整体试验：构建小鼠哮喘模型。Balb/c小鼠在第0天与第14天用10μg/只小鼠的卵白蛋白(OVA)与2mg氢氧化铝混溶后皮下注射于小鼠的脚掌、颈部、背部与腹股沟致敏。在第22-28天,将小鼠放置于有机塑料盒内,用雾化吸入器气道雾化吸入30分钟的OVA抗原(10mg/mL).第29天治疗组气道滴入给药3h后,用整体体积描记系统测定气道反应性,分别用3.125、6.25、12.5、25、50mg/mL的乙酰甲胆碱雾化吸入激发,测定相应浓度下气道呼气间歇(Penh)值。之后取肺泡灌洗液进行细胞计数,取左上肺提取mRNA。 Ki16425化学结构 2.离体试验：MTT法检测环索奈德代谢物与福莫特罗对RBL-2H3细胞活性的影响。用抗原抗体复合物诱导RBL-2H3细胞构建肥大细胞炎症模型。用实时RT-PCR和ELISA检测IL-4,

IL-13mRNA和蛋白的表达。用Western Blot检测JNK信号通路。 结果： 1.整体实验结果： 1)在OVA诱导的小鼠哮喘模型中,环索奈德和福莫特罗可分别呈剂量依赖性的抑制乙酰甲胆碱(3.125-50mg/mL)诱导的Penh值的增加。2)环索奈德(0.3mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28μg/kg)联用对乙酰甲胆碱(6.25-50mg/mL)引起的Penh值升高,与单剂量相比具有协同抑制作用；环索奈德(1mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28ug/kg)联用对乙酰胆碱(3.125-50mg/mL)引起的Penh值升高,与单剂量相比无明显的协同抑制作用。3)环索奈德和福莫特罗可分别呈剂量依赖性的抑制哮喘小鼠肺部炎症细胞的增多。4)环索奈德(0.3,1mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28μg/kg)联用,与单剂量相比对哮喘小鼠肺部炎症的增多有明显的协同抑制作用。5)福莫特罗对哮喘小鼠肺组织中IL-4mRNA表达的升高呈计量依赖性抑制；环索奈德在浓度0.3mg/kg时对IL-4mRNA表达的升高有显著抑制作用；环索奈德(1mg/kg)分别与福莫特罗(14,28ug/kg)联用对IL-4mRNA表达的升高有协同抑制作用。

因为 2.离体实验结果：1)高浓度环索奈德代谢物(10-8-10-4M)可引起细胞毒性反应降低RBL-2H3细胞活性,而福莫特罗(10-12-10-4M)对细胞活性无明显影响。2)DNP-BSA (100ng/mL)刺激表面结合IgE (200ng/mL)的RBL-2H3细胞可显著诱导炎症因子IL-4和IL-13表达的增多。3)环索奈德代谢物(0.1-10nM)与福莫特罗(0.1-10μM)均可呈剂量依赖性的抑制DNP-BSA诱导的IL-4和IL-13表达的增多。4)环索奈德代谢物(0.2nM)与福莫特罗(1州)联用与单剂量相比,对DNP-BSA诱导的IL-4的产生有显著协同抑制作用；对IL-13和组胺的产生无显著协同抑制作用。5) 点击此处 MAPK通路中JNK通路抑制剂SP600125(10μm)可显著抑制DNP-BSA诱导的IL-4表达和分泌,而P38和ERK通路抑制剂对IL-4产生无明显抑制作用。6) IgE-BSA复合物可诱导JNK磷酸化,在刺激20min时磷酸化最多。7)环索奈德代谢物(0.1-10nM)与福莫特罗(0.1-10μM)均可呈剂量依赖性的抑制DNP-BSA诱导的JNK磷酸化。8)环索奈德代谢物(0.2nM)与福莫特罗(1μM)联用与单剂量相比,对DNP-BSA诱导的JNK磷酸化有显著协同抑制作用。

结论： 1)在小鼠的哮喘模型中,环索奈德与福莫特罗的联用对于乙酰甲胆碱诱导的气道高反应性和炎症的产生,具有协同抑制作用。 2)在抗原抗体复合物介导的RBL-2H3炎症细胞模型中,环索奈德代谢物与福莫特罗联用对炎症因子IL-4的产生有协同抑制作用；抑制MAPK的JNK通路可能是其机制之一。
目的： 支气管哮喘(bronchial asthma,简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的以可逆性气流受限为特征的气道慢性炎症性疾病。主要表现为气道炎症、气道重塑以及气道高反应性(AHR)。AHR是哮喘的重要特征之一,主要是由气道平滑肌(ASM)的异常过度收缩引起,是引发咳嗽、胸闷、呼吸困难和喘息等症状的主要原因。一般认为,存在于哮喘患者气道的炎症介质可使气道高反应性增高,导致气道平滑肌(ASM)的异常收缩,诱发哮喘急性发作或者重度哮喘发作。p2受体激动剂作为控制哮喘发作症状的首选药物,主要通过与ASM上肾上腺素能受体结合而活化一系列信号通路,引起ASM的舒张。然而,部分患者在使用β2受体激动剂后并不能取得理想的疗效,其中机制众说纷纭,有研究者认为是炎症因子促进了ASM的收缩而影响了p2受体激动剂的疗效,也有研究者认为炎症因子直接作用于ASM引起p2受体激动剂对ASM舒张作用减弱或通过下调ASM表面p2受体的表达量而削弱了其舒张作用。近年来发现,许多炎症细胞因子与AHR有关,其中包括IL-17。IL-17是Th17细胞分泌的细胞因子,与许多炎症反应和自身免疫性疾病的发生和发展有关。早期研究发现,哮喘患者血清、痰液以及支气管肺泡灌洗液(BALF) IL-17中的浓度较正常人明显升高,而且其表达水平与病情以及气道反应性相平行。最近,M.

Growing evidence shows that CIH and hypertension are strongly related,involving markers or pathways indicative of systemic inflammation,such as high-sensitivity C-reactive protein(hs-CRP),interleukin-6,nuclear factor-kappa B,tumor necrosis factor-α,interleukin-8 and p38 mitogen-activated protein kinase(MAPK)dependent selleck抑制剂 pathways.Oxidative stress also plays an important role in this process,including in the activation of polymorphonuclear neutrophils.However,the pathophysiological and clinical significance of systemic inflammation in CIH and hypertension is not proven.This

