0%，GC型10.0%；哈族GG型91.7%，GC型8.3%，二者无显著性差异(χ~2=1.076P=0.30)；等位基因频率：维族G等位基因95.0%，C等位基因5.0%；哈族G等位基因95.9%，C等位基因4.1%。二者差异无显著性(χ~2=1.193P=0.28)。(3)并发现AIX值哈族显著高于维族(t=3.65P=0.01)，并且AIX随年龄增长而递增，同时哈族显著高于维族同年龄段并高于维族老年组。各民族以年龄段及性别分组未发现基因型及构成比有显著差异(P＞0.05)。不同基因型间维族组基线资料差异无统计学意义，但在哈族人群中收缩压、舒张压及AIX值差异有统计学意义。结论TGF1β+869T/C多态性分布存在民族差异，其可能影响AIX，并与哈萨克族血管硬化及衰老有关联。且哈族血管衰老相关改变早于维族。TGFβ1+915G/C多态性分布在两民族之间差异无显著性。
目的：观察抑瘤素M在哮喘大鼠气道壁中的表达,探讨抑瘤素M的表达与哮喘气道重塑的关系,为哮喘的防治寻找可能的靶点。

也许 方法：选用30只Wistar雄性健康大鼠,鼠龄8W,体重200-220g。将30只Wistar大鼠随机分为二组：对照组和哮喘组。第一天哮喘组用用抗原混悬液2m1(含卵白蛋白100mg,氢氧化铝200mg、灭活百日咳杆菌菌苗6×109个)腹腔注射致敏。第15天开始1%卵白蛋白溶液雾化激发,每天一次,每次20—30分钟,共8W,建立哮喘模型。对照组第一天用第1天用生理盐水2m1腹腔注射,第15天开始用生理盐水雾化吸入,余同哮喘组。末次激发结24小时后,取各只大鼠的支气管肺泡灌洗液行嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、中性粒细胞,淋巴细胞的分类计数。采取肺组织标本,采用HE染色观察气道形态学改变；采用免疫组化染色并经计算机图像分析测定气道壁中Oncostatin

M蛋白表达水平；同时采用RT-PCR法测定肺组织中Oncostatin M mRNA的表达。 结果：(1)哮喘组大鼠支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞浸润数为(9.21±1.24)与正常对照组比较(0.71±O..01),明显增加,差异具有显著统计学意义(P0.05)。病理证实哮喘模型基本成功。(2)哮喘组大鼠总管壁厚度(WAt/Pbm),气管内壁厚度(WAi/Pbm)及平滑肌层厚度(WAm/Pbm)分别为[(132.06±6.13)(81.52±1.55)(43.71±5.67)],与正常对照组[(79.84±2.40)(61.12±3.81)(16.78±2.13)]比较,显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05。(3)哮喘组肺组织中抑瘤素mRNA表达为(0.95±0.04),高于正常对照组的(0.45±0.16),差异具有统计学意义(P<0.01)。(4)抑瘤素M免疫组化染色阳性细胞表达强度,哮喘组(0.34±0.13)明显强于对正常对照组大鼠(0.15±0.05),差异具有统计学意义(P<0.01)。(5)气管壁抑瘤素M水平与哮喘组大鼠总管壁厚度,气管内壁厚度,平滑肌层厚度呈正相关(R值分别为0.768、0.532、0.745,P均0.05)。(6)哮喘组嗜酸性粒细胞数与抑瘤素M水平正相关,(R=0.970,P=0.000),而中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数与抑瘤素M水平无相关(R值分别为0.020、0.180、-0.256,P均>0.05) CP 690550 结论：在哮喘模型组大鼠OSM表达增高,与支气管肺泡灌洗液的嗜酸性粒细胞正相关和大鼠总管壁厚度,气管内壁厚度,平滑肌层厚度呈正相,提示OSM可能参与哮喘气道炎症反应和气道重塑发生。
目的 急性胰腺炎（AP）是一个具有潜在生命危险的急性炎症反应，由于其发病机制及病因尚未完全阐明，因此在治疗方面存在许多不足之处。白细胞过度激活及其产生的炎性因子的级联“瀑布式”反应被认为是重要的发病机制之一[1-1]。本实验拟通过移植体外培养的骨髓间充质干细胞（MSCs）到急性胰腺炎模型体内，观察体内免疫细胞的增殖分化、血清炎性因子水平及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路表达的改变，比较移植及其他不同处理后动物的死亡率及病理改变等，为下一步基础研究和临床治疗急性胰腺炎提供相应的依据。

UMI-77价格 方法 从3-4周龄的同种异体SD大鼠股骨和胫骨骨髓中分离MSCs。采用2次腹腔注射20%L-精氨酸（2.5g/kg体重量）诱导AP大鼠模型，间隔1h。动物随机分成4组：AP未治疗组、MSCs移植组、p38MAPK抑制组和正常对照组。移植组在模型诱导前1h从尾静脉移植体外培养的MSCs3.0×106/只；抑制组在模型诱导前腹腔注射p38MAPK特异性抑制剂SB2035800.5mg/kg。模型诱导成功后1、3、6、12h各组处死相同数目大鼠，获取血清和胰腺组织。ELISA检测血清中白介素（IL）-1、IL-17和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；组织切片进行中性粒细胞趋化因子（CINC）和单核粒细胞趋化因子-1（MCP-1）免疫组化染色；RT-PCR检测胰腺组织p38MAPKmRNA表达，同时观察大鼠的存活率。 结果 1. MSCs移植组在6、12h血清淀粉酶水平分别为732.23±265.3U/L、930.55±307.2U/L，而未治疗组同时间点血清淀粉酶水平为2450.22±466.3U/L、3248.97±365.7U/L，移植组血清淀粉酶水平显著低于对照组，对比有统计学差异（p0.05）。 3.移植MSCs后，AP模型中血清炎性因子水平升高不明显，趋化因子在腺泡细胞表达较少；胰腺腺泡细胞破坏少见，炎细胞浸润数量比未治疗组明显减少，急性胰腺炎病情得到改善。 结论 体外培养的MSCs移植入L-精氨酸诱导的急性胰腺炎大鼠模型体内，能够改善急性胰腺炎病情。其机制可能与MSCs移植入动物模型后，抑制了早期p38MAPK信号通路的表达，从而减少了炎细胞浸润和趋化因子在组织的表达有关，为临床应用MSCs移植治疗急性胰腺炎提供了理论依据。
目的： 探讨2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)患者血清瘦素(Leptin)水平与心血管疾病危险因素的关系及其在CHD发生发展过程中的可能作用。 方法： T2DM组40例(男31例,女9例),年龄55.3±7.56岁,T2DM合并CHD组40例(男23例,女17例),年龄68.9±9.86岁,对照组38例(男19例,女19例),年龄53.6±10.26岁。所有患者入院时收集其个人资料(包括年龄、性别、病程、家族史等)；测定：①人体基本参数包括身高、体重、血压[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)]等；②生化指标：于入院次日空腹8小时取肘正中静脉血,测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbAlc)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、瘦素(Leptin)、超敏C反应蛋白(Hs-CRP);③进行心电图、心脏彩色多普勒及颈动脉彩超。⑤计算体质指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、腰臀比(WHR)、平均动脉压(MAP)。采用SPSS17.

