三、胃上皮细胞向诱导内胚层祖细胞重编程的机制研究由于在我们的重编程体系中,小分子化合物和滋养层细胞这两个因素是不可或缺的,因此我们首先对小分子可能的作用机制进行了探究,发现TGF-β信号通路的抑制是必须的,也是能够保证重编程成功的最少小分子组合,也就是说TGF-β信号通路抑制介导的上皮特性的维持在重编程的过程中是必须的可能,然而我们发现早期的上皮间质转换(EMT)和随后的间质上皮转换(MET)也存在于重编程的过程中。重编程的另一个关键因素是滋养层细胞的作用,对滋养层细胞的分泌蛋白表达谱分析显示促进细胞周期加速的蛋白高表达,在滋养层细胞的作用下hGECs细胞周期明显加快,提示了细胞周期的加速有助于重编程的发生。此购买Metformin外Wnt信号通路被证明在重编程的过程中处于激活的状态,抑制Wnt信号通路明显的抑制或取消了重编程。因此,TGF-β信号通路的抑制,细胞周期的促进及Wnt信号通路的激活等多因素协同作用是重编程发生的重要机制。综上所述,我们首次成功的实现了小分子化合物介导谱系重编程从胃上皮细胞中获取内胚层祖细胞,3-deazaneplanocin A体内全面证实了所获得细胞的内胚层祖细胞属性并揭示了胃上皮细胞向内胚层祖细胞转换过程中的具体机制。
目的:芹菜素是一种可食用性植物黄酮类化合物,对癌症预防和治疗方面有着重要的作用。大量数据证实,芹菜素可以抑制多种肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和转移,但具体机制尚未明确。β-catenin是结肠癌发生发展过程中一个关键的原癌基因,并且β-catenin能促使肿瘤细胞增殖以及细胞迁移。

人恶性胶质瘤细胞株,SHG-44经常被用于各种研究,其生物学性状稳定、易于培养。但是,人们对其基因调控、细胞膜上离子通道的特性及调控等方面所做的研究还鲜有报道。鉴于SHG-44细胞株上膜离子通道及c-fos基因表达调控对肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭、凋亡等重要生物学特性具备的重要意义,进行了此研究。研究共分三个部分。 第一部分他莫昔芬对SHG-44人胶质瘤细胞那个的增殖抑制作用研究 方法:1、复苏并培养SHG-44胶质瘤细胞。显微镜观察应用不同浓度他莫昔芬后SHG-44细胞生长情况及形态的变化。2、免疫组化检测细胞PKCα及ER表达。结果判断:PKC阳性为SHG-44细胞的细胞质中出现棕黄色染色,ER阳性:SHG-44细胞的细胞核中出现棕黄色染色。3、以MTT法检测应用浓度依次为0、2、4、那个6、8、10、15μmol/L的他莫昔芬培养1~3d后SHG-44细胞的生存率。4、以流式细胞仪检测应用浓度为0、2、4、6μmol/L的他莫昔芬培养2d后SHG-44细胞的凋亡情况及细胞周期情况。5、运用统计软件spss12.0对结果进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用q检验。 结果: 1、SHG-44细胞株selleck产品在DMEM培养液中生长良好,在倒置显微镜下可见细胞呈长梭形,核异形性常见。细胞的冻存与复苏对细胞生物学特性没有影响。加入他莫昔芬后,细胞折光性变弱,轮廓增强,突起减少,胞质中出现大量颗粒,细胞之间的间隙明显增大,细胞变老,脱落,生长受到抑制。正常对照细胞生长良好。2、加入PKCα抗体的SHG-44细胞的细胞质中出现棕黄色染色,提示细胞中含有PKC,而加入ER抗体的细胞中未出现染色,提示SHG-44细胞中无ER成分。