review article highlights the relationship between CIH and hypertension through systemic inflammation and the current interventions available in Chinese medicine,to offer a background for the future treatment of OSAS-related hypertension with integrative medicine.
目的探讨丹参酮ⅡA(Tanshinone,TanⅡA)对缺血再灌注(IR)损伤大鼠细胞凋亡和血脑屏障通透性的影响及与p38MAPK通路的关系。方法 60只大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、TanⅡA低剂量治疗组、TanⅡA高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。TanⅡA高、低剂量组于术前连续灌胃给予高、低剂量TanⅡA 3d,每日1次。各组于脑缺血120min再灌注24h,采用免疫组化法观察大鼠额顶部皮质磷酸化p38MAPK和MMP-9表达;TUNEL法检测神经细胞凋亡,检测伊文斯蓝(EB)含量变化。结果(1)与Sham组相比,IR组磷酸化p38MAPK和MMP-9明显升高(P<0.05);与IR组比较,TanⅡA高、低剂量治疗组磷酸化p38MAPK和MMP-9表达均降低,且高TanⅡA组明显低于低TanⅡA组(P均<0.05);(2)与Sham组相比,IR组凋亡细胞明显增加;与IR组比较,TanⅡA高、低剂量治疗组凋亡细胞均减少,且高TanⅡA组明显低于低TanⅡA组(P均<0.05)。(3)与Sham组比较,IR组脑组织EB含量明显升高;与IR组比较,TanⅡA高、低剂量治疗组脑组织EB含量明显降低(P<0.05),且高TanⅡA组明显低于低TanⅡA组(P均
随着人们生活行为,饮食结构及人口老龄化的改变,糖尿病(DM)的发病率与日剧增,成为严重威胁人类健康的慢性代谢性疾病,据国际糖尿病联盟统计,2000年全球有DM患者约1.51亿,而估计到2030年全球将5亿人患DM,DM是DM肾病
近年一些研究发现,内源性和外源性的硫化氢都具有促进血管新生和伤口愈合的作用。在体外培养的细胞和活体的研究中,一定剂量的硫化氢可促进血管内皮细胞增殖、迁移和黏附功能,从而促进微血管的形成。其机制可能与激活血管内皮生长因子及其下游的信号通路有关。本文就硫化氢促血管新生作用及其相关机制的研究进行综述。
背景:内皮祖细胞为血管新生的前体细胞,通过促血管新生作用治疗糖尿病血管病变有着良好的前景。目的:探讨糖尿病对内皮祖细胞移植治疗缺血性疾病过程中促血管新生作用的影响。方法:制备糖尿病大鼠模型,提取糖尿病和正常大鼠供体骨髓单个核细胞体外定向培养为内皮祖细胞。同时建立糖尿病及正常大鼠下肢缺血模型,并于缺血病变部位局部移植糖尿病或正常大鼠内皮祖细胞或PBS进行对照。移植后定期应用ELISA方法检测病变部位血管内皮生长因子含量,应用免疫组化方法计数病变部位微血管密度。结果与结论:①受体相同,移植物不同时:移植糖尿病大鼠来源或正常大鼠来源内皮组细胞后,下肢缺血组织中血管内皮生长因子水平及微血管密度比较,差异无显著性意义(P>0.05)。②移植物相同,受体不同时:正常大鼠移植内皮祖细胞后下肢缺血组织中血管内皮细胞生长因子含量和微血管密度均高于糖尿病组。说明在体外定向培养和病变部位局部注射条件下,糖尿病对骨髓来源内皮祖细胞移植促血管新生作用无明显影响,而对血管新生所处的病变部位微环境有明显影响。
自1864年可卡因首次成功应用于眼科手术的表面麻醉以来,局麻药临床应用已超过一个多世纪的历史。局麻药神经传导阻滞麻醉的功效已在临床实践中获得广泛认可,但其所引起的神经功能障碍也引起越来越多麻醉医师的关注。本文就局麻药神经毒性影响因素和机制研究进行综述,为局
目的探讨内毒素性急性肺损伤(ALI)过程中P38丝裂原活化蛋白激酶(P38

LEE011研究购买 BMS-354825小白鼠 MAPK)的表达。方法腹腔注射脂多糖(LPS)20mg/kg建立小鼠ALI模型。心脏穿刺查血气分析,并获取肺脏标本,观察肺组织形态学改变。采用免疫组织化学法和Western blot技术检测小鼠肺组织中磷酸化P38MAPK的表达。结果与对照组比较,ALI组各时相点小鼠肺组织中磷酸化P38MAPK阳性表达明显增加,且在2h达到峰值,主要分布于浸润的炎症细胞、上皮细胞、血管内皮细胞。结论内毒素性ALI过程中启动了P38MAPK信号传导通路。
目的探讨高血糖加重脑梗死机制与Ras/Raf/丝裂原激活蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路的关系。方法通过大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)及大脑中动脉闭塞(MCAO)术造成大鼠糖尿病脑缺血模型。将大鼠分成假手术组、健康大鼠脑缺血组、2型糖尿病(T2DM)大鼠脑缺血组、PD98059组,每组12只。PD98059组于MCAO术前30min尾静脉注射PD98059(3mL/kg)。MCAO术后2h给各组大鼠做神经学评分,取脑组织标本。应用免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blotting)测定大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达,应用TUNEL检测神经细胞凋亡情况。结果除假手术组外,其他3组均有不同程度的神经功能缺损、神经细胞凋亡,且差异有统计学意义(P<0.

L-1的shikonin作用于细胞24 h后可使细胞皱缩、变圆,并出芽形成明显的凋亡小体,且其可时间依赖性的诱导procaspase-3的剪切。35μmol.L-1的shikonin作用于细胞12 h和24 h均可以诱导细胞产生ROS。ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低shikonin诱导的HeLa细胞的生长抑制和凋亡率;并且5 mmol.L-1 NAC可以上调由shikonin引起的pro-caspase-3的表达降低,下调由shikonin引起的p38蛋白的磷酸化。结论 Shikonin可以诱导HeLa细胞发生凋亡,ROS/p38信号通路参与了其凋亡的过程。
目的:探讨千金藤素(CEP)致Sprague-Dawley(SD)乳大鼠心肌细胞的凋亡作用及其信号途径。方法:应用MTT法检测千金藤素对心肌细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33342染色及Western blotting方法检测凋亡相关信号分子caspase-3,观察CEP致心肌细胞凋亡的作用;采用Western blotting法观测CEP对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子c-Jn氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38MAPK磷酸化水平的影响,并利用ERK和p38

Selleckchem KU-55933 MAPK的特异性抑制剂,分别验证两种分子所介导的信号通路在CEP致心肌细胞凋亡中的作用。结果:(1)CEP能够剂量依赖和时间依赖地抑制心肌细胞的活性。(2)CEP作用于心肌细胞,出现细胞核碎裂现象和caspase-3激活。(3)CEP作用下p38 MAPK和ERK磷酸化水平显著增强,JNK的磷酸化状态未发生显著改变。(4)p38 MAPK磷酸化抑制剂SB203580显著减轻CEP对心肌细胞活性的抑制作用;ERK磷酸化抑制剂PD98059不能影响CEP对心肌细胞活性的抑制作用。结论:p38 MAPK参与CEP致心肌细胞凋亡作用。
目的通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型,以模拟在体心肌缺血再灌注损伤,观察脂联素(APN)对心肌细胞缺氧/复氧内质网应激所致心肌细胞损伤的保护机制,为心脏缺血/再灌注损伤的防护提供理论依据。方法采用胰蛋白酶消化法原代培养乳鼠心室肌细胞,通过心肌α肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。选用培养72 h的单层心肌细胞,实验分为5组:正常对照组、单纯H/R组、H/R+30 mg/L APN组、H/R+30 mg/L APN+5 mmol/L SB203580(p38 MAPK抑制剂)组、H/R+5 mmol/L SB203580组。实验终止后,在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态的变化,采用化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,用RT-PCR和Western