JNK通路介导软脂酸对Mcl-1的负向调节。 结论 本研究发现软脂酸诱导肝细胞凋亡过程中Mcl-1的蛋白水平显著下调,并进一步明确软脂酸诱导肝细胞凋亡主要是通过激活JNK通路、促进Mcl-1下调实现的,提示JNK/Mcl-1途径在软脂酸诱导的肝细胞脂性凋亡过程中具有重要作用。本研究为深入理解非酒精性脂肪肝发病机制提供新的线索,并为该病的治疗提供新的潜在靶点和策略。
肝纤维化(

hepatic fibrosis)是机体对慢性肝损伤的一种修复反应,是一种渐进的病理过程,是慢性肝病的共有病理变化,是多种类型细胞、氧化应激、细胞因子和生长因子等一系列复杂作用的结果。肝纤维化的特征改变是肝脏内细胞外基质( extracellu2larmatrix, ECM)的过度增生和异常沉积,如不加以及时治疗,将引起严重的肝纤维化并导致肝硬化,甚至引起肝功能衰竭。肝纤维化已成为一个危害人类生命健康的世界性问题,如果能阻止其发生,肝硬化及其并发症就能得到有效控制。近年来国内外研究认为,肝星状细胞(hepatic R428 stellate cell,HSC)是肝纤维化时过量ECM的主要来源,激活的HSC大量增殖,发生表型改变并分泌更多的ECM沉积于肝脏,是肝纤维化形成的关键。目前从肝纤维化发生发展的不同环节入手研制了许多抗纤维化药物,但仍未有十分确定、特效的药物,因此,寻找理想的抗肝纤维化药物及有关肝纤维化发病机制的阐明,具有重要的理论和临床意义。 苦参素(oxymatrine,OM),又名氧化苦参碱,是苦参碱经氧化合成、纯化、提取而得到的有效单体,是苦参碱的N-氧化物,氧化苦参碱因具有特殊的氧结构,从而使分子极性大增,较苦参碱具有独特的作用机理和疗效。以往的研究证实苦参素具有调节免疫、抗炎和抗肿瘤等多种功效。近年又有研究表明,OM具有抗乙肝及防治肝纤维化的作用,引起关注。本实验采用四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,首先从整体水平考察了OM对大鼠肝纤维化的作用;进一步在体外从细胞和分子水平探讨OM抑制HSC增殖的分子机制,观察OM对TGF-β1刺激HSC-T6增殖的影响,探讨MAPK信号转导通路与TGF-β1/smads信号通路在TGF-β1刺激HSC-T6增殖中的作用及相互关系,以企探讨OM的作用机制。

所以 本研究内容包括以下两个部分 一. OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化的保护作用 建立CC14诱导的大鼠肝纤维化模型,设立正常组、模型组、OM给药组(30mg?kg-1, 60mg?kg-1, 120mg?kg-1)、秋水仙碱阳性对照组(0.2 mg?kg-1)。结果显示,OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化具有良好的保护作用。模型组HA,LN, CIV,PCIII等纤维化血清学标志物水平较正常组明显升高,给予OM(60mg?kg-1, 120mg?kg-1)后可使其显著降低。肝纤维化的另一个重要指标肝组织Hyp含量的检测结果显示,OM可显著降低模型组的Hyp值。组织病理学结果表明OM可明显的抑制肝纤维化程度,改善肝组织结构,减少胶原沉积。 模型组大鼠肝匀浆中SOD和GSH-Px酶活性显著下降,而MDA含量显著升高。给予(30mg?kg-1,

哪里 60mg?kg-1, 120mg?kg-1)后可显著降低升高的MDA值,并显著升高SOD和GSH-Px活性。提示OM可缓解肝纤维化大鼠肝脏的氧化应激状态。 实验观察了OM对模型大鼠肝组织中α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3、smad7mRNA的表达含量的影响,RT-PCR检测结果显示OM治疗后模型大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3含量明显降低,smad7则有所上升。 在肝纤维化模型大鼠中,p38、JNK、ERK1/2磷酸化程度明显增加,给予OM可以有效降低肝纤维化大鼠p38、JNK、ERK1/2磷酸化的程度。 二探讨OM抗肝纤维化的分子机制 1苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6增殖的抑制作用 建立体外TGF-β1诱导的HSC-T6模型,OM在0.01,0.1,1,10,100mg·L-1浓度可抑制HSC-T6增殖,抑制率与OM浓度呈浓度依赖性。 2.苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6 p38MAPK信号通路的影响 Western blot检测结果显示,TGF -β1刺激HSC-T6可引起p38MAPK的迅速磷酸化,OM可显著抑制TGF -β1刺激的HSC-T6 p38MAPK的激活,明显降低p38磷酸化水平。提示抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 p38MAPK磷酸化是OM抗肝纤维化的作用机制之一。 3.苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6 TGF–β1/smads信号通路的影响 Western blot检测结果显示,随TGF-β1刺激HSC-T6时间的递增,TβRI, smad2,Smad3蛋白表达递增,Smad7则有所降低。 OM可显著抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 TβRI,smad2, Smad3蛋白的表达,上调Smad7的表达。提示抑制TGF–β1/smad通路是OM抗肝纤维化的作用机制之一。 4.

There is preclinical data to support inhibition of the pathway, and phase Ⅰ to Ⅲ trials involving inhibitors of the pathway have been or are being conducted in solid tumors and breast cancer. Everolimus, an mTOR inhibitor, is 并且 currently approved for the treatment of hormone receptor(HR)-positive, human epidermal growth

factor receptor 2(HER2)-negative breast cancer. In this review, we summarise the efficacy and toxicity findings from the randomised clinical trials, with simplified guidelines on the management of potential adverse effects. Education of healthcare professionals and patients is critical for safety and

compliance. While there is some clinical evidence of activity of mTOR inhibition in HR-positive and HER2-positive breast cancers, the benefits may be more pronounced in selected subsets rather than in the overall population. 3-deazaneplanocin A半抑制浓度 Further development of predictive biomarkers will be useful in the selection of patients who will benefit from inhibition of the PI3K/Akt/mTOR(PAM) pathway.
2015年RSNA大会中,乳腺影像学是其重要组成部分。乳腺论文方面在论文数量方面较往年明显增加,且有更多新的技术和进展在乳腺检查中得到应用。和往年相比内容有如下方面的特点和热点:1乳腺对比增强光谱X线成像是今年研究的一个热点,乳腺断层摄影(DBT)方面的论文数目是较往年明显增多;2MRI的研究内容出现新的进展,主要是DKI和高时间/空间分辨率序列(TWIST VIBE)的应用;3核医学方面论文主要集中在PET-MRI的新进展;4超声方面主要研究了其在检测乳腺肿瘤的生物学行为的潜在价值,但论文数目不多。
磷脂肌醇(PI3K)-蛋白激酶B(PKB,Akt)-雷帕霉素靶体蛋白(mTOR)通路抑制剂耐药现象的出现,与其上下游相关联的其他癌蛋白信号通路的反馈机制密切相关。目前已经报道的有关PI3K-Akt-mTOR通路抑制剂耐药机制,基本上可以分为与FOXO和激素受体相关,依赖于MYC,依赖于β-catenin,依赖于JAK/STAT通路,依赖于MAPK通路,及与AXL相关的耐药机制。PI3K-Akt-mTOR通路抑制剂的耐药,极大地影响了该类小分子靶向药物在临床上的使用,通过对其耐药性产生的机制进行探讨和总结,为临床上和其他药物联用克服该类靶向药物耐药提供策略。
越来越多的分子靶向治疗药物广泛用于妇科恶性肿瘤的临床治疗,尤其是卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌等常见妇科恶性肿瘤。本文阐述针对各种妇科恶性肿瘤,尤其是卵巢癌的临床研究。各种研究表明:以细胞凋亡调控因子、细胞生长的信号转导途径、细胞周期调节蛋白等为靶点的靶向治疗药物,作用力强、副作用小,在妇科恶性肿瘤的治疗中发挥重要作用的,已成为一个重要的研究方向。
磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol

