期胰腺癌病例进行临床分析DNA Damage抑制剂,并对吉西他滨单药化疗及联合化疗疗效作一分析,以提高对胰腺癌的诊治水平。 方法：回顾性分析大连医科大学附属一院2002年1月-2009年12月收治的进展期胰腺癌患者及部分大连市第三人民医院进展期胰腺癌患者共60例临床资料及电话随访结果,运用SPSS11.5软件进行分析、统计处理,并结合相关文献做出临床分析。其中45例全身化疗的进展期胰MEK inhibitor药剂腺癌患者的临床资料,对其进行分析。吉西他滨单药组17例,剂量为1 000mg／m2,d1、8,三周为一周期。吉西他滨联合治疗组28例,联合化疗方案包括吉西他滨1000mg／m2,d1、8,分别联合：(1)氟尿嘧啶425-600mg／m2,静滴或持续静脉泵入,d1-5；(2)顺铂60-75mg／m2,分3-4天静脉滴入；(3)奥沙利铂8selleck screening library5-130mg／m2,d1,静脉滴入；(4)卡培他滨1000mg／m2,每天两次口服,d1-14。21天为一周期。采用Kaplan-Meier生存曲线分析患者的生存期,并比较两组间的临床疗效、中位疾病进展时间、中位生存时间及不良反应。 结果：在60例胰腺癌患者中,男39例,女21例,男女之比为1.86：1,年龄最小36岁,最大78岁,中位年龄60岁。肿瘤部位：肿瘤位于胰头33例,占55%,胰体尾27例,占45%。

(3)采用Transwell细胞侵袭实验检测MK2206抑制浸润性膀胱癌细胞株UMUC3的侵袭能力,并通过免疫印迹方法检测与侵袭有关的上皮间充质转化(EMT)中各指标snail,slug及ZEB1的表达水平变化,探讨MK2206抑制细胞侵袭能力的作用机制。(4)采用膀胱癌细胞株RT112建立膀胱癌动物模型(小鼠皮下肿瘤模型),研究各种药物的体PF-02341066 花费内治疗肿瘤的效果；采用腹腔注射的方法将药物注射到小鼠体内并分组,对照组(DMSO)、CDDP组、MK2206组、MK2206+CDDP组,观察各组中对膀胱癌皮下肿瘤生长的影响情况,并通过免疫组织化学染色的方法检测四组动物模型中的皮下肿瘤标本的Ki-67表达,分析各组药物对肿瘤细胞增殖的抑制情况。结果(1)蛋白免疫印迹还有检测在肌层浸润性膀胱癌细胞株中(253J,J82,T24, UMUC3)磷酸化Akt及下游的效应分子表达增强,而在非肌层浸润性膀胱癌细胞株中(RT112,RT4)磷酸化Akt及下游的效应分子无表达或弱表达。(2)MTT细胞活性实验检测MK2206(500nM)联合CDDP可以提高CDDP诱导的对肿瘤细胞毒性作用,从而通常增加膀胱癌肿瘤细胞对CDDP的敏感性。蛋白免疫印迹检测到联合CDDP治疗,MK2206(500nM)可以增强CDDP引导的肿瘤细胞凋亡效应,而这种凋亡效应依赖于磷酸化Akt及其下游效应分子表达水平的抑制。(3)MK2206(500nM)抑制磷酸化Akt及下游效应分子表达水平,还可以抑制UMUC3的侵袭能力,并且抑制侵袭相关蛋白snail,slug及ZEB1的表达水平,这些指标也与化疗敏感性密切相关。

通过测定已知PARP抑制剂DPQ和菲啶酮PHE对昆虫表达hPARP1的IC_(50)，验证此方法可以用来进行新型PARP抑制剂的筛选。通过克隆形成实验和CCK8细胞增殖-毒性检测实验，筛选对PARP抑制剂PHE敏感的细胞，用于筛选PARP抑制剂的细胞模型。 实验结果表明，本论文成功构建了pFast-hPARP1质粒，通过Bac-to-Bac杆状病毒http://www.selleckchem.cn/products/abt-199.html表达系统，实现了hPARP1酶在Sf9昆虫细胞中的表达，产物经3-氨基苯甲酰胺柱亲和层析成功得到纯化，得率为80.8%，纯化倍数为38.72倍，比活达到1.988U/μg。SDS-PAGE和Western blotting结果显示纯化产物在116kDa处有特异性目标条带。PARP抑制剂体外筛选结果显示，在72种化合物中筛选不出41个具有生物活性的PARP抑制剂，其中有7个化合物的IC_(50)低于500nmol/L，显示出良好的PARP抑制作用。细胞模型筛选结果显示，中国人源胰腺癌细胞JF305对PARP抑制剂菲啶酮具有一定的敏感性。CCK8结果显示，筛选获得的PARP抑制剂HC-232（A）具有明显抑制JF305细胞的生长作用。 本课题通过Compound C供应商分子构建、表达、纯化等步骤获得了hPARP1。利用hPARP1，成功筛选出具有一定生物活性的PARP抑制剂。获得了对PARP抑制剂菲啶酮敏感的中国人源胰腺癌细胞JF305，这为筛选出具有自主知识产权的PARP抑制剂奠定了基础，并对后续研究提供了理论依据。
颅内肿瘤大致分为原发性肿瘤和转移瘤。胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤。胶质母细胞瘤(Glioblastoma, GBM)是发病率和恶性程度最高的胶质瘤。