HDAC inhibition blot测定内质网应激指标GRP78、Caspase-12的表达。结果与空白对照组相比,单纯H/R后,细胞生长状态较差,内质网应激蛋GRP78、Caspase-12的蛋白和mRNA表达明显增高,LDH的释放量增加;APN预处理后进行H/R,可较大程度地逆转上述指标变化,与H/R组相比具有显著性差异(P
目的探讨重组人红细胞生成素(rhEPO)预处理对缺氧/复氧后SK-N-SH神经母细胞凋亡的影响及丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路的作用。方法 www.selleckchem.cn/products/DAPT-GSI-IX.html SK-N-SH细胞随机分成对照组、Cocl2组、rhEPO组和SB203580组。MTT法测定细胞增殖,RT-PCR技术检测bcl-2、caspase-8、和P38MAPK mRNA的表达。结果 rhEPO预处理可以增加SK-N-SH细胞的增殖能力,上调bcl-2和P38MAPK基因的表达,下调caspase-8的表达,而这些调节作用可被SB203580抑制。结论 rhEPO预处理对缺氧/复氧后的SK-N-SH细胞有保护作用,P38MAPK通路起到重要的作用。
目的探讨健脾解毒方对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染人胃癌MKN45细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达及其p38MAPK信号通路的调控机制。方法采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)和Westernblot检测Hp标准株NCTC11637感染对人胃癌MKN45细胞COX-2 mRNA和蛋白表达的影响及健脾解毒方药物血清的调控作用;运用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路,观察Hp对MKN45细胞COX-2 mRNA和蛋白表达的影响;观察健脾解毒方对Hp感染激活的p38MAPK信号通路及其下游活化转录调控因子2(activating transcription factor2,ATF-2)表达的影响。结果 Hp感染人胃癌MKN45细胞后,COX-2 mRNA和蛋白表达均明显高于空白对照组(P
目的探讨MAPK信号转导通路在CdCl2、HgCl2诱导RAW264.7细胞低剂量兴奋效应过程中的作用。方法以0、0.0005、0.005、0.05、0.5、5、50和500μmol/L浓度的氯化镉(CdCl2)和氯化汞(HgCl2)分别染毒RAW264.

020,r=0.138), p-S6K1的表达存在组织学分级之间的差异(p=0.029,r=0.044), p-mTOR和p-S6K1与ki-67的表达存在统计学差异(p值分别为0.028和0.011,r值分别为-0.130和-0.151)。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.000)与无病生存率相关。无病生存的Log BX-795数据表 Rank检验的X2值分别为0.274,0.920和0.144,p值分别为0.619,0.337和0.704, p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的表达与无病生存率之间无明显统计学差异。结论：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。磷酸化4EBP1和S6K1在细胞浆中表达增高可能与乳腺癌的发生相关。p-4EBP1的表达可能是维、汉民族之间差异的原因之一；4EBP1和S6K1的表达不能作为乳腺癌预后的独立指标。

第二部分：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1蛋白表达在转录水平的调控研究 目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1蛋白在新疆维汉乳腺浸润性乳腺癌组织中的表达情况,以及是否受其相应mRNA表达的调控。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者癌组织与癌旁组织病理切片,使用免疫组化方法染色,通过染色结果评价磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况。选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用Western-blot蛋白检测方法检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况。随机收集2012年1月至2012年6月期间126例就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的新鲜乳腺癌及癌旁组织标本,使用荧光定量rtPCR方法检测mTOR、4EBP1和S6K1在癌组织和癌旁组织中的mRNA水平并进行对照研究。结果：新疆维、汉族浸润性乳腺癌组织和癌旁组织病理切片中p-mTOR的表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285),p=0.001;

确认细节 p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,P值均小于0.01,差别均有显著统计学差异,p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织。Western-blot结果提示p-mTOR在癌组织中表达的灰度平均值是1.490,癌旁组织是0,p=0.001;p-4EBP1在癌组织中表达的灰度平均值是1.759,癌旁组织是1.676,p=0.725;p-S6K1在癌组织中表达的灰度平均值是4.407,癌旁组织是3.657,p=0.473,三者在癌组织中的表达均高于癌旁组织。mTORmRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是14.83、19.78,

t=-1.376, p=0.174; S6K1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是66.06,87.51, t=-1.15, p=0.254;4EBP1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是12.70、10.33,t=0.379,p=0.706,三者差异均无明显统计学意义(p>0.05)。结论:mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织,该信号通路在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1mRNA在癌组织中的表达未见明显增高,其相应蛋白质表达的调控位点可能位于转录后水平或蛋白质水平。 第三部分：mTOR信号及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维、汉不同民族浸润性乳腺癌中表达的差异研究目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维吾尔族和汉族浸润性乳腺癌组织中的表达差异情况。方法：随机选取285例于2005年3月1日-2009年9月30日就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者癌组织病理资料,使用免疫组化方法检测磷酸化的mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况；选取63例维、汉新鲜乳腺癌组织样本,使用荧光定量rtPCR方法进一步检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的mRNA表达状况。结果：免疫组化染色结果显示,在维吾尔族和汉族乳腺癌组织中,p-mTOR的表达阳性率分别是54%和46%(p=0.067), 所以 p-4EBP1的表达阳性率分别是62%和38%(p=0.020),p-S6K1的表达阳性率分别是49%和51%(p=0.695)。荧光定量rtPCR结果显示,维、汉乳腺癌组织中mTORmRNA2－ΔΔct平均值分别为10.88和19.7,差异有统计学意义(p=0.045),4EBP1mRNA2－ΔΔct平均值分别为52.72和80.74,差异无统计学意义(p=0.128),S6K1mRNA2－ΔΔct平均值分别为7.97和17.92,差异无统计学意义(p=0.404)。结论：在mTOR信号通路中,p-mTOR和p-S6K1蛋白的表达无明显维、汉民族差异,而p-4EBP1在维吾尔族中的表达显著升高,且存在统计学差异,可能成为研究维、汉不同民族之间乳腺癌差异及个体化治疗的新方向。维、汉之间mTORmRNA表达水平存在差异,但因P值接近0.

01);与模型组相比,香砂六君子汤组大鼠胃黏膜TLR2,TLR4,p-P38MAPK蛋白以及细胞核内NF-κB蛋白表达逐渐降低,以高剂量组降低最为明显(P
目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对人鼻黏膜上皮细胞分泌黏蛋白MUC5AC的促进作用及其分子机制。方法体外培养人鼻黏膜上皮细胞,用1、10、100μg/ml 没有 SEB孵育细胞0~24 h,ELISA法检测培养上清中MUC5AC;Western blotting分析p38的磷酸化。最后采用20μmol/L p38抑制剂SB203580处理人鼻黏膜上皮细胞,观察其在介导MUC5AC分泌中的作用。结果 1、10、100μg/L SEB作用鼻黏膜上皮细胞24 h后,MUC5AC含量分别为(62.40±20.12)、(128.45±14.07)、(312.74±30.58)μg/L,未经SEB处理的鼻黏膜上皮细胞MUC5AC量为(22.34±6.32)μg/ml,不同浓度SEB作用的鼻黏膜上皮细胞分泌SEB量均高于未经SEB处理的细胞,差异有统计学意义(P均
用血清调理的酵母聚糖（ｓｅｒｕｍ－ｏｐｓｏｎｉｚｅｄ　ｚｙｍｏｓａｎ　，ｓＯＺ）刺激多性核白细胞（ＰＭＮ）引起的Ｏ２－产生受到ｐ３８ＭＡＰＫ抑制物（ＳＢ２０３５８０），ＰＩ３－Ｋ抑制物（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）和ＰＫＣ抑制物（ＧＦ１０９２０３Ｘ）的明显抑制，这些抑制物也明显引起ｓＯＺ诱导的一种ＮＡＤＰＨ氧化酶的胞浆成分