所以 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)-雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路与细胞的生长、增殖、分化、凋亡、代谢等密切相关,在多种实体肿瘤中已发现该信号通路的异常。近年来,以抑制该通路特定位点的靶向治疗已成为抗肿瘤的研究热点。许多该位点新型抑制剂也已进入淋巴瘤的临床试验中,本文就该通路在淋巴瘤中的活化状态及各个分子靶点抑制剂的研究进展做一综述。
肺癌的全称为原发性支气管肺癌,是目前世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤。在我国,随着人口老龄化和空气污染等生活环境的变化,肺癌的发病率持续升高,发病率和死亡率在恶性肿瘤中均居首位。全国肿瘤登记中心2014年发布的数据显示,2010年我国新发肺癌病例60.59万。肺癌最主要的病理类型包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌,其中非小细胞肺癌占肺癌总数的80%~85%。非小细胞肺癌的主要
Since the discovery that non-small cell lung cancer(NSCLC) is driven by epidermal growth factor receptor(EGFR) mutations, the EGFR tyrosine kinase inhibitors(EGFR-TKIs, e.g., ge fi tinib and elrotinib) have been effectively used for clinical treatment. However, patients eventually develop drug resistance.

Limitations exist,however;not all patients can be tested for biomarkers,and numerous challenges hamper implementation of targeted therapy in clinical settings.Indeed,the scale of tumor genomic profiling is rapidly outpacing our ability to appropriately synthesize all the information in order to optimally refine patient care.Therefore,clinicians must continue to educate themselves regarding new tools and frameworks,and to utilize multidisciplinary

team science,comprised of oncologists,geneticists,pathologists,biologists and bioinformaticians,to Selleckchem Sorafenib successfully implement this genomic approach therapeutically.
肺癌是最常见的致死性癌症之一,其死亡数几乎占所有癌症死亡数的30%左右[1]。随着工业化发展水平的提高,环境污染复的日益加重,肺癌的发病率也在逐年上升。其中,有大约15%肺癌属于小细胞肺癌,其余均属于非小细胞肺癌(NSCLC)。现今治疗肺癌患者的方法主要有手
肺腺癌作为肺癌常见组织学类型,约占肺癌的50%。不同组织亚型的肺腺癌在临床、影像学、病理学和遗传学上有很大差异。近年来,对该肿瘤的基础和临床探讨取得了明显进步,国际肺癌研究学会(IASLC)、美国胸科学会(ATS)和欧洲呼吸学会(ERS)于2011年2月公布肺腺癌的国际多学科分类。该文就近年来肺腺癌临床病理学相关进展进行综述。
肺癌全球每年新增病历约160万,其中非小细胞肺癌(NSCLC)占80%~85%[1]。EML4-ALK在肺癌中的阳性率大致约7%[2],与表皮生长因子受体(EGFR)、KRAS基因突变很少同时存在。针对这一NSCLC新的靶点,本文就EML4-ALK及其特征、致病机制、检测方法,以及其临床特征和治疗等综述如下。EML4、ALK、EML4-ALK简介EML4位于人类染色体2p21,由三部分组成:氨基酸末端碱基区、疏水的棘皮动物微管相关蛋白区、WD重复区;ALK位于人类染色体2p23,含29个外显子,全长728kb,具有RTK三个部分:跨膜区、胞外
非小细胞肺癌(non-small

Selleck PFTα cell lung cancer,NSCLC)是世界范围内癌症死亡的主要原因之一,大多数患者确诊时往往处于晚期阶段,临床治疗方法多以姑息治疗为主[1]。在过去很长一段时间内,化疗一直是晚期癌症患者的标准治疗方式,但是传统的细胞毒类化疗药物由于其疗效和毒性的限制,临床应用已经到达平台期,这推动了针对基因改变的抗肿瘤细胞药物的出现[2]。近年来,随着肺癌分子生物学机制研究的不断深入,针对基因的靶向治疗占据着越来越重要的
近年来,靶向治疗成为抗肿瘤治疗领域的研发热点。与传统细胞毒类药物作用机制相比,靶向药物更具特异性,通过对细胞信号转导通道的特异性靶点发挥作用,阻滞肿瘤细胞的生长,对正常细胞的作用相对较小,因此,毒性作用较传统细胞毒类药物相对较轻。针对急剧增长的小分子靶向药物研发和申报现状,本文就我中心对此类问题的认识和整体考虑进行阐述。
Brivanib可同时抑制成纤维细胞生长因子受体(FGFR)-1、FGFR-2、FGFR-3、血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)-2和VEGFR-3,以达到抑制肿瘤新生血管形成及肿瘤细胞生长的作用。旨在总结Brivanib治疗肝癌的进展,已完成的Ⅰ和Ⅱ期临床试验结果均证实了Brivanib在肝癌治疗中的安全性和有效性。然而,1项已完成的Ⅲ期随机双盲安慰剂对照研究表明,Brivanib作为晚期肝癌二线治疗手段(即Sorafenib治疗失败者)并未显著改善患者的总体生存期。另1项Ⅲ期随机双盲对照试验结果也表明,Brivanib作为晚期肝癌一线治疗手段并未比Sorafenib显著改善患者的总体生存期。这2项临床试验的失败使得其他两项有关Brivanib治疗肝癌的临床试验提前终止。通过分析以上研究认为亚组分析以及事先筛选Brivanib可能获益的肝癌患者(即FGF信号途径激活的肝癌患者)也许对进一步探究Brivanib的在肝癌治疗中的角色是必要的。
目的探讨胃癌c-MET表达与各临床病理因素的关系和对胃癌患者预后的影响。方法应用免疫组化法(IHC)检测256例胃癌组织及48例正常胃黏膜中c-MET表达情况。应用Kaplan-Meier法评估胃癌患者术后总生存率。结果 RAD001 256例胃癌组织中c-MET阳性表达率为73.8%(189/256),与正常胃黏膜中的表达阳性率(27.