研究发现的激光激酶抑制剂的主要活性骨架分为四个部分A-D即(A)含有1,4,5,6.四氢吡咯并[3,4-c]吡唑核心：(B)含有吡咯并[2,3-b]嘧啶核心： (c)含有喹啉的核心和(D)含有的2=苯胺基-二氨基嘧啶核心。基于上述我们合成了一系列二芳基吡唑苯甲酰胺类衍生物,并对其进行了生物活性性评价。实验表明,人部分化合物具有而且较强的抗肿瘤活性,其中化合物10e活性最强,其对HCT116和MCF.7的IC50分别为0.39±0.06μM和0.46±0.04μM,(阳性对照VX-680对HCT116和MCF-7的IC50分别为0.30±0.03μM和0.38±0.02μM)。体外抗Aurora-A试验表明10e具有最强的蛋白激Bcl-2抑制剂酶抑制活性(IC50=0.16±0.03 μM)。计算机模拟对接研究表明化合物10e紧紧的嵌入到蛋白的活性结合u袋。Weston blot实验表明10e对HCT116具有良好的肿瘤抑制活性。由此推测,化合物10e可能是一类具有较好研究前景的以Aurora A为抗肿瘤靶点的先导化合物
Aurora激酶PLX4032临床试验是一类新型的苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶,参与调节细胞的有丝分裂过程,并对纺锤体检测点进行有效地精确监测,中止错误的细胞周期进程并完成修复过程,是目前研究和开发抗肿瘤药物的重要靶标之一。本论文以Aurora激酶为靶点,以VX-680为先导化合物,利用合理药物设计,通过两步反应简捷高效地合成了16个2,4,5-三取代嘧啶类目标化合物,并对其体外细胞毒性及对肿瘤细胞循环周期的影响等进行了研究。

实验分为2.7mg/mlALA PLGA NPs PDT组，0.1mM ALA PDT组,1mM ALA PDT组，2.7mg/ml ALAPLGA NPs避光组，0.1mM ALA避光组，1mM ALA避光组，单纯红光组，以及阴性对照组。孵药24h后，采用635nm He-Ne激光器（波长635nm,8J/cm2点击此处，8.6mW/cm~2）照射，再24h后MTT法观察结果。 结果⑴以荧光胺衍生化HPLC-荧光法测定ALA，ALA在0.0475～47.5g/ml浓度范围内线性关系良好。回收率为99.2％，RSD为1.46%。⑵采用超声-复乳法制得的ALAPLGANPs冻干粉平均粒径为65.6±26nm,Ibrutinib包封率为65.8±7.2%，载药量为0.62±0.27%，6h左右释药量为80%，纳米粒大小均匀，表面光滑。ALA在PLGANPs中结构无变化，但形成了新的物相。⑶ALA PLGA NPs与鳞癌A431细胞共孵育后，大量ALAPLGANPs被鳞癌细胞吸收，且主要集中于细胞质中。ALAPLG什么ANPs或ALA与鳞癌A431细胞敷育1-24h，产生的原卟啉IX荧光强度随时间递增。孵育6h时，2.7mg/mlALAPLGANPs（相当于0.1mMALA）生成的原卟啉IX荧光强度高于各浓度的游离ALA，与0.1mMALA相比有统计学差异（P0.01）。孵育24h时，2.7mg/mlALAPLGANPs产生的原卟啉IX荧光强度大于0.1mM ALA（P 0.01）。

流式细胞仪检测结果显示即使在c-Met相对低表达的Huh7细胞中，c-Met+细胞的比例也达到了75.6%，而在HepG2、SMMC7721和MHCC97-H细胞中比例更高。 2. HGF能够有效促进c-Met蛋白发生磷酸化，从而激活c-Met信号通路，引起其下游Erk、Akt、Stat3通路的活化。 3. HGF/c-Met信号通路激活后，MHCC97-H细胞发生了EAkt抑制剂MT样形态和表型变化，Huh7和MHCC97-H细胞的迁移、侵袭、增殖能力均得到增强，而c-Met特异性抑制剂PHA665752能够抑制细胞的上述改变。 4. HGF/c-Met信号通路的激活增强了Huh7和MHCC97-H细胞的自我更新能力，促进了细胞在悬浮状态下克隆球的形成，干细胞相关基因（c-Myc、Klf4、Oct4、Wnt7B）及LC所以SCs相关标志物（CD90、ABCG2、EpCAM）呈不同程度的表达上调，流式细胞仪检测的结果显示MHCC97-H细胞在HGF/c-Met通路激活后CD90+LCSCs和SP细胞的比例增加。 结论： 1. c-Met是一种在肝癌细胞系中广泛表达的具有酪氨酸激酶活性的表面受体，并且c-Met信号通路的激活会引起其下游级联放大的细胞内多条重要信号通Decitabine溶解度路的活化。 2. HGF刺激引起的c-Met通路激活促进了肝癌细胞EMT的发生，增强了肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力。 3. HGF刺激引起的c-Met通路激活增强了肝癌细胞的自我更新能力和干细胞样特征，使细胞中的某些干细胞相关基因表达升高，并且上调了肝癌细胞中LCSCs的比例。 总之，众多信号通路参与了LCSCs的调控，而我们的研究发现HGF/c-Met信号通路的异常激活对促进肝癌细胞的恶性行为和干细胞样特征发挥了重要作用。