ｐ４７ｐｈｏｘ的磷酸化。可是流式细胞分析表明，ＳＢ２０３５８０和 ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ使吞噬作用减弱，而 ＧＦＩＯ９２０３Ｘ使吞噬作用增强。这些结果表明，虽然ＰＩ３－Ｋ和ｐ３８ ＭＡＰＫ都参与ＮＡＤＰＨ氧化酶激活和吞噬作用的信号传导，但ＮＡＤＰＨ氧化酶激活的信号传导途径与吞噬作用的信号传导途径不同。
目的:研究p38和p42/p44 Ca~(2+).钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CCDPK)信号通路对过氧化氢(H_2O_2)诱导牛主动脉内皮细胞(BAEC)凋亡的调节作用.方法:H_2O_2处理BAEC 24 h后,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数.MTT法测定细胞活性,琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解,蛋白质印迹法检测磷酸化p38和p42/p44

CCDPK表达.结果:H_2O_2诱导BAEC产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染,核碎裂)和DNA断片.H_2O_2(100-500μmol·L~(-1))浓度依赖性刺激磷酸化p42/p44和p38 CCDPK的表达.p42/p44 CCDPK抑制剂U0126显著增强H_2O_2致凋亡作用;然而p38 CCDPK抑制剂SB203580可增强H_2O_2诱导的磷酸化p42/p44 CCDPK的表达,但不影响BAEC的存活.结论:p42/p44 CCDPK对H_2O_2诱导的BAEC凋亡起保护作用,而p38 CCDPK不是介导H_2O_2所致细胞凋亡的主要信号通路.
目的:研究肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导牛主动脉内皮细胞(BAEC)凋亡及其信号途径。方法:BAEC培养并传代于DMEM。经TNF-α处理24h后,Hoechst33258染色,荧光显微镜观察形态学变化及凋亡细胞计数。MIT法测定细胞活性,琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解,Western 这个 blot法检测磷酸化p38和p44/42CCDPK表达。结果:TNF-α诱导BAEC产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染,核碎裂)和DNA断片。TNF-α(100-5000kU/L)浓度依赖性诱导BAEC凋亡,并同时刺激磷酸化p44/42和p38CCDPK的表达.p44/42CCDPK抑制剂U0126可完全阻断TNF-α诱导的p44/42CCDPK的活化,显著增强TNF-α致凋亡作用;而p38 CCDPK抑制剂SB203580可完全阻断TNF-α诱导的p38CCDPK的活化,还可增强TNF-α诱导的磷酸化p44/42CCDPK的表达,明显抑制TNF-α促凋亡作用。结论:TNF-α同时激活p38和p44/42CCDPK,这两种CCDPK信号通路在TNF-α诱导BAEC凋亡中起相反作用。
目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路在络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)蛋白表达中的作用及通络药物保护血管内皮,防治血管病变的作用机制。方法首先建立络气虚滞型血管内皮功能障碍(VED)大鼠模型,用模型大鼠血清体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞株,实验分为5个组:空白对照组、正常血清组、模型血清组、通心络(TXL)组、SB203580组。采用Western

PF-04217903半抑制浓度 blot技术检测各组中F-actin、p38、磷酸化p38(phospho-p38)蛋白表达的变化。结果与空白对照组和正常血清组比较,模型血清组F-actin的蛋白表…
Background Cathepsin S and its endogenous inhibitor cystatin C are implicated in the pathogenesis of atherosclerosis,especially in the plaque destabilization and rupture leading to acute coronary syndrome.However, whether circulating cathepsin S and cystatin C also change in association with coro…
Introduction:Smoke-inhalation injury causes a destruction ofthe ciliated epithelium that lines the tracheobronchial tree.Casts produced from these cells,polymorphonuclear leukocytesand mucus can cause upper-airway obstruction,contributing topulmonary failure.We have reported that a combination o…

61±0.57%和2±0.22%。通过CFCs (cloning forming cells)检测发现Rapamycin对于粒-巨细胞形成集落,爆式红细胞集落的生成没有显著的影响。对衰老表型的研究发现,在未扩增的对照的细胞中,我们几乎没有发现衰老的细胞,细胞在Veh的处理下,扩增了10天以后,Lin-Sca-1+细胞出现了9.7±1.95%的衰老细胞,但是Rapamycin非常明显的抑制了衰老细胞出现的频率,为2.4±0.71%。对自噬的研究发现,经过Rapamycin处理以后,自噬标志性分子LC3b的表达面积显著低于Veh组,甚至比未扩增的细胞还要低；对细胞周期的研究发现,Rapamycin处理显著的增加了G0期细胞的比例,Veh组的G0期细胞的比例为11.75±3.3%,Rapamycin组的G0期细胞的比例为21.7±3.5%。不仅如此,Rapamycin的处理还减低了p16和p53的表达。 所以 结论：抑制mTORCl活性并没有影响造血干细胞的凋亡和分化,而显著降低了其在扩增过程中出现的衰老。Rapamycin并没有通过增强自噬来抑制衰老,而是通过调节了一系列的细胞周期动力因子和阻滞因子实现了对衰老的抑制。

第四部分mTORCl和p38 MAPKα在造血干细胞体外扩增过程中的相互对话关系 目的：在我们以前的研究中发现了抑制p38 MPKα的活性可以通过抑制衰老促进造血干细胞的体外扩增,而在这里我们发现了抑制mTORCl的活性也是主要通过抑制衰老的作用而促进了造血干细胞的体外扩增,那么两者的关系究竟如何呢?在这部分的研究当中我们对mTORCl和p38 MAPKα相互对话关系进行了深入的探讨和研究。 方法：分选小鼠骨髓Lin-Sca-1+细胞,应用无血清培养基添加细胞因子的培养体系体外扩增分选的干祖细胞,应用Rapamycin作为mTORCl抑制剂,SB(SB203580)作为p38 MAPKα的抑制剂,以DMSO作为对照。扩增10天,SB从第一天开始加,在第6天加入DMSO以及Rapamycin。10天以后,收集扩增后细胞。通过免疫印迹,免疫荧光,聚合酶链式反应等方法检测相关分子表达情况。 结果：在造血干细胞体外扩增过程当中,抑制mTORCl对p38 MAPKα没有影响,但是抑制p38