体外培养支气管上皮细胞(16HBE),分别用无菌的MEM、不同浓度的NiS (1.0-8.0μmol/L)、NiS (2.0μmol/L)+扶正解毒(FJD)含药血清(低、中、高剂量组、空白血清组)处理细胞24h,用台盼蓝法检测支气管上皮细胞的存活率。取对数生长期的16HBE细胞接种于24孔培养板内,6×106个／孔,每个剂量设5个复孔,按实验分组分别加入受试物,继续培养24h,各组细胞弃去上清液,每孔加入500μl细胞裂解液,冰上放置30min,将裂解液作用后的各组细胞转移至Eppendorf管,离心20min,取上清液进行谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)活性检测。将受试物处理后的各组细胞以PBS反复洗涤细胞,直至显微镜下大部分细胞已超声破碎,进行超氧化歧化酶(SOD)活性的检测。用考马斯亮兰蛋白测定法,用分光光度计测定波长595nm处吸光度OD值,计算蛋白含量,结合蛋白浓度计算16HBE细胞(细胞处理方法同前)内丙二醛(MDA)含量。2.将16HBE细胞接种于25ml培养瓶中,每孔接种的细胞数为6×106,培养24h后,用NiS

(1-5.0μmol/L)染毒,并用无菌的MEM、NiS (2.0μmol/L)+不同剂量FJD含药血清、空白血清、以及三种抑制剂,磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、磷酸化氨基未端蛋白激酶(P-JNK)处理细胞24h,无菌PBS洗涤细胞2次,胰酶消化后制成细胞悬液,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹杂交(Western Epigenetics合成 Library制造商 blot)法观察各组细胞中磷酸化ERK、P38和JNK的表达。3.将16HBE细胞用无菌的MEM、不同浓度的NiS (1.0-4.0μmol/L)、NiS (2.0μmol/L)+FJD含药血清(低、中、高剂量组)处理细胞24h后,用免疫组化法检测各组细胞中核转录因子(NF-κB)κB的活性,并进行半定量分析,用RT-PCR法测定支气管上皮细胞中NF-κB P65的表达。本次实验采用SPSS13.0统计软件进行相关分析,多组间比较采用方差分析,两组之间的比较采用T检验,P0.05)。NiS能明显激活细胞P-JNK的表达(P0.05),阴性对照组细胞中P-ERK1表达值为0.210,NiS浓度分别为1、2、4.0μmol/L,染镍组细胞中P-ERK1表达值分别为0.216、0.219、0.226,FJD低、中、高剂量含药血清组和P-ERK1抑制剂对磷酸化P-ERK1的表达无明显影响(P>0.05)。4.NiS能明显激活NF-κB和NF-κB

GDC973 P65的表达(P
第一部分 P38 MAPK在变应性鼻炎大鼠鼻腔粘膜中的表达 目的：探讨p38 MAPK蛋白及mRNA在变应性鼻炎大鼠和正常对照大鼠鼻腔粘膜中的表达情况。 方法：建立SD大鼠变应性鼻炎动物模型,采用免疫组织化学染色法检测p38MAPK蛋白在变应性鼻炎组大鼠和正常对照组大鼠鼻腔黏膜中的表达差异,采用实时荧光定量RT-PCR检测两组大鼠鼻腔黏膜p38 BMS-907351订单 MAPK mRNA表达水平。 结果：免疫组化染色结果显示p38 MAPK在变应性鼻炎组大鼠鼻腔黏膜中的表达较正常对照组大鼠明显增高(P＜0.05)。实时定量RT-PCR检测结果显示p38 MAPK mRNA在变应性鼻炎组大鼠鼻腔黏膜中表达较正常对照组明显增高(P＜0.05)。 结论：p38 MAPK在变应性鼻炎大鼠鼻腔黏膜中表达水平增高,提示p38 MAPK可能参与了变应性鼻炎的发病过程。 第二部分 P38 MAPK在变应性鼻炎大鼠PBMCs中的表达及对Th2类细胞因子的调控作用 目的：探讨变应性鼻炎大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中p38 MAPK蛋白及mRNA的表达情况,同时探讨p38 MAPK特异性抑制剂SB 239063对外周血单个核细胞Th2类细胞因子IL-4,IL-5表达的影响。 方法：建立变应性鼻炎大鼠模型,通过心脏穿刺获取外周血,采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMCs,实时荧光定量RT-PCR检测大鼠外周血单个核细胞p38MAPK

mRNA的表达。Western blot检测外周血单个核细胞p38 MAPK蛋白的表达水平及活性情况。PBMCs在不同浓度p38 MAPK特异性抑制剂SB 239063作用下培养后,ELISA检测细胞上清液中IL-4, IL-5蛋白表达水平。 结果：结果显示变应性鼻炎组大鼠p38 MAPK mRNA的表达量及蛋白总表达量明显高于对照组(P＜0.05),AR组大鼠磷酸化p38 MAPK(代表p38 MAPK的活性)表达量较对照组升高,磷酸化p38 MAPK与总p38 MAPK的比值也较对照组明显增高(P
目的1.研究正常妊娠、子痫前期胎盘组织中神经激肽B(neurokinin B, NKB)及其受体(neurokinin B receptor, NKR)在蛋白和mRNA水平的表达,以及正常妊娠、子痫前期孕妇血浆中神经激肽B的含量,籍此探讨神经激肽B和子痫前期的关系； 2.研究活化状态的p38MAPK蛋白在正常与子痫前期胎盘中的表达,探讨NKB与p-p38MAPK表达的相关性。 方法选择正常妊娠、轻度子痫前期、重度子痫前期患者各20例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测孕妇血浆中NKB含量；采用伊红—苏木素(HE)染色,光镜观察正常妊娠和子痫前期胎盘结构的病理学改变；用免疫组织化学检测胎盘组织中NKB/NKR、p38MAPK蛋白的定位及定量表达；用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerasechain reaction, RT-PCR)检测胎盘组织中NKB/NKR mRNA的表达。 结果1.轻度及重度子痫前期孕妇血浆中NKB水平明显高于正常孕妇； 2.

05)。 2、T10组、T16组空间学习记忆能力、思考应变能力明显下降；海马神经元受损明显,线粒体结构不清；IL-1p、TNFα含量明显增多,GFAP、Aβ、GLP-1R蛋白表达明显增高,Aβ、GLP-1R蛋白表达区域部分重叠；GLP-1RmRNA水平增高明显；p-p38蛋白含量增多。侧脑室连续5d注射GLP-1后,GLPA组小鼠空间学习记忆能力、思考应变能力明显改善,GLPB组小鼠空间学习记忆能力、思考应变能力改善不明显；GLPA组L-1p、TNFα含量较T10组明显下降,GFAP、Aβ、GLP-1R蛋白表达明显减少,GLP-1RmRNA水平明显降低；p-p38蛋白含量减低。用GLP-1和Exendin 哪里 Fragment9-39同时干预T10组,其空间学习记忆能力、IL-1p、TNFα含量、GFAP、Aβ、GLP-1R蛋白表达量、GLP-1RmRNA水平、p-p38蛋白含量与T10组无明显差异。 3、NH2-QDs-605脑内非特异性积聚较QDs-605明显NH2-QDs-605在脑脊液中光学特性稳定,生物相容性好。量子点-Ap-Ab探针标记16月和10月转基因鼠Ap,发现前者荧光范围较后者扩大,连续观测3天,量子点荧光强度没有衰减；GLP-1干预10月APP转基因鼠5天后,其荧光范围减小,荧光亮度降低；脑组织冰冻切片观测验证了上述结果。 研究结论： 1.成功构建了量子点-Ap-Ab探针,在一定的条件下,量子点及量子点-Ap-Ab探针对小鼠整体毒性作用小,生物相容性好。