在大鼠给予VBE-6后的累计排泄率试验中,三个代谢产物经尿液的排泄率共计48.8%,共4.38%经粪便排泄。仅有少量VBE-6(0.34%)以原型药物形式经粪便排泄。 对VBE-6及其三个代谢产物进行的体外乳腺癌MCF-7细胞抗肿瘤试验结果表明,三个代谢产物均保持较强的抗肿瘤活性,与母药VBE-6活性相近selleck化学药品液面控制。 因此,本课题完成了VBE-6的合成制备工艺建立,并对其大鼠体内进行了研究,结果表明,与VBE-1相比,大鼠口服给药VBE-6后,在体内不经历代谢失活历程,体外抗人乳腺癌MCF-7细胞试验中代谢产物依然保持较强的抗肿瘤活性。本课题的代谢数据将对VBE-6的临床前药理学及毒理学等并且方面的研究起到很好的辅助及补充作用,并为VBE-6抗肿瘤机制的深入研究提供基础,对开发应用前景良好的候选药物VBE-6具有深远的意义。
小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NS什么CLC)相比其生物学行为更差,倍增时间短,病情发展迅速,易早期转移。虽然小细胞肺癌对放化疗敏感性较高,但只有小部分患者可通过综合治疗获得长期生存。如何在SCLC治疗领域有所突破一直是研究者们面临的难题。纵观肿瘤治疗的发展历史,SCLCC恐怕是其中为数不多的一种几十年都没有重要进展的肿瘤。但人们始终没有停止对SCLC化疗新药、靶向治疗、免疫治疗等领域的积极探索。

ABT-737对HBL-100，MDA-MB-468，MCF-7，MDA-MB-231，MDA-MB-435这5个乳腺癌细胞系有较强的杀伤效果。ABT-199对HBL-100，MDA-MB-468，MCF-7，MDA-MB-435这4个乳腺癌细胞系有一定杀伤作用。Tw-37对HBL-100和MDA-MB-468有较好的杀伤效果，对MCF-7和MDA-MB-435有适度的杀伤效果点击此处。 为了进一步研究Bcl-2家族抗凋亡成员抑制剂对肿瘤细胞增殖的影响，我们在MDA-MB-231和MCF-7细胞系中进行了克隆形成实验，使用的药物浓度依次是0.1μM，1μM，6μM。随着ABT-737药物浓度的增加，两种细胞系形成克隆的能力逐渐减弱，但是ABT-199和Tw-37在高浓度作用下也没有影响两种细胞系形成克隆的能力。化疗药物对这两种细胞系FK228的作用很明显，严重影响了其克隆形成能力。这一实验结果与MTT实验相符。ABT-737对乳腺癌细胞系杀伤效果很明显，但是ABT-199并没有理想的效果，这说明在乳腺癌细胞系中,Bcl-2家族抗凋亡成员具有功能的冗余性，当Bcl-2被抑制时，乳腺癌细胞可以通过其他的Bcl-2家族抗凋亡成员来行使Bcl-2的功能。ABT-737只能抑制Bcl-2，Bcl-xEpigenetics合成 Library mousel，Bcl-w，但是不能抑制Mcl-1的活性。实验数据显示，在乳腺癌细胞系中，只有当ABT-737浓度大于1μM时，其作用效果才逐渐显现，这可能就是因为这些乳腺癌细胞系中Mcl-1蛋白的弥补作用。 TUNEL实验的数据证明，ABT-737确实是通过细胞凋亡途径引起了乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7的死亡，由于ABT-737直接与Bcl-2，Bcl-xl和Bcl-w蛋白结合，所以，加入药物后2小时内，细胞快速进入凋亡状态。

DCP的表达与肿瘤具有较高的恶性程度相关。结合我们课题组前期有关DCP促进HCC增殖、侵袭和转移的实验结果,已有的证据提示DCP在HCC的演进中可能发挥了重要的促进作用。 第二节.HCC组织中DCP与c-Met共表达及临床意义 目的：探讨DCP和c-Met在人HCC组织中表达是否具有一致性及其临床意义 方法：选取153例行手术切除治疗的单发性HCC患者,收集并统计患者临BLU9931浓度床病理学因素包括年龄、性别和术后HCC复发状况。免疫组化法分别测定肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织中DCP和c-Met表达状况。采用χ2检验分析组织中DCP和c-Met存在的相关性以及DCP/c-Met表达与HCC复发的关系。 结果：DCP在肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织中的阳性表达率分别为63.4%(97/153)和13.1%(20/154),c-Met在selleck抑制剂肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织中的阳性表达率分别为66.7%(102/153)和28.8%(44/153)。DCP和c-Met在肿瘤组织中的阳性表达率均显著高于其在癌旁非肿瘤组织中的表达率。在肿瘤组织中,51%(78/153)的病例DCP和c-Met表达同时为阳性,20.9%(32/153)的病例二者的表达同时为阴性。在非肿瘤组织中,7.2%(11/NSC 683864研究购买153)的病例DCP和c-Met表达同时为阳性,65.4%(100/153)的病例二者的表达同时为阴性。在整个组织标本中,58.2%(89/153)的病例DCP和c-Met表达同时为阳性,19.6%(30/153)的病例二者的表达同时为阴性。χ2检验表明DCP和c-Met在HCC标本中的存在具有相关性。c-Met在肿瘤组织中的表达与术后HCC复发有关。c-Met结合DCP比c-Met单独对预测术后HCC复发的意义更显著。