MAPKα活性会反而增强mTORCl的活性。联合抑制mTORCl和p38 MAPKα可以进一步促进造血干细胞的体外扩增。四组比较发现,Veh组获得了1.5±0.3×103,Rapamycin组获得了1.9±0.1×103,SB组获得了2.2±0.2×103,联合处理组获得了2.6±0.14×103的LSK+细胞,以及更多的day35 CAFCs,分别为3.4±0.57,7.8±0.32,9.7±0.21,11.4±0.63/100,000个扩增细胞。联合抑制mTORCl和p38 MAPKα,通过对SA-β-gal的研究发现SB和Rapamycin的联合应用明显的进一步降低了衰老表型的表达,只有1.9±0.7%,而单独加入Rapamycin或者SB则有4.3±2.1%,5.2±1.6%,联合抑制以后p16和p53的表达进一步降低,只有Veh组的0.37±0.05,0.45±0.08倍。 结论：在造血干细胞过程中抑制mTORCl对p38 而且 MAPK a活性没有影响,而抑制p38 MAPKα活性会进一步激活mTORCl,同时抑制两条通路可以通过增强抑制衰老达到进一步促进造血干细胞扩增的目的。
疾病的发生发展几乎总是引起不同程度的疼痛发生。尽管已有多种药物和方法可用来进行疼痛治疗,但其效果并不理想。因此寻求新的疼痛调节因子并进行干预治疗具有重要的临床意义。伤害性刺激或神经损伤诱导的炎症免疫反应与疼痛发生发展关系密切。MIF是参与几乎所有炎症性疾病过程的促炎性细胞因子,有研究提示MIF是神经损伤后再生与功能恢复的重要参与者。鉴于神经损伤与疼痛之间的因果联系,推测MIF可能在疼痛发生发展过程起着敏化神经及降低痛阈的作用。

CYC202浓度 本研究通过建立急性炎症性疼痛和慢性神经病理性疼痛模型,鞘内给药MIF互变异构酶小分子抑制剂ISO-1观察疼痛阈值变化与脊髓MIF水平之间的关系,进而分析MIF介导疼痛病理发生的可能信号活化机制。这为疼痛治疗潜在干预靶点提供线索,并为MIF相关疼痛药物的开发提供理论基础。整个研究分为如下三个部分： 一.MIF参与福尔马林诱导急性炎症性疼痛阈值的调节及其机制 通过福尔马林诱导炎症性疼痛模型大鼠鞘内给药不同剂量MIF小分子抑制剂ISO-1,发现福尔马林诱导的二相疼痛行为学改善呈现ISO-1剂量依赖性变化。伴随着福尔马林诱导疼痛行为学变化,大鼠脊髓背角MIF及其受体CD74蛋白表达呈现时间依赖性上调特征；同时脑脊液MIF水平在福尔马林注射后第二时相后期显著增加；而ISO-1的应用使得脊髓背角MIF及CD74表达下调,这说明脊髓MIF水平的变化参与福尔马林诱导炎症性疼痛的发生发展。在此基础上,应用蛋白印迹技术发现ISO-1可以显·著抑制ERK、p-p38 MAPK及NR2B表达；而ERK与p38 MAPK抑制剂又可显著下调NR2B蛋白表达,这说明ERK-p38 MAPK-NR2B信号通路的活化参与了MIF介导福尔马林诱导炎症性疼痛的病理发生过程。进一步地,通过免疫组化方法检测了脊髓背角MIF、CD11b、CD3的表达变化,结果发现MIF与CD11b共表达于脊髓背角,这说明福尔马林诱导炎症性疼痛大鼠脊髓背角MIF高表达来源于脊髓小胶质细胞。为了证明抑制MIF互变异构酶活性与抑制其生物活性等效,即鞘内ISO-1的应用是否有效抑制MIF生物活性,本研究以多巴铬甲酯为互变异构酶活性检测工具,进行了MIF互变异构酶活性与MIF生成之间的相关性观察,结果显示ISO-1抑制MIF互变异构酶活性的作用与抑制MIF生成的作用一致,从而证明选择MIF互变异构酶小分子抑制剂作为MIF相关性疼痛治疗与药物开发切实可行。 二.

0系统软件进行统计分析。 结果 在血浆BUN、Cr、DAO表达的比较方面，随着再灌注时间的延长,

IRI组的BUN、DAO及Cr值逐渐升高,3h达高峰,以后开始下降,12h仍高于Sham组(各时点均P<0.01)；SMB组与IRI组相比,前者各时点均明显降低(P<0.05)；而SMB组与IPO组比较，各指标在1h、3h、6h这三个时点均体现出SMB组在降低各指标方面优于IPO组，同时两组指标均有一定程度的降低；ELISA法检测肾组织中TNF-α、IL-1β含量也表现出与以上指标相同的趋势；肠缺血再灌注后肾组织p38MAPK的活化表达方面，选择指标变化最明显的3h作为研究对象，结果显示肠缺血再灌注3h后，肾组织中p38MAPKs活化明显增多，与假手术组比较差异有统计学意义（P<0.01），SMB组及IPO组较IRI组表达减少（P<0.05），SMB组与IPO组比较两组有统计学意义（P
目的 观察厄贝沙坦对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响，并探讨其与细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）通路的关系。 CHIR258 方法 健康雄性SD大鼠（体重250-300g）54只，随机分为5组：①假手术组（n=6）：在左冠状动脉前降支（LAD）下方穿线，但不结扎，观察150min；②缺血再灌注组（n=12）：结扎LAD30min，再灌注120min；③缺血预处理组（n=12）：缺血前阻断LAD5min，再灌注5min，重复3次，余同缺血再灌注组；④厄贝沙坦组（n=12）：厄贝沙坦30mg/kg·d灌胃1周后余操作同缺血再灌注组；⑤厄贝沙坦+PD-98059(PD)组（n=12）：PD-98059于再灌注前15min尾静脉注射，余同厄贝沙坦组。未给药组给予等量生理盐水灌胃。实验结束后用TTC染色测定心肌梗死面积；HE染色观察心肌组织形态结构；TUNEL法检测细胞凋亡指数；免疫组化法检测心肌组织Bcl-2、Bax蛋白表达；Western

KRX-0401分子量 blot法测定p-ERK的蛋白水平。 结果 1、厄贝沙坦对心肌梗死面积的影响 与缺血再灌注组比较，缺血预处理组和厄贝沙坦组心肌梗死面积明显降低（P<0.01），差异有显著统计学意义；与缺血再灌注组比较，缺血预处理组和厄贝沙坦组凋亡指数明显降低（P
目的 近年来大量研究表明，冠心病(coronary heart disease, CHD)的形成及发展过程中，内皮细胞的损伤起了推动作用，血管内皮祖细胞（Ensothelial ProgenitorCells,EPCs）是一类参与内皮损伤的修复过程的内皮细胞的前体细胞，脂联素（Adiponectin,APN）能否影响内皮祖细胞数量和功能，直接或间接提升血管内皮损伤的修复能力，促进内皮细胞数量和功能的恢复，进而延缓动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）病变的发生发展？本文通过酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术分析法测定冠心病患者外周血APN、CD34~+/CD309~+EPCs的水平，分析其在冠心病不同临床类型和不同病变程度中的变化趋势。同时选取正常人作为对照，观察冠心病上述两种指标在血管内皮损伤中的作用大小。通过给予口服降脂药物后随访2周，测定上述因子，探讨降脂药物除了调脂作用外的对APN、EPCs数量及功能恢复方面的作用。