2.GLP-1R在APP转基因模型海马组织、大脑皮层中表达增高,证实GLP-1可能通过与GLP-1R结合,参与减缓炎症反应、改善APP转基因鼠的学习和记忆能力。 3.GLP-1抑制脑组织中p38MAPK活化是减轻APP转基因鼠脑内的炎症反应的可能机制之一。 4.量子点-Ap-Ab探针可应用于活体动物脑内研究,并能有效识别APP转基因鼠脑内的Ap沉积。 5.量子点-Ap-Ab探针荧光成像可以应用于AD转基因模型抗p淀粉样蛋白斑块干预的疗效检测。
第一部分 应用Tail-cuff技术改良小鼠颈部异位心脏移植模型 因为 目的小鼠颈部心脏移植模型是研究移植缺血再灌注损伤和排斥反应的理想模型,由于显微血管吻合的技术问题,限制了其在医学研究中的广泛应用。在本实验室既往应用套管法(cuff technique)建立该模型的基础上,本研究应用Tail-cuff技术(带尾套管法)改良小鼠颈部异位心脏移植模型。方法昆明小鼠用作预实验,C57BL/6和BALB/c小鼠用作正式试验。应用24G和22G静脉内导管制作成带有尾巴的动脉或静脉套管(Tail-cuff),在准备受体血管时,Tail-cuff通过右颈外静脉或右颈总动脉近心端后,用显微血管夹一起固定其近心端和Tail-cuff管的尾巴,翻转血管并固定后分别与供心的肺动脉主干和升主动脉连接固定。

结果应用这种改良技术,预实验手术成功率为72.2%(13/18),总操作时间为56.2±8.9min。正式实验总操作时间为49.6±7.4 min,血管翻转和与供心连接时间分别为3.6±1.4min和4.1±1.1 min,正式实验(12例同系移植,24例同种移植)的成功率为100%(36/36)。 结论应用Tail-cuff技术建立小鼠颈部异位心脏移植模型显示出一定的优越性,是一种理想的方法。 第二部分 诱导受体产生一氧化碳减轻小鼠移植心的冷缺血再灌注损伤

目的一氧化碳(carbon monoxide, CO)是血红素加氧酶催化亚铁血红素生成的代谢产物之一,对大鼠肝、肺、肾和小肠的缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury, IRI)具有明显的保护作用。本研究在小鼠心脏移植模型的基础上,观察以二氯甲烷(methylene chloride, MC)诱导受体小鼠产生CO对移植心冷IRI的影响,并探讨其可能的机制。 方法以Balb/c小鼠作为供、受者,建立颈部异位心脏移植模型。实验共分为4组,分别为MC100mg组(n=10)、MC500mg组(n=12)、橄榄油组(IR组,n=10)和正常对照组(N,n=5)。前3组在麻醉前3 h分别用经橄榄油稀释的MC100mg/kg、MC500mg/kg以及单纯橄榄油0.15ml(IR组)对受者进行灌胃处理,然后行颈部异位心脏移植；N组小鼠仅作麻醉处理,不进行心脏移植。分别于灌胃后0、1、3、6、12和24 h剪尾采血,测定血液中CO的含量[用碳氧血红蛋白(COHb)占总血红蛋白的百分比表示],并于相应时间点取心肌组织,检测心肌组织中CO的含量；各组移植后3h和24 h分别处死半数受者,检测移植后3h和24 h血清中肌钙蛋白I(cTnI)、心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、细胞凋亡与相关基因Bcl-2和Bax mRNA以及核因子κB(NF-κB)的表达,并观察移植心心肌的超微结构。 查找更多 结果与橄榄油灌胃比较,以MC100 mg和MC500 mg灌胃受者血液中COHb浓度与心肌组织中CO含量明显升高,均在灌胃后3 h达到峰值(P0.05),同时可以显著上调抗凋亡基因Bcl-2 mRNA水平(P0.05)。 结论诱导受体小鼠产生CO明显减轻小鼠移植心冷IRI,其主要机理与CO的抗炎和抗凋亡作用有关,且不受NF-κB信号转导通路的调节。第三部分 诱导受体产生一氧化碳经PI3K/Akt信号途径抑制冷缺血再灌注诱导的移植心细胞凋亡 目的CO是体内的一种重要信号分子。外源性低浓度的CO具有缓解血管损伤、排斥反应和急性肺损伤等功能,但涉及到的信号机理尚未完全阐明。本研究在小鼠心脏移植的基础上,观察诱导受体产生CO对移植心冷IRI中细胞凋亡的影响,并探讨其可能的信号机制。 方法以Balb/c小鼠建立同系移植心冷IRI模型。受体用二氯甲烷(MC,500mg/kg体重)灌胃诱导受体小鼠产生CO(MC组,n=12),或用橄榄油灌胃(IR组,n=12),在MC组的基础上受体在移植心恢复血供前1h腹腔注射PI3K抑制剂LY294002(40mg/kg,LY组,n=10)或二甲亚砜(DMSO组,n=10)；检测移植后3h和24h(每一时间点n=5～6／组)移植心细胞凋亡并计算凋亡指数(AI)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白、Bcl-2与Bax蛋白的表达及Caspase-3蛋白酶活性;设立正常对照组(N组,n=5)。 结果受体以MC灌胃后血液中COHb浓度与心肌组织CO含量均在3h达到峰值,分别为(9.82±0.

4倍,差异有统计学意义(P<0.01);NCI-H446细胞对RGDLP-PTX的摄取效率是LPPTX的3.8倍,差异有统计学意义(P<0.01);RGDLP-PTX对A549细胞和NCI-H446细胞的增殖抑制率具有浓度依赖性;在相同紫杉醇浓度下,RGDLP-PTX对A549细胞和NCI-H446细胞的增殖抑制率显著强于LP-PTX和游离紫杉醇,差异有统计学意义(P<0.01);RGDLP-PTX,LP-PTX和游离紫杉醇诱导肺癌A549细胞的凋亡率分别为48.3%,27.4%和35.5%,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.01);NCI-H446细胞凋亡率分别为41.3%,22.8%和34.1%,与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。RGDLP-PTX,LP-PTX和游离紫杉醇对肺癌肿瘤的抑制率分别为69.3%,47.5%和24.4%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:RGD修饰载紫杉醇脂质体能够高效抑制肺癌细胞的增殖和肿瘤的生长,是一种有效的肺癌靶向给药系统。
程序性细胞死亡因子1(PD-1)是由PDCD-1基因编码的一种表达在T细胞细胞膜和细胞质中的抑制性受体。PD-1及其配体PD-L1(B7-H1/CD274)、PD-L2(B7-DC/CD273)在调节免疫反应和维持外周免疫耐受中具有重要作用。PD-1/PD-L1通过抑制T淋巴细胞增殖、存活和效应功能诱导抗原特异性T细胞凋亡,促进CD4+T细胞向Foxp3+调节性T细胞分化从而促进肿瘤的发生发展。抗PD-1单克隆抗体(BMS-936558等)及抗PD-L1单克隆抗体(BMS-936559等)的安全性及临床疗效的研究为非小细胞肺癌的治疗带来了新突破,免疫靶向治疗将会成为其治疗的新方向。
The

而且 incidence of gastric cancer(GC) fell dramatically over the last 50 years, but according to IARC-Globocan 2008, it is the third most frequent cause of cancerrelated deaths with a case fatality GC ratio higher than other common malignancies. Surgical resection is the primary curative treatment for GC though the overall 5-year survival rate remains poor(approximately 20%-25%). To improve the outcome of resectable gastric cancer,

different treatment strategies have been evaluated

such as adjuvant or perioperative chemotherapy. In resected Raf抑制剂 gastric cancer, the A-1210477 花费 addition of radiotherapy to chemotherapy does not appear to provide any additional benefit. Moreover, in metastatic patients, chemotherapy is the mainstay of palliative therapy with a median overall survival of 8-10 mo and objective response rates of merely 20%-40%. Therefore, the potential for making key beneficial progress is to investigate the GC molecular biology to realize innovative therapeutic strategies, such as specific immunotherapy. In this review, we provide a panoramic view of the different immune-based strategies used for gastric cancer treatment and the results obtained in the most significant clinical trials. In detail, firstly we describe the therapeutic approaches that utilize the monoclonal antibodies while in the second part we analyze the cell-based immunotherapies.
目的探讨免疫组化(immunohistochemistry,IHC)在检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因表达异常的准确性,并观察ALK阳性患者的临床病理特征。方法收集NSCLC患者石蜡标本234例,使用兔单克隆D5F3抗体行ALK蛋白IHC检测,对其中ALK阳性标本采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测验证。结果 234例NSCLC中,IHC检测ALK融合基因蛋白阳性率为8.97%(21/234),经RT-PCR检测验证有14例存在ALK基因融合,阳性率为5.