金属蛋白酶是活性中心含有金属离子的蛋白酶的总称,肿瘤生物学研究表明,金属蛋白酶家族中的两类锌离子依赖性金属蛋白酶：组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylases, HDACs)和氨肽酶N (Aminopeptidas N, APN/CD13)与肿瘤的发生发展过程关系密切。在肿瘤细胞中,HDACs的过度表达导致组蛋白与DNA结时间合力增强,从而引起染色体异构,影响基因转录。与此同时,过度表达的HDACs能抑制细胞周期抑制因子p21WAF1/CIP1的表达,降低肿瘤抑制因子p53的稳定性,并且促进肿瘤细胞中的缺氧诱导因子(Hypoxia induciblefactor-1,HIF-1)和血管内皮细胞生长因子(Vascular endoth购买Venetoclaxelial growth factor, VEGF)的表达。研究发现,HDACs抑制剂(HDACi)通过抑制HDACs的酶活性,能有效抑制肿瘤细胞增殖,导致细胞周期阻滞,并诱导细胞凋亡。因此,HDACs已经成为抗癌药物设计的新靶标,HDACi也已成为治疗肿瘤的有效化疗药物。APN为锌离子依赖性的Ⅱ型膜结合金属蛋因为白酶,参与激活生物活性肽、降解细胞外基质、参与抗原递呈等多种生物学过程。研究发现APN在肿瘤细胞表面高度表达,在肿瘤细胞的侵袭与转移过程中发挥着重要作用。APN通过降解细胞外基质,促进多种生长因子的释放,加速肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞侵袭与转移。此外,APN刺激血管内皮细胞释放肿瘤微血管形成相关因子,促进肿瘤新生血管的形成。因此,APN抑制剂(APNi)也有望发展成为一类新型的抗肿瘤药物。

此后,MALAT1又被证实与肝癌、宫颈癌、膀胱癌及胆囊癌等肿瘤的进展相关。然而,其在卵巢癌中的作用尚无研究涉及。 本研究分为两个部分。在第一部分中,我们利用基因芯片比较了具有不同侵袭潜能的卵巢癌细胞系的lncRNA表达谱,证实了lncRNA在具有不同侵袭潜能的卵巢癌细胞系中存在差异表达。在第二部分中,我们检测了MALAT1表达下调更多对卵巢癌细胞生物学行为的影响,发现MALAT1表达下调能够明显抑制卵巢癌细胞的增殖和转移,且MALAT1表达下调可导致多个与细胞增殖、转移和/或凋亡等生物学过程相关的基因的差异表达。 第一部分长链非编码RNA在具有不同侵袭潜能的卵巢癌细胞系中表达谱的变化 目的 比较具有不同侵袭潜能的卵巢癌细胞系的lncRSAHA HDAC半抑制浓度NA表达谱,筛选可能与卵巢癌转移相关的lncRNA,为后续研究奠定基础。方法 1.Transwell侵袭实验验证人卵巢癌细胞系SKOV3及其亚系SKOV3.ip1的体外侵袭能力。 2.基因芯片检测两个细胞系lncRNA表达谱的差异。 3.选取9个差异表达的lncRNA进行qRT-PCR验证。 结果 1.与selleck screening library其母系细胞相比,SKOV3.ip1细胞的体外侵袭能力明显增强。 2.芯片共检出4,956个lncRNA,其中上调及下调2倍及以上的lncRNA分别有583个及578个。 3.7个lncRNA的qRT-PCR结果与芯片结果相符。 结论 lncRNA在具有不同侵袭潜能的卵巢癌细胞系中存在差异表达,这一结果提示某些lncRNA可能在卵巢癌转移中发挥一定的作用,但其具体功能尚需进一步的研究证实。