方法 将来自2011年10月至2012年3月于我院心内科经皮冠状动脉造影术（CAG）确诊为冠心病的患者120例，其中急性冠脉综合症（ACS组）45例，稳定型心绞痛（SAP组）51例，并选择24例健康者为对照组，ACS组入院即刻、SAP组于入院次日清晨抽取空腹肘静脉血，送检血糖、血脂等基本指标；抽取新鲜的肝素钠抗凝外周空腹血标本各100μl，分别加入离心管中标记A、B管，取A管作阴性对照，B管加入10μl FTIC标记的CD34抗体及10μl Alexa Fluor标记的CD309（VEGFR-2）单克隆抗体，流式细胞术分析法检测CD34~+/CD309~+EPCs所占全血中的比例；上述抗凝血标本取2ml，即刻室温静置30min，3000r／min离心10-15min取血浆，置-80℃冰箱保存，采用ELISA法测定脂联素的水平；对所有冠心病患者给予瑞舒伐他汀钙（10mg1/晚）干预，2周后门诊随访，再次应用上述方法检测外周血APN和CD34~+/CD309~+EPCs所占全血中的比例，观察降脂药对APN、EPCs数量及功能改善方面的价值。 已经 结果 (1)研究对象的基线资料各个组别在年龄、性别、体重、吸烟、血脂、血压、肌酐、尿素氮、空腹血糖等危险因素方面均无明显的差别(P＞0.05)。 (2)应用瑞舒伐他汀钙干预前，ACS组外周血中脂联素、CD34~+/CD309~+EPCs水平均低于SAP组和对照组，差异显著，有统计学意义（P<0.01），SAP组与对照组其两种指标比较，亦有统计学意义(P0.

pylori)是胃部感染最常见的病原微生物,全世界的平均感染率在50%左右,高发地区集中在东亚,包括我国还有日本和韩国。导致急慢性胃炎、胃溃疡、胃癌和胃黏膜相关性淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue, MALT)等。1994年幽门螺杆菌被世界卫生组织(World Health Organization, WHO)和国际癌症研究机构(TheInternational Agency for Research on Cancer, IARC)列为Ⅰ类致癌因子。胃癌在所有的癌症中排在第四位,但致死率排在第二位,且预后不良。胃癌发生与幽门螺杆菌感染密切相关。 幽门螺杆菌感染宿主后引起胃炎过程中,会使体内Th1/Th2平衡偏向于Th1反应,导致大量Th1型细胞因子的产生,其中包括IFN-γ(Interferon-gamma)。IFN-γ是Th1反应中的关键分子,也是Th1反应中产生最多的免疫分子,是免疫活化的标志分子。正常情况下的人体组织或血清中不含有IFN-γ,只有在某些特定因素的刺激下才能诱导其产生。来源于临床标本和动物模型的证据显示幽门螺杆菌感染所致胃炎患者胃黏膜表面有高水平的IFN-γ。体外细胞试验也显示幽门螺杆菌或幽门螺杆菌的组分刺激细胞后,细胞产生IFN-γ,然而,细胞产生IFN-γ的机制尚未知。

因为 对于IFN-γ在幽门螺杆菌感染引起的胃炎中所起的作用和起作用的机制,有研究者进行了研究。虽然Shimizu et al在儿童感染幽门螺杆菌的病例中发现IFN-γ和炎症细胞浸润没有关联,但Antonia et al发现成人感染幽门螺杆菌后具有高水平的IFN-γ且IFN-γ和单核细胞浸润有显著的联系。动物实验表明IFN-γ在幽门螺杆菌感染过程中可降低细菌粘附率,对于清除细菌具有重要的作用,所以IFN-γ起着保护性作用；但是若长期感染幽门螺杆菌,IFN-γ起着诱导胃炎的作用。单就IFN-γ对幽门螺杆菌所起的作用还未有研究,特别是IFN-Y在幽门螺杆菌感染引起胃癌中起作用及作用的机制少有研究。 胃癌发生发展过程中另一个重要的因素是胃癌细胞的增殖。有人报道癌细胞对IFN-γ不敏感,但大部分研究者持相反的观点。IFN-γ是一种致炎因子,IFN-Y在引起炎症的过程中起诱导作用,大部分研究显示它对癌细胞的增殖起负向调控作用。有报道称IFN-γ可以通过直接或间接地方式引起癌细胞的凋亡,如引起胃癌、脑胶质瘤、多发性骨髓瘤和宫颈癌等细胞的凋亡。它还可引起细胞的衰老、导致细胞周期变化、降低癌细胞的侵袭能力以及影响一些基因如编码促分泌剂3A1

(Secretoglobin 3A1, SCGB3A1)、骨桥蛋白(Osteopontin, OPN)、趋化因子CXCL10(IFN-γinducible Natural产品 Library查找购买 protein-10, IP-10)等基因的表达、影响基因的修饰如信号传导子及转录激活子(signal transducer and activator of transcription, STAT1)的磷酸化等。IFN-Y对胃癌细胞的衰老、细胞周期变化是否有影响,是否影响基因的表达,影响哪些基因的表达还未见报道。 幽门螺杆菌感染胃黏膜细胞后,幽门螺杆菌、宿主的免疫和胃癌细胞的增殖是胃癌发生发展的重要因素。有鉴于此,本研究首先探讨了幽门螺杆菌感染胃粘膜上皮细胞系胃癌细胞引起细胞产生IFN-γ的信号途径,然后从IFN-γ调节幽门螺杆菌的蛋白质表达和对胃粘膜上皮细胞系胃癌细胞的影响入手研究IFN-γ在幽门螺杆菌感染引起胃癌中所起作用及其机制。 一.幽门螺杆菌诱导胃粘膜细胞产生IFN-γ 细胞因子主要由免疫细胞产生,但随着研究的深入发现癌细胞和分泌细胞如黏膜细胞也能产生某些细胞因子。以前的研究显示感染幽门螺杆菌的胃黏膜具有大量的IFN-γ,除了免疫细胞产生的IFN-Y,我们通过体外细胞试验从RNA水平和蛋白水平证实胃癌细胞感染幽门螺杆菌后亦能产生IFN-γ。我们将幽门螺杆菌感染细胞后,幽门螺杆菌的主要毒力CagA (cytotoxin-associated gene A)阳性质粒转染胃癌细胞,胃癌细胞亦能产生IFN-γ。CagA (cytotoxin-associated gene A)阳性质粒转染胃癌细胞后,加入MEK/ERK、Src、P38和NF-KB的抑制剂,发现加入MEK/ERK、P38和NF-KB抑制剂后,IFN-γ的产生受到抑制,说明幽门螺杆菌刺激IFN-γ的产生依赖于这三者参与的信号途径。这有助于解释感染幽门螺杆菌的胃黏膜具有大量的IFN-Y。