5μM6-溴靛玉红-3-肟（6-bromoindirubin-3’-oxime，BIO）（GSK3β信号通路抑制剂），分离得到了2株来源于昆白小鼠体外受精囊胚的ESCs系。在这个培养体系中，体外受精来源的扩张囊胚可以自发孵化并贴壁。培养过程中，可以观察到类胚胎干细胞集落，经过扩增，得到了2株昆白小鼠ESCs系，分别命名为KMES1和KMES2。这2株细胞系和其他啮齿类动物的ESCs具有相同的形态学特征，具有碱性磷酸酶活性，具有与细胞多能性相关的细胞标记，包括Oct-4, Nanog和SSEA-1。拟胚体实验和畸胎瘤实验证明分离得到的ESCs可以在体内外自发分化为三胚层来源的细胞。 （2）对关中奶山羊进行超数排卵和配种，手术法采集体内发育囊胚。在添加有2.5μM BIO、0.5μM PD184352（MEK信号通路抑制剂）、0.5μM SB431542（ALK5抑制剂）和1000U/mL白血病抑制因子（Leukemia Inhibitory Factor, LIF）的“3i”体系中分离培养ESCs。共超排了118只关中奶山羊，获得1204枚囊胚，分析表明，季节和气温变化会影响关中奶山羊的超排效果，秋冬季超排处理期间气温骤降会显著降低超排羊的胚胎回收数。通过机械分割法将超排获得的囊胚内细胞团分离后接种于铺有饲养层细胞的四孔板，在“3i”培养体系中培养，分离得到了山羊类ESCs，并传至12代，类ESCs具有碱性磷酸酶活性、表达OCT-4和Nanog，经悬浮培养可形成拟胚体，拟胚体贴壁培养后可自发分化为神经样细胞。

Stem Cells 抑制剂 研究结果证明，添加有BIO培养体系可以支持无饲养层、无血清条件下小鼠ESCs的建系；在添加有BIO，SB431542和PD184352三种小分子化合物的培养体系中，可以分离得到山羊类ESCs，这为加快良种山羊的育种速度提供重要的技术平台。
将外源多能转录因子(Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc)介导成体干细胞，诱导得到多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)，其具有与ES (embryonic stem)细胞相同的特性，不涉及胚胎伦理问题。近年，iPSCs技术发展迅猛，成为生命科学研究及临床应用的热点研究领域。 国内外多家实验室成功地将猪体细胞诱导为iPSCs。但不同实验室得到的猪iPSCs，由于采用的方法和培养条件不同，使其表观遗传特性存在差异。重编程过程需要高滴度的和一定化学剂量的转录因子表达，诱导时4个转录因子随机整合，形成的iPSCs通常拥有不同的拷贝数。这种病毒载体随机拷贝插入和重编程的随机性，给研究细胞重编程机制和利用小分子替代转录因子的研究带来了困难。本实验将携带4个鼠源多能转录因子的慢病毒载体TetO-FUW-OSKM和辅助载体FUW-M2rtTA同时感染猪胎儿成纤维细胞(Porcine Embryonic Fibroblasts，PEF)，将串联的四因子整合到体细胞基因组中，在添加Dox

(deoxycycline)的多能细胞培养条件下形成iPSCs，称其为一代iPSCs。随后，将第一代iPSCs再分化为成纤维样细胞，称其为TetO-PEF。 TetO-PEF含有TetO-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA，无需再导入质粒，可在添加Dox的条件下外源整合的四因子被激活，启动细胞重编程，高效率的获得iPSCs。本研究建立的TetO-PEF细胞系，解决了四因子拷贝数不均一的问题，为研究猪重编程机制、猪iPSCs培养条件优化、小分子化合物诱导重编程等研究提供了新的实验平台。主要获得了以下结果：

不 1.建立TetO诱导重编程一代细胞系 本实验成功分离了猪胎儿成纤维细胞。并将TetO诱导表达系统质粒TetO-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA包装成病毒，感染PEF细胞，在添加Dox的iPSCs条件培养条件下重编程为一代iPSCs。第一代iPSCs，AP染色呈阳性，且能在无血清培养条件下正常传代。经PCR、RT-PCR检测，证实外源基因成功整合基因组且外源四因子正常表达。 BMS-907351购买 2.建立直接诱导TetO第二代成纤维细胞重编程为二代iPSCs的体系 本研究通过将第一代iPSCs形成EB (Embryoid Body, EB)并将其定向分化为成纤维细胞，获得了含有TetO-FUW-OSKM和FUW-M2rtTA质粒的TetO-PEF。由于一代iPSCs基因型一致，由此分化得到的TetO-PEF具有一致的基因型。TetO-PEF在Dox培养条件下可以快速形成二代iPSCs。经免疫荧光染色检测，二代iPSCs高表达OCT4、SOX2、SSEA-1、TRA-1-60，弱表达SSEA-4，而不表达TRA-1-81。
肝纤维化是指由慢性炎症导致的肝组织结构变化及大量纤维瘢痕的形成，进一步可发展为肝硬化及肝癌，目前无有效药物，因此，研究抗肝纤维化药物具有现实意义。本课题通过体外细胞模型从6种药食用真菌液态发酵菌粉中筛选抗肝纤维化的化合物，并研究其抗肝纤维化的作用机制，为未来研究抗肝纤维化药物提供初步的理论依据。 本论文以TGF-β1活化的肝星状细胞CFSC-8B为研究对象，通过天狼猩红染色方法检测胶原含量，构建肝纤维化细胞模型。结果表明10ng/mLTGF-β1作用CFSC-8B48h，染色液体积200μL为最佳的建模条件；利用SB431542和Silybin两个阳性药物及其它11种具有抗肝纤维化活性的化合物及蛋白质因子验证了此方法的可靠性；进而利用这一细胞筛选模型以抗肝纤维化活性为导向，通过硅胶色谱及HPLC进行分离纯化，利用紫外、质谱及核磁等技术，并和已有文献比对，从樟芝菌粉中分离并鉴定了两个单体化合物Antrodin A和Antrodin B。天狼猩红染色结果表明Antrodin B可显著抑制TGF-β1诱导的胶原生成，且具有剂量依赖性。 为进一步阐明Antrodin B抗肝纤维化的作用机制，本课题使用MTT、WST-1、细胞划痕、细胞小室迁移、荧光定量PCR、蛋白质印迹等方法，分别进行了细胞活性、细胞增殖、细胞迁移、肝纤维化相关基因及信号通路中蛋白表达情况的研究，结果表明：Antrodin B与CFSC-8B共孵育48h的IC50值为59.