因此，具有低毒副作用、高抗癌活性的植物性治疗试剂可能与抗癌药物产生协同作用，是我们目前研究的最佳候选者。在此，我们评价了水飞蓟宾是否能与紫杉醇、阿霉素、喜树碱在胃癌细胞SGC-7901中产生协同作用。实验结果显示水飞蓟宾能够与紫杉醇产生很好的协同促进作用，诱导SGC-7901细胞G2/M期阻滞及凋亡。
治咳川贝枇杷滴丸是以Obeticholic Acid订购现代科技提取枇杷叶、平贝母、桔梗和半夏中的有效成分与薄荷脑精制而成的滴丸制剂，具有服用方便、生物利用度高及无明显毒副作用等特点，具有宣肺降气、清热化痰的功效。临床上主要用于痰热郁肺所致咳嗽及支气管炎等症。作为一个蕴含着科学配伍和独特辩证规律的现代中药复方，以整体系统生物学为指导对其进行药效物质组学及通常机理评价的研究可以解决困扰其国际化推广的技术瓶颈。 在质量控制方面：采用UPLC/Q-TOF技术建立了35种成分的多维多息质量控制指纹图谱；并同时对六个指标成分进行了定量分析；采用聚类分析最小二乘法（PLS-DA）对不同批次滴丸的质量进行评价，确定了影响质量的关键点为挥发性成分，并通过全二维气相质谱Rigosertib细胞系联用技术对其74种成分进行了较为全面地信息表征。 在有效性评价方面：通过枸橼酸引咳豚鼠模型、豚鼠离体平滑肌组织模型和NF-κB炎症通路荧光素酶筛选评价体系对滴丸按极性萃取的子物质组分进行药效学评价，筛选出二氯甲烷层具有止咳平喘的功效，而正丁醇层具有抗炎作用；并对其进行化学成分信息表征，并通过网络生物信息学与在线细胞快速筛选技术相结合的手段，对药效指标成分的作用机制进行阐释与验证。

其中，受体酪氨酸激酶（RTK）是一类细胞表面跨膜受体，能够从细胞外环境转导信号到细胞质和细胞核，对正常细胞和恶性肿瘤细胞的信号转导都起到非常重要的作用。而肿瘤信号转导途径正是人们理解癌变机制的关键。RTK激酶的TAM亚家族包括3个成员：Tyro-3、Axl和Mer，在多种癌症中都有发现TAM受体的过度表达或者异常表达，其中Axl和Mer在各类白血病和多数的实体瘤中都存在着过Quisinostat细胞系度表达，对癌症细胞的耐药性和转移均具有一定的作用。因此，开发受体酪氨酸激酶Axl和Mer的小分子激酶抑制剂不仅给现有癌症治疗提供全新的治疗手段，还为癌症治疗过程中的耐药性和癌症细胞的转移提供了新的解决方案，对抗癌治疗具有重大的临床应用意义。 第二章是基于受体酪氨酸激酶Axl和Mer靶点的1,5-双环吡唑啉酮类小分子抑制剂的设计与合成研究。参考现有A还有xl和Mer靶点的小分子受体酪氨酸激酶抑制剂的研究进展，通过构效关系分析，确定合适的先导化合物，进行化合物的设计和合成研究。本研究选取处于临床I期的多靶点Axl和Mer小分子受体酪氨酸激酶抑制剂BMS777607和Ningetinib为先导化合物，采取汇聚型合成路线，共计合成了37个目标化合物。对选取的候选化合物通过单晶结构进一步证明了合成化合物结Selleckchem BYL719构的正确性。 第三章进行了激酶抑制活性测试及构效关系分析。我们选取的两个先导化合物都属于多靶点的小分子受体酪氨酸激酶抑制剂，同时对c-Met、KDR、Axl和Mer等多种激酶有强效的激酶抑制活性。由于TAM家族与c-Met家族在激酶区域的氨基酸序列最为相近，因此，首先我们对前期设计合成的目标化合物进行c-Met和KDR的激酶抑制活性测试，得到对c-Met具有选择性抑制的化合物，通过构效关系分析，为进一步的结构改造及优化指明方向。