二·IFN-γ影响幽门螺杆菌的蛋白质表达 幽门螺杆菌感染胃部后,受到酸、胆汁、盐和N0等人体环境因子的胁迫,会产生相应的反应。除了以上因素,幽门螺杆菌也暴露于人体的免疫环境中。免疫分子IFN-γ结合绿脓杆菌并上调其主要毒力,通过Blast比对,我们推测IFN-γ结合幽门螺杆菌,IFN-γ是否调节幽门螺杆菌的毒力表达值得探讨。我们首先把对数期的幽门螺杆菌暴露于IFN-γ中,发现IFN-γ不影响幽门螺杆菌的生长、增殖和形态变化。但是我们把对数期的幽门螺杆菌暴露于IFN-γ2h,用间接免疫荧光的方法发现IFN-γ结合于幽门螺杆菌的表面。然后我们用双向凝胶电泳技术获得幽门螺杆菌暴露于IFN-γ6h的蛋白质表达谱,发现IFN-γ可以影响该菌的某些蛋白表达,如参与DNA复制的蛋白、参与蛋白翻译和递呈的蛋白、压力蛋白等,其中还包括幽门螺杆菌的主要毒力蛋白CagA。 DZNeP化学结构 三.IFN-γ下调幽门螺杆菌的主要毒力蛋白CagA 在双向凝胶电泳结果的基础上,我们又用RT-PCR、实时荧光定量PCR以及Western Blot方法进一步验证了IFN-Y可以使幽门螺杆菌的主要毒力CagA下调。CagA是幽门螺杆菌的主要和重要毒力,它可以增加胃癌的风险。CagA被细菌的VI型分泌系统注入细胞,进入细胞的CagA有磷酸化和非磷酸化状态,磷酸化和非磷酸化状态都对细胞有损伤的功能,磷酸化CagA能引起细胞的蜂鸟状改变。所以我们把暴露于IFN-γ的幽门螺杆菌感染胃癌细胞,Western Blot鉴定细胞内的磷酸化和非磷酸化状态的CagA,并观察细胞形态的变化。结果发现幽门螺杆菌暴露于IFN-γ后再感染细胞,细胞内的磷酸化和非磷酸化状态的CagA都下降,细胞的蜂鸟状改变的比率也下降。因为磷酸化CagA可以使鼠特异性的发展成胃肠肿瘤,所以我们的试验体外证明了IFN-Y下调幽门螺杆菌的主要毒力蛋白CagA,且具有细胞生物学效应,从而降低胃癌的风险。 四.

05)。结论:本研究中提供的实验证据表明,ZFP580可以作为缺氧环境下的新型调节分子。我们证实,ZFP580通过抑制线粒体凋亡途径在TGF-β1介导的抗化学缺氧诱导的细胞损伤中发挥重要的抗凋亡保护作用。
目的:调控血管平滑肌(VSMC)表型转换是防治PCI术后再狭窄的新策略,micro RNA作为VSMC表型转换的调节因子,可通过转录后水平调控下游靶基因的的表达从而影响VSMC的表型转换。本组首先克隆的C2H2型锌指核转录因子ZFP580可调控内皮细胞及VSMC的增殖及迁移而影响血管重塑。本组新近实验证明:micro

RNA-206既可靶向调控ZFP580的表达,又可促进VSMC从收缩型向合成型转换。本实验拟采用micro RNA-up与micro RNA-down技术,观察micro RNA-206表达水平的变化对大鼠VSMC分化功能的影响,并验证其可能的分子机制。方法:提取分离大鼠VSMC,通过形态学观察及免疫组化法进行鉴定。生物信息学分析ZFP580与mi R-206的结合位点。利用TGF-β(根据文献参考选取2ng/ml)对大鼠VSMC进行不同时间点刺激,对照组选用等量的DMEM。Realtime-PCR测定mi R-206的表达水平;Western-blot检测ZFP580、SMa-actin、SM22a、Smad2/3、phospho-Smad2/3的表达水平;使用慢病毒过表达或低表达mi R-206、慢病毒过表达或低表达ZFP580和应用SB431542抑制剂后检测相关指标;荧光素酶报告实验(Luciferase)检测mi R-206与ZFP580 3‘UTR的结合作用。结果:(1)在大鼠VSMC加入适宜的TGF-β(根据文献参考选取2ng/ml)进行预处理,分别刺激大鼠VSMC 6h、12h、24h、48h,对照组中加入等量的DMEM。利用Realtime-PCR测定mi R-206的表达水平,结果发现在12h的时候mi FAK inhibition R-206的水平降至最低点,与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。Western-blot检测ZFP580的表达水平,结果显示同样在12h时ZFP580的表达水平达到最高,与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。与此同时,Western-blot检测SMa-actin、SM22a的表达水平结果显示:SMa-actin、SM22a的表达较对照组相比均不同程度的降低(P<0.05)。(7)过表达或低表达ZFP580慢病毒感染大鼠VSMC72h后。Western-blot检测ZFP580的表达水平,结果显示:高表达ZFP580感染组与对照组相比,SMa-actin与SM22a的表达水平上调(P<0.05),低表达ZFP580感染组与对照组相比,SMa-actin、SM22a的表达水平显著上升(P
目的TGFβ1即转化生长因子beta1是一种小分子蛋白因子,有报道显示TGFβ1在炎症局部组织中分泌量显著增加,并在局部组织的伤口愈合以及促使纤维化过程中扮演着重要角色。然而,TGFβ1在外周伤害性感觉传递过程中所起的作用尚不太清楚。本研究旨在探讨TGFβ1对外周初级感觉神经元兴奋性的急性作用及其在慢性胰腺炎大鼠的痛觉过敏中扮演的角色。方法1.在180-200

g雄性SD大鼠胰管内注射三硝基苯磺酸(TNBS)诱导慢性胰腺炎(CP)模型。2.胰腺壁注射荧光素(Dil)逆行标记胰腺特异性背根神经节(DRG)神经元。运用全细胞膜片钳方法研究TGFβ1对胰腺相关DRG神经元膜电位和兴奋性的作用。3.运用钙成像方法研究TGFβ1对胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度的影响。4.运用Western 很少 Stem Cell Compound Library数据表 Blotting检测TGFβ1及其受体在大鼠胰腺和胰腺相关节段DRG(T9-T13)中的表达水平。5.运用Von frey filament(VFF)评测正常大鼠或CP大鼠在注射药物前后痛行为反应。结果1.全细胞膜片钳记录显示,灌流TGFβ1引起胰腺特异性DRG神经元细胞膜去极化并进一步诱发动作电位,升高神经元兴奋性;与对照组比较,灌流TGFβ1使CP大鼠胰腺相关DRG神经元去极化及放电更加显著。2.钙成像结果显示,灌流TGFβ1可使正常大鼠胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度上升;与对照组比较,灌流TGFβ1使CP大鼠胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度上升更加显著。3.与对照组比较,CP大鼠胰腺中TGFβ1及其前体表达水平显著升高,胰腺相关DRG中的TGFβ1及其前体,TGFβI型和II型受体表达水平显著升高。4.鞘内注射TGFβ1诱发正常大鼠产生腹部痛觉过敏;鞘内注射TGFβ受体拮抗剂SB431542明显缓解CP大鼠的痛觉过敏。结论我们的研究提示TGFβ1对初级感觉神经元有急性的兴奋作用,在慢性胰腺炎大鼠外周神经系统中激活的TGFβ1/TGFβ受体信号通路参与介导慢性胰腺炎的痛觉过敏。这些结果以及后续的研究将有助于发现慢性胰腺炎疼痛治疗的新靶标。
目的:前期研究证实,补肾法、疏肝法具有提高体外受精-胚胎移植(in

vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)患者临床妊娠率、改善妊娠结局、提高卵母细胞质量的作用,本研究拟通过观察补肾法、疏肝法对IVF-ET患者体外培养卵巢壁颗粒细胞ACTA及其信号通路的调控作用,以探讨两法促进卵泡发育、提高卵母细胞质量作用机制及其途经的异同。方法:1含药血清制备补肾调经方、逍遥散方含药血清:选取年龄在20-30岁,身体健康,月经规律,B超显示有成熟卵泡,且无卵巢、子宫器质性疾病的女性志愿者10名,分别服用补肾调经方和逍遥散方。补肾调经方、逍遥散方服用方法是每日1剂,300ml,早晚分服。补肾调经方和逍遥散方连续服药3天,第4天清晨空腹服用全天剂量药物(服药前禁食12h),于末次服药1h后静脉取血5ml,室温静置2h,3000r/min离心10min,取上清,56℃水浴30 min灭活补体,0.