077μM;2-75,IC50：0.025μM)和各种哌嗪喹喔啉类化合物显示了良好的PI3Ka抑制活性,以上结果和药效团Hypol预测的活性基本一致,验证了Hypol的可靠性。Akt蛋白磷酸化抑制实验表明,化合物2-75显示了明显的Akt蛋白磷酸化抑制作用,再次证明了该化合物是通过作用于PI3K信号通路而发挥其抗肿瘤活性的。以上结果表明化合物2-75是有潜力的P13Kα中制剂。 此外,本文根据文献报道的2-苯基-4-吗啉基喹唑啉类PI3K抑制剂,利用拼合原理,通过在吗啉喹唑啉母核的6位引入芳亚甲胺侧链、芳磺酰胺基侧链、吡咯烷二酮氨基侧链和马来酰亚胺基侧链共设计合成了五类49个结构新颖的吗啉喹唑啉类衍生物。体外抗肿瘤活性测试结果表明,喹唑啉2位苯基的存在有利于抗肿瘤活性的提高；芳磺酰胺基侧链取代的化合物活性好于芳亚甲胺侧链取代的化合物;吡咯烷二酮氨基侧链取代的化合物活性中等；具有马来酰亚胺基侧链的化合物显示了良好的细胞增殖抑制活性(如化合物3-68和3-69)。该研究为喹唑啉类抗肿瘤药物的开发提供了新的思路。
目的： 1.研究无血清培养法和免疫磁珠分选法用于人骨肉瘤类肿瘤干细胞的分离培养,探讨两者作为分选方法的可行性。

2.研究Nanog在人骨肉瘤及其类肿瘤干细胞的中的表达及意义。 3.研究LY294002对人骨肉瘤类肿瘤干细胞增殖和细胞周期的影响,并初步探讨其抑制增殖作用可能的机制。 4.研究LY294002对人骨肉瘤类肿瘤干细胞凋亡的影响,并初步探讨其诱导凋亡作用可能的机制。 方法： 1.无血清培养法分离人骨肉瘤类肿瘤干细胞；免疫磁珠分选CD133+CD44+人骨肉瘤细胞；免疫组织化学法鉴定人骨肉瘤类肿瘤干细胞CD44和CD133的表达情况；蛋白印迹法检测骨肉瘤及其类肿瘤干细胞Nanog的表达并进行半定量分析。 A-1210477半抑制浓度 2.实验分组：LY294002在培养基中的浓度分别为0μmol/L(对照组)、5μmol/L、15μmol/L和45μmol/L。 3.CCK-8法检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下的增殖情况；碘化丙啶PI染色流式细胞术检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下细胞周期的变化；蛋白印迹法法检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下总AKT、磷酸化AKT和β-肌动蛋白的表达情况。 4. Annexin V/PI双染法流式细胞术检测人骨肉瘤类肿瘤干细胞在不同LY294002浓度下的凋亡情况；蛋白印迹法检测半胱天冬酶-3、活化型半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-9、活化型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶和β-肌动蛋白的表达情况。 结果：

1.采用无血清培养法可以从人骨肉瘤MG63细胞中分离出成“细胞球”生长的人骨肉瘤类肿瘤干细胞；采用免疫磁珠法可以从人骨肉瘤MG63细胞中分离出CD133+CD44+人骨肉瘤细胞,该细胞亦可在含表皮生长因子和成纤维生长因子的无血清培养基中形成“细胞球”；将上述骨肉瘤类肿瘤干细胞球传代于无血清培养基仍可形成相似的人骨肉瘤类肿瘤干细胞球；人骨肉瘤类肿瘤干细胞CD44和CD133均呈阳性表达；人骨肉瘤类肿瘤干细胞Nanog表达水平强于人骨肉瘤MG63细胞(P<0.01),增殖指数明显减低(P
在含氮天然产物和生物活性分子的结构改造中,将三氟甲基或含氟基团不对称地引入到亚甲胺基的α位已经成为研发新药的一个重要手段,改造后生物活性分子结构与活性关系的研究表明手性α-三氟甲基胺结构与药效有着直接的关系。因此手性三氟甲基胺类化合物的合成已成为众多有机化学家和药物化学家的研究热点。本文通过发展四类α-三氟甲基胺化合物的不对称合成方法,并利用这些方法设计与合成了4-三氟甲基取代的胆固醇吸收抑制剂Ezetimibe类似物等含氟化合物。本论文由如下三个部分构成： 没有 LY2109761临床试验 第一部分：含氟基团取代的手性p-氨基酮类化合物广泛的存在于生物活性分子中,同时是一类重要的合成砌块。利用叔丁基亚磺酰胺作为手性辅基,发展了一种用于制备光学纯的p-三氟甲基-p-芳基-p-氨基芳酮的高效方法。手性三氟甲基取代的叔丁基亚磺酰酮亚胺与烯醇锂盐发生Mannich型1,2-加成反应可以以优良的产率和良好的非对映选择性得到p-三氟甲基-p-芳基-p-氨基芳酮类化合物。然后,在酸性条件下脱去叔丁基亚磺酰基得到光学纯的p-三氟甲基-p-芳基-p-氨基芳酮,此类化合物可以进一步转化为三氟甲基取代的氮杂环丙烷类化合物。

第二部分：发展了一种路易斯酸催化区域可调控的α-氟烷基胺类化合物的不对称合成方法。在四氟化硼酸银的催化下,α-氟烷基取代的叔丁基亚磺酰醛亚胺能与共轭二烯醇硅醚酯的α位发生反应,以优良的产率和优异的非对映选择性得到具有两个新手性中心的加成产物；当用TMSOTf做催化剂,得到丫位加成产物。加成产物的手性辅基可在温和的酸性条件下脱除,且新手性中心的构型保持不变。位加成产物可以便利地转化为α-三氟甲基内酰胺类化合物。 第三部分：为发现活性更好的胆固醇吸收抑制剂,设计并合成了四个4-三氟甲基取代的Ezetimibe的类似物。合成的关键步骤包括利用分子内氢键和Evans辅基诱导对烯胺进行不对称氢化；在已构建三氟甲基的手性构型诱导下进行不对称亲核取代反应。采用Caco-2细胞为模型对4-三氟甲基取代Ezetimibe的类似物进行生物活性测试,结果表明,在得到的四个4-三氟甲基取代的Ezetimibe类似物的作用下,Caco-2细胞都能对胆固醇的吸收进行有效的抑制,其中化合物侧链有手性中心的N-4-氟苯基取代类似物活性与阳性药物Ezetimibe的活性接近。
背景：宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，是威胁女性生命的第二大恶性疾病，近年来有逐渐年轻化的趋势，已经成为重大的社会问题。全世界每年约45～50万新发病例，死亡20万例，其中约80％集中在发展中国家。我国是宫颈癌的高发病率国家之一，每年新增宫颈癌病例约13.

05),但治疗组各波潜伏时显著低于损伤组,且治疗组各波波幅均显著高于损伤组(P﹤0.05),各组感觉诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)的变化趋势与运动诱发电位一致。水迷宫定位航行阶段,脊髓损伤组和治疗组大鼠到达平台的潜伏时间显著长于对照组,但第3、4天治疗组潜伏时间显著短于损伤组(P﹤0.05);空间探索阶段,脊髓损伤组和治疗组在目标象限的时间显著少于对照组,且治疗组在目标象限的时间显著长于损伤组(P﹤0.05),对照组、脊髓损伤组和治疗组三组以空间定位方式找寻目标平台所占比例分别为77%、48%和56%。免疫荧光及Western blotting结果显示:脊髓损伤组海马齿状回细胞内Caspase3和Bax蛋白表达增多,且MP能降低这两种蛋白表达。HE染色和尼氏染色结果显示对照组海马并未见明显病理改变。脊髓损伤组和治疗组1W时均可见到内有少量细胞形态异常,但随时间延长,海马内形态异常细胞逐渐增多,存活细胞逐渐减少,且治疗组存活细胞数量显著多于损伤组。结论脊髓挫伤可引起大鼠海马齿状回细胞凋亡、消失,从而导致大鼠学习记忆功能障碍,MP能抑制脊髓损伤后大鼠海马齿状回细胞凋亡,改善脊髓损伤大鼠的学习记忆功能。
癌症是一种涉及多因子和多通路的复杂疾病。目前,临床上使用单个抗癌药物进行癌症治疗的方法往往会产生药物抗性和毒副作用。因此,联合用药疗法应运而生并受到了研究人员和临床医生的极大关注,特别是具有协同作用的联合用药研发。协同作用联合用药展现出了比单个药物治疗效力相加更强的功效,同时由于联合用药中的药物剂量比单个药物应用时剂量要小,且联合用药会同时作用于多个药物靶点及生物通路,因此会减少毒副作用的产生。高通量测序技术的发展为我们提供了大量测序数据,促进了生物信息学联合用药的研究。因此,我们提出了利用病人全基因组测序数据进行精准联合用药预测的模型PDCP,并建立了相关应用平台。首先,PDCP分析病人体细胞突变数据及拷贝数变异数据,提取突变位点及突变基因,并筛选其中的药物靶点进行后续分析。然后,在人类基因相互作用网络中计算各药物靶点的重要性,并筛选出对疾病具有重要性的药物靶点进行进一步分析。之后,两两组合步骤二中得到的基因集并结合基因相互作用网络对每对基因对计算其协同作用得分,进行排序并筛选出最具治疗潜力的双靶点协同基因作用对。最后,根据所得的基因对,结合药物基因关系,给出病人个性化联合用药方案。同时,PDCP预测系统针对每个联合用药作用对分别计算了其治疗相似性和副作用相似性参数,以评估其对肿瘤治疗的疗效。本文整合了多个数据来源,包括Reactome、the

http://www.selleckchem.cn/products/Lapatinib-Ditosylate.html NCI-Nature Curated PID、KEGG等建立了人类基因相互作用网络。并收集整理了多种数据来源的药物基因相关性信息以及药物与突变位点相关信息、癌症驱动基因集等数据进行病人精准联合用药的预测分析。为了评估该方法的有效性及预测性能,我们收集了TCGA中发布的8种癌症数据集,包括浸润性乳腺癌、结肠癌、肝癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、卵巢癌、胰腺癌和前列腺癌数据集,对每个数据集的样本分别进行了联合用药的预测,结合合成致死基因对和已报道的联合用药对结果进行了评估。实验说明PDCP能够正确预测出病人合理的联合用药方案,并且产生出大量候选联合用药供研究人员进行后续研究,促进了我们对复杂疾病的多靶点治疗和精准医疗的系统性了解。
背景与目的

哪里 卵巢癌因其发病隐匿，治疗效果一直欠佳，为死亡率最高的妇科恶性肿瘤。在美国每年约有23,000名新增病例，15,000名死亡病例[1]。卵巢癌的治疗主要依靠肿瘤细胞减灭术，术后给予以铂类药物为基础的联合化疗。但是化疗副作用以及化疗耐药的问题使得卵巢癌的预后仍然较差。在过去的30年里，其5年生存率仍不足40%[2]。因此寻找新的有效的治疗方案成为卵巢癌治疗急需解决的问题。

研究发现信号通路调节的紊乱与异常是肿瘤发生、发展及化疗耐药的重要原因，其中mTOR信号通路与细胞的生长增殖尤其是肿瘤细胞的失控性增殖，肿瘤的复发转移及耐放化疗密切相关，多种恶性肿瘤包括乳腺癌、白血病、胃肠间质肿瘤、肝细胞癌、肺癌等均存在mTOR信号通路的失调[3-9]。而雷帕霉素靶蛋白mTOR，处于此条通路的中心环节，与蛋白质合成及细胞周期的调控密切相关[10]。因此针对于mTOR位点的特异性抑制剂成为肿瘤靶向治疗新的热点。 雷帕霉素作为mTOR的特异性抑制剂，是从吸水性链霉菌发酵液中提取出的一种大环内酯类抗生素，最初发现其具有抗真菌作用，1989年被FDA批准作为免疫抑制剂应用于临床，近年来研究发现其具有显著的抗肿瘤作用[11]，联合传统化疗药物可明显提高化疗药物的促凋亡能力，增强肿瘤细胞对于化疗的敏感性[12]。顺铂是肿瘤化疗中最常用的化疗药物，是临床上实体肿瘤包括卵巢癌，化疗方案中最有效的药物之一，顺铂的抗肿瘤作用机制是与肿瘤细胞的DNA形成DNA-顺铂交联，引起DNA损伤，抑制DNA复制，促进细胞凋亡~([13])，雷帕霉素可抑制DNA损伤修复蛋白的合成，进一步促进顺铂的促凋亡能力。因此我们推测在卵巢癌细胞化疗时给予雷帕霉素可增加顺铂的抗增殖、促凋亡等抗肿瘤作用，增加肿瘤细胞对顺铂的化疗敏感性。 查找更多 本研究选用最常见的卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3，观察雷帕霉素联合顺铂对于细胞株增殖凋亡、周期分布的影响，初步探讨分子靶点药物与传统化疗药物联合应用的效果及相应的分子机制，寻求卵巢癌治疗更加有效的化疗方案。 方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞，MTT法检测雷帕霉素、顺铂单独及联合作用24h、48h、72h对细胞生长增殖的影响；FCM检测对于细胞凋亡及周期分布的影响；Western blot检测其对mTOR信号通路中PTEN、AKT、mTOR、p-mTOR、S6K蛋白及抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。 结果 MTT结果显示：雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖，呈现明显的时间依从性，以72h抑制率最高，且各组之间两两比较均有统计学意义（P＜0.05）。联合顺铂时生长抑制率明显高于单独用药组，差异有统计学意义（P＜0.01）。合成指数CI＜1，表明两药联合应用有协同效应。FCM显示：雷帕霉素与顺铂单独应用即可促进细胞凋亡，凋亡率呈现明显的时间依从性，72h达到最大值；单用雷帕霉素凋亡率较低，且24h凋亡率与对照组比较无统计学意义（P＞0.05），其他各组与对照组比较均有统计学意义（P＜0.05），两药联合应用时其诱导凋亡能力明显增强。单用雷帕霉素作用24h可引起SKOV3细胞G1期延长，但与对照组比较无统计学差异（P＞0.05），S期与G2期细胞逐渐减少。随作用时间的延长，细胞G1期比例逐渐增加，联合顺铂作用效果明显高于单独用药组，各组与对照组比较均有统计学差异（P＜0.