白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩，伸出长突起，类似神经元。免疫荧光显示MSCs及对照组细胞表达神经元NSE蛋白，诱导后细胞NSE、MAP-2蛋白阳性，但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。免疫印迹显示MSCs及对照组细胞轻度表达nestin、NSE蛋白，随着诱导时间延长，nestin的表达渐减弱，NSE和MAP-2的表达渐增强，但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。 Necrostatin-1订单 2.正常培养的MSCs不表达初级纤毛。经过预诱导或饥饿处理24h后，MSCs表达初级纤毛、蛋白Ptc1、Smo和Gli1，其中Smo和Gli1位于胞浆，Ptc1位于初级纤毛。白藜芦醇诱导后，Smo从细胞浆进入初级纤毛，Gli1从细胞浆进入细胞核，同时，Smo、Gli1蛋白的表达增加。在正常培养时，白藜芦醇不能促使Smo移位以及MSCs向神经元样细胞分化。当MSCs表达初级纤毛时，白藜芦醇以及Smo激动剂SAG可使Smo从胞浆进入初级纤毛，同时伴随MSCs向神经元样细胞的分化和蛋白Smo、Gli1的表达增强；加入抑制剂环杷明后，Smo仍主要表达于胞浆，蛋白Smo、Gli1的表达降低，MSCs向神经元样细胞的分化受抑制。

结论：1.白藜芦醇在体外可诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞。 2. MSCs表达初级纤毛并存在Shh信号，初级纤毛介导Shh信号调控MSCs的神经元样细胞分化。
目的胃癌在我国的发病率呈持续上升趋势,严重影响人类健康。目前研究证实, Hedgehog(Hh)信号通路可通过调控细胞周期，粘附侵袭，血管形成，凋亡等细胞事件参与多种肿瘤的的发生进展,胶质瘤相关癌基因1（Glioma-associated oncogene homolog，Gli1）作为该通路的效应因子,成为评价该通路活化程度的关键因子。血小板源性生长因子-D（Platelet-derived growth factor D，PDGF-D）作为强烈的促肿瘤血管形成因子，已被证实在多种肿瘤中异常高表达。但是Hh信号通路是否可以通过调控PDGF-D的表达来影响肿瘤血管形成尚不明确。本研究拟通过使用Hh信号通路特异阻断剂环巴明（Cyclopamine）处理胃癌SGC-7901细胞，观察处理前后Gli1和PDGF-D的mRNA和蛋白水平的变化及癌细胞体外形成血管管腔样结构的能力，来探讨Hedgehog信号通路调控肿瘤血管形成的可能机制。 方法常规培养人胃癌SGC-7901细胞和人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell，HUVEC），将SGC-7901细胞分为对照组A（未给药）、实验组B（环靶明终浓度5μmol/L）及实验组C（环靶明终浓度10μmol/L），培养48h后，免疫荧光检测各组Gli1和PDGF-D在SGC-7901细胞中的表达；通过小管形成试验和血管拟态试验检测细胞处理前后血管形成能力的变化； 确认细节 RT-PCR和Western-Blot检测细胞处理前后Gli1、PDGF-D的mRNA和蛋白表达变化，并对二者mRNA和蛋白表达水平进行相关性分析。

结果Gli1和PDGF-D在各组SGC-7901细胞中均有表达；实验组SGC-7901细胞的体外血管形成能力较对照组下降，且呈剂量依赖性，差异具有统计学意义（P<0.05）；实验组Gli1和PDGF-D的mRNA和蛋白表达较对照组均受到显著抑制，差异具有统计学意义（P
研究背景： 目前食管癌（Esophageal cancer）是全世界最常见的恶性肿瘤之一，在我国尤为突出，是发病率最高的国家。食管癌恶性程度高，且大部分患者得到临床确诊后已属晚期，预后极差，对于早期患者手术尽管是目前治疗的首先方式，但手术后容易复发及转移。癌细胞早期容易侵袭转移是其主要原因，另外，术后缺乏敏感的抑制肿瘤细胞的药物，常用的化疗药物靶向效应不强，副反应较重等也是食管癌患者生存率较低的重要原因之一。Hedgehog（Hh）信号通路由Hh-Ptch-Smo-Gli级联构成，当Hh蛋白配体与膜受体Ptch结合时，可以消除膜受体Ptch对Smo的抑制效应， LDN193189 Smo的激活又可进一步激活核转录因子Gli，从而诱导下游目标基因的表达。近年研究显示Hh信号通路与人类乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌等多种肿瘤的发病及转移密切相关，食管癌的Hh通路高度激活也已得到证实，但Hh通路与食管癌细胞转移能力的关系却缺乏深入的研究。已证实血管内皮细胞生长因子（VEGF）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与食管癌的发生、发展、转移密切相关，也有研究表明二者与Hh通路有密切联系，但具体作用机制的研究仍处于初级阶段。

目的： 本实验以食管癌EC109细胞系为研究对象，利用Hh信号通路特异性阻滞剂环巴胺（Cyclopamine）处理EC109细胞，然后观察细胞转移能力的变化及转移相关因子MMP-9、 VEGF蛋白表达水平的影响，并分析其可能的机制，为临床食管癌靶向药物的研究提供理论与实验依据。 方法： 1.培养EC109细胞为实验对象，用Hh信号通路特异性阻滞剂环巴胺（Cyclopamine）作用EC109细胞后，MTT法观察环巴胺对EC109细胞的抑制作用，并计算出相应的半数抑制率（IC50）。 2. Transwell小室法观察经环巴胺处理后EC109细胞的迁移、侵袭能力的变化。 3.体外血管生成实验观察环巴胺对EC109细胞在体外血管形成能力的影响。 4. RT-PCR方法检测食管癌细胞经环巴胺处理后的Gli-1mRNA表达变化。 5.Western blot方法检测食管癌细胞经环巴胺处理后Gli-1、MMP-9、VEGF蛋白的表达变化。 结果： 1.环巴胺处理EC109细胞后可以抑制其增殖及生长，细胞由饱满的梭形贴壁生长状态转变为轮廓不清的圆钝半贴壁状态，在一定浓度下抑制率随浓度增高而增大且具有相关性，且干预的时间越长，其抑制率也随之加大，在相当的范围内具有药物作用时间和作用浓度依赖性。作用2天后的IC50为12μmol/L。 2.在Transwell小室实验中我们发现，环巴胺阻断Hh信号通路后，与对照组相比，食管癌细胞的体外迁移、侵袭及血管形成能力显著下降，迁移出小室微孔膜的细胞数明显减少（32.80±6.77）vs（98.40±10.08），侵袭穿膜细胞数也明显减少（26.20±4.58）vs（83.40±8.65）；血管形成数减少（8.60±2.70）vs（19.40